高效液相色譜儀與聯用技術在藥物分析及藥物質量控制中的應用

黃潔瓊

（蘇州大學醫學部藥學院，江蘇 蘇州 215006）

高效液相色譜法是現代藥物分析與藥物質量控制的一種重要手段。高效液相色譜法引用了氣相色譜的理論，用高壓輸送流動相，用小粒徑的填料填充色譜柱，使得柱效率遠高于經典液相色譜。色譜柱后連有高靈敏度的檢測器，色譜柱分離出的樣品組分和含量被轉化成可供檢測的信號，可以對樣品進行定性和定量分析以及各組分分離情況的判斷，因此檢測器的好壞直接決定藥物分析的準確度和靈敏度。筆者查閱相關文獻，對高效液相色譜儀與不同的檢測器聯用技術及其在藥物分析與藥物質量控制中的應用做一小結。

1 高效液相色譜儀聯用二極管陣列檢測器（HPLC-DAD）

二極管陣列檢測器是一種光學多通道檢測器，20世紀80年代開始使用。其原理是由光源發出的光線經過樣品池，然后經分光技術，使所有波長的光在檢測端同時被檢測，得到時間、波長和光強度的三維譜圖。在實際應用中，二極管陣列檢測器可以同時檢測出多個波長的色譜圖，寬譜帶檢測和計算不同波長的相對吸光度，所以一次進樣就能得到樣品所有組分的信息，而每個組分都有全波段的光譜吸收圖，從而對樣品進行定性、定量分析。劉欣榮等[1]采用高效液相色譜儀聯用二極管陣列檢測器對羥基喜樹堿人血清白蛋白納米顆粒中的藥物含量進行了測定，該方法準確可靠、簡單易行。林佶等[2]采用高效液相色譜儀聯用二極管陣列檢測器對三七中人參皂苷Rb1的純度進行了鑒定，選擇203nm作為DAD檢測人參皂苷Rb1的波長，用外標法準確測得三七樣品中人參皂苷Rb1的平均含量。

2 高效液相色譜儀聯用熒光檢測器（HPLC-FLD）

熒光檢測器也是高效液相色譜儀常用的一種檢測器，用于檢測能產生熒光的化合物。熒光檢測器由激發光源、激發光單色器、樣品池、發射光單色器、和檢測發光強度的光電檢測器組成。光源發出的光經過激發光單色器后得到所需波長的激發光，激發光通過樣品池被熒光物質吸收，熒光物質受激發后發射熒光，經發射光單色器后由光電檢測器接收。熒光檢測器選擇性高，只對熒光物質有響應；靈敏度也高，最低檢出限可達10-12ug/ml，適用于多環芳烴及各種熒光物質的痕量分析，也可用于檢測不發熒光但經化學反應后可發熒光的物質。孫麗等[3]采用反相高效液相色譜聯用熒光檢測器，準確測定了維壓靜片中利血平的含量。

3 高效液相色譜儀聯用示差折光檢測器（HPLC-RID）

示差檢測器是根據折射原理設計的一種檢測器，可連續檢測樣品流路與參比流路間液體折光指數差值的檢測器。光從一種介質進入到另一種介質中時，由于兩種物質的折射率不同就會產生折射。當樣品組分和流動相的折光率不同時，就可被檢測。示差折光檢測器是一種濃度型檢測器，在一定濃度范圍內檢測器的響應信號與溶質濃度成正比，但其不適用于梯度脫洗。戴立波等[4]用高效液相色譜儀聯用示差折光檢測器建立了一種簡單、快速、準確分析肌醇的方法，能及時得到生產各個環節中肌醇質量分數的指標，可用于監測肌醇生成的整個過程。

