正交試驗優選藍莓抗疲勞口服液提取工藝

胡一冰，聶忠莉，謝貞建，劉 濤，吳曉臘

(成都大學 生物工程學院，四川 成都 610106)

0 引 言

藍莓又稱越橘，藍漿果，為杜鵑花科越橘屬植物，營養豐富，藥用價值高，除含有花青素、SOD、黃酮類化合物、酚類等多種活性成分，還含有多種人體所需的維生素、微量元素、氨基酸等物質，具有抗衰老、增強機體免疫力、抗疲勞、降低血糖、保護視力、抗腫瘤等多種功能作用［1－3］.通過對相關文獻資料查閱與比對分析發現，利用藍莓與中藥配伍組成保健食品的還不多見，為了更好地開發藍莓，本實驗選擇藍莓、白術、當歸進行配伍組成抗疲勞口服液，并對其提取工藝進行了研究.

1 材料與儀器

1.1 試劑與儀器

1.1.1 試 劑.

實驗所用試劑包括:苯酚、濃硫酸、葡萄糖、乙醇、甲醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉等均為分析純;蘆丁對照品由中國藥品生物制品檢定所提供;實驗用水為純凈水.

1.1.2 儀 器.

實驗所用儀器包括:UV－3200S 型紫外分光光度儀(上海美譜達儀器有限公司);LD2000－1 型電子天平(沈陽龍騰電子有限公司);DHG－9246 型恒溫鼓風干燥箱(上海精宏實驗設備有限公司);RE－52B 型旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠);HH－4型數顯恒溫水浴鍋(常州澳華儀器有限公司).

1.2 藥 材

實驗所用藥材:炒白術、當歸購自成都北京同仁堂藥店，藍莓購自成都伊藤洋華堂(春季藍莓).

2 方 法

2.1 藍莓抗疲勞口服液正交試驗設計

在單因素試驗基礎上采用正交試驗優選提取工藝，采用L9(34)正交試驗.分別以多糖的含量、總黃酮的含量為指標，對煎煮時間、煎煮次數、配伍比、料液比4 個因素，分別設3 個水平進行考察.其中，藍莓∶ 白術當歸中，白術當歸比為5∶ 1.以上因素水平見表1.

表1 正交法提取藍莓抗疲勞口服液的因素與水平表

2.2 藍莓抗疲勞口服液制備

選擇新鮮、成熟度好，并剔除病蟲害、變色、變質等不合格藍莓，在流動水中洗凈、瀝干.白術、當歸按物料比準確稱取，并按表1 正交試驗設計要求加水煎煮提取.煎煮前，白術、當歸先用適量水浸泡30 min，煎煮液用4 層紗布濾過，合并，濃縮至120 mL.制得9 份煎煮液，冷卻后置于冰箱冷藏備用.

2.3 多糖含量測定方法

2.3.1 多糖標準曲線的制備.

精密稱取105 ℃烘干至恒重的標準葡萄糖100.4mg 于100 mL 容量瓶中，加水至刻度、搖勻，吸取此液10 mL 于100 mL 容量瓶中，搖勻，制得濃度為0.1004 mg/mL 葡萄糖溶液.

精密量取葡萄糖標準溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分別置于10 mL 刻度試管中，依次加水至2 mL，搖勻.然后各加入5%苯酚溶液1 mL，濃硫酸5 mL，振搖5 min，于沸水浴中加熱15 min，冷卻.以2 mL 蒸餾水作空白.在波長490 nm 處測定吸光度.以吸光度值為縱坐標(Y)，質量濃度為橫坐標(Xmg/mL)進行回歸，回歸方程為，

y=50.959x+0.017，R2=0.9980.

2.3.2 樣品含量測定.

分別精密吸取樣品溶液2 mL，按“2.3.1”項下方法測定，并用回歸方程計算多糖含量［4］，計算式為，

2.4 蘆丁含量測定方法

2.4.1 蘆丁標準曲線的制備.