4 高效液相色譜儀聯用蒸發光散射檢測器（HPLC-ELSD）

20世紀80年代澳大利亞的Union Carbide研究實驗室的科學家研制開發第一臺ELSD，并將其轉化為商品。此后，通過不斷改進，ELSD的操作性能得到不斷提高。現在ELSD越來越多的作為通用型檢測器用于高效液相色譜、超臨界色譜和逆流色譜中。蒸發光散射檢測器的檢測原理是先將柱洗脫液霧化形成氣溶膠，然后在加熱的漂移管中將溶劑蒸發，最后剩下的不揮發性溶質顆粒在光散射檢測池中得到檢測。蒸發光散射檢測器不需要樣品含有發色基團即可檢測揮發性低于流動相的任何樣品。蒸發光散射檢測器靈敏度比示差折光檢測器高，對溫度變化不敏感，基線穩定，適合與梯度洗脫液相色譜聯用。碳水化合物、類脂、脂肪酸和氨基酸、藥物以及聚合物等的檢測均可使用蒸發光散射檢測器。段瑞等[5]用高效液相色譜儀聯用蒸發光散射檢測器測定了紅藥片中三七皂苷R1及人參皂苷Rg1、Re、Rb1的含量。該方法準確，分離效果好，無干擾，可用于紅藥片的質量控制。劉亞風等[6]采用超高效親水作用色譜聯用蒸發光散射檢測器測定了牛磺酸顆粒和牛磺酸滴眼液中牛磺酸的含量。該方法省去了復雜的樣品預處理，縮短了牛磺酸的分析時間，提高了檢測工作效率。

5 高效液相色譜儀聯用電化學檢測器（HPLC-ECD）

電化學檢測器可檢測具有電活性的物質，包括極譜檢測器、庫侖檢測器、安培檢測器和電導檢測器等。前三種統稱為伏安檢測器，用于具有氧化還原性質化合物的檢測，電導檢測器主要用于離子檢測。電化學檢測器靈敏度很高，尤其適用于痕量組分分析，缺點是干擾比較多，電極壽命有限，對溫度和流速的變化比較敏感。李海英等[7]將高效液相色譜儀—電化學檢測器聯用技術用于硫酸阿奇霉素含量的測定及有關物質概況的分析，取得了可喜的結果。

6 高效液相色譜儀聯用質譜檢測器（HPLC-MSD）

質譜檢測器是一種靈敏度高、選擇性好、指紋性強的通用型檢測器，可用于微量或痕量分析。高效液相色譜儀聯用質譜檢測器是一種高度自動化、常規化的分析手段，發揮了色譜分離的長處和質譜定性結構分析的優勢，在中藥色譜指紋圖譜研究中發揮著重要作用。蔡爽等[8]將超高效液相色譜聯用質譜用于2型糖尿病大鼠糞樣代謝物指紋圖譜研究，該研究有利于糖尿病的早期診斷。徐娟等[9]用超高效液相色譜聯用質譜法同時檢測口腔衛生用品中的5種硝基咪唑類藥物。該方法操作簡單，結果穩定可靠，為監管部門規范管理口腔衛生用品市場提供了依據。

總之，高效液相色譜法吸取了經典液相色譜和氣相色譜兩種方法的優點，其檢測器也從固定單波長紫外檢測器發展到可變波長紫外一可見光檢測器、示差析光檢測器、熒光檢測器、蒸發光散射檢測器、電化學檢測器、質譜檢測器以及核磁共振檢測器等。隨著科學技術的進步，檢測器會向著靈敏度高、選擇性好、適應范圍廣等方向發展，檢測器的聯用技術也逐步完善。將不同的檢測器聯用可以在一次進樣分析中得到更多、更準確的信息，這使高效液相色譜檢測技術在藥物分析與藥物質量控制方面具有不可替代的作用。

［1］劉欣榮,王龍,盧懿,等.HPLC法測定羥基喜樹堿人血清白蛋白納米顆粒中的藥物含量[J].沈陽藥科大學學報,2009,1:48.

［2］林佶,段志敏,萬玉萍,等.HPLC二極管陣列檢測器定量分析三七中人參皂苷Rb1[J].實用預防醫學,2004,12(6):1273.

［3］孫麗,游強,聞京偉.中國藥品標準[S].2003,4(6).

［4］戴立波,李建橋,胡清.采用帶示差折光檢測器的高效液相色譜法檢測肌醇[J].化學工業與工程技術,2006,8.

［5］段瑞,沙冬旭,楊文.沈陽藥科大學學報,2008,5:376.

［6］劉亞風,祝偉霞,袁萍,等.超高效親水作用色譜—蒸發光散射檢測牛磺酸顆粒和牛磺酸滴眼液中牛磺酸的含量[J].分析試驗室,2011,3:101.

［7］李海英,陳悅.西北藥學雜志,2003,8:147.

［8］蔡爽,霍韜光,徐靜華,等.超高效液相色譜—質譜用于2型糖尿病大鼠糞樣代謝物指紋圖譜研究[J].沈陽藥科大學學報,2009,10:811.

［9］徐娟,陳健,邵琳智,等.超高效液相色譜法同時檢測口腔衛生用品中的硝基咪唑類藥物[J].色譜,2011,5:450.