精密稱取在120 ℃干燥至恒重的蘆丁對照品約100 mg，置50 mL 容量瓶中，加甲醇適量，置水浴上微熱溶解，放冷至室溫后用甲醇定容至刻度.精密吸取10 mL，置100 mL 容量瓶中，加水至刻度，搖勻，制得2 mg/mL 對照品溶液.

精密量取對照品溶液0、2、3、4、5、6、7 mL，分別置于25 mL 容量瓶中，各加水至7 mL，5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加4%氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，以不含蘆丁相應試劑為空白，在波長510 nm 處測定吸光度.回歸方程為，

y=10.841x+0.0016，R2=0.9997.

2.4.2 樣品含量測定.

分別精密吸取樣品溶液7 mL，按2.4.1 項下方法測定，并用回歸方程計算黃酮含量［5］，計算式為.

3 結果與分析

正交試驗結果統計與方差分析如表2、3、4 所示.

方差分析的結果表明:以多糖提取率為指標，煎煮時間、煎煮次數和料液比對多糖提取率有一定影響，影響因素的順序為D ＞B ＞A ＞C.綜合考慮多糖提取率及節省能源等因素，確定最優工藝為A2B3C1D2，即煎煮時間2 h，煎煮次數3 次，藍∶ 白術當歸比例為2∶ 1，其中白術與當歸之比為5∶ 1，料液比1∶ 15.以總黃酮提取率為指標，煎煮各因素影響作用不大，影響因素的順序為C ＞A ＞D ＞B，即藍莓白術當歸比例＞煎煮時間＞料液比＞煎煮次數.綜合考慮總黃酮提取率及直觀分析等因素，確定最優工藝為A3B2C1D3，即煎煮時間3 h，煎煮次數2次，藍∶ 白術當歸比例為2∶ 1，其中白術與當歸之比為5∶ 1，料液比1∶ 20.

表2 藍莓抗疲勞口服液提取L9(34)正交實驗結果

表3 藍莓抗疲勞口服液多糖提取率的方差分析

表4 藍莓抗疲勞口服液總黃酮提取率的方差分析

4 討 論

中藥煎煮過程中，藥材直徑大小、粉碎程度會影響藥材有效成分溶出.為了保證和新鮮藍莓處理的一致性，在煎煮前，本實驗對所有原料進行了粗略剪碎.原料中水煎煮涉及較多有效成分為多糖和黃酮類，多糖常采用水提工藝，通過正交試驗結果和方差分析篩選出有顯著性差異的優化條件.有報道指出，黃酮類成分多采用醇提工藝，熱水提的工藝得到黃酮較醇提低［6］.為了兼顧多糖提取，本研究選取水提方法.雖然方差分析顯示水提條件對黃酮成分優化影響沒有顯著性，但是后期的抗疲勞藥理實驗證實是有顯著性差異的［7］.因此，在實驗中，保留水提黃酮的制備工藝條件.同時，本研究探討了藍莓抗疲勞口服液藍莓與白術當歸之間，以及白術與當歸之間的比例，取得了一些研究價值，為下一步的深入研究提供了基礎數據.

［1］王瑩，王鴻，蔡東聯.藍莓及其提取物保健功效的研究進展［J］.醫學研究雜志，2013，42(7):180－182.

［2］趙秀玲.藍莓的成分與保健功能的研究進展［J］.中國野生植物資源，2011，30(6):19－23.

［3］鞠寶兆.中藥抗疲勞機制及方藥的篩選規律［J］.中國臨床康復，2004，8(18):3656－3657.

［4］呂培霖，晉玲，鄭明霞.不同產地款冬花多糖含量測定［J］.現代中西醫結合雜志，2009，18(15):1758－1759.

［5］陳雪英，霍金海，劉芳萍.正交試驗法優選丁香葉中總黃酮提取工藝［J］.東北農業大學學報，2013，44(9):144－148.

［6］涂華，陳碧瓊，張燕軍.天然類黃酮物質的提取工藝研究進展［J］.中國實驗方劑學雜志，2011，17(6):277－279.

［7］李倩，羅祖良，楊小麗，等.中藥質量控制方法研究述評［J］.中醫學報，2012，27(4):448－451.