HPLC法測定曲安奈德新霉素貼膏中醋酸曲安奈德的含量

胡守蓮 邱棟樑

河南省信陽市食品藥品檢驗所，河南信陽 464000

HPLC法測定曲安奈德新霉素貼膏中醋酸曲安奈德的含量

胡守蓮 邱棟樑

河南省信陽市食品藥品檢驗所，河南信陽 464000

目的建立曲安奈德新霉素貼膏中醋酸曲安奈德含量的HPLC測定方法。方法采用反相高效液相色譜法，使用DIONEX Acclaim 120 C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱，以甲醇-水（60∶40）作為流動相，檢測波長240nm，流速1.0mL/min，柱溫為30℃。結果醋酸曲安奈德在0.05～0.50μg范圍內線性較好（r=0.9999）,平均回收率為98.09%（RSD為0.73%）。結論該方法快速、簡便、可靠、準確度高、重復性好，處方中其他成分對測定亦無干擾，分離效果好，可用于曲安奈德新霉素貼膏中醋酸曲安奈德含量測定。

曲安奈德新霉素貼膏；醋酸曲安奈德；HPLC；含量測定

曲安奈德新霉素貼膏是由上海衛生材料廠有限公司生產的復方制劑，其組份為醋酸曲安奈德、硫酸新霉素。用于局限性神經性皮炎、慢性濕疹。也可用于小面積的銀屑病。還有文獻報道本品用于治療結節性癢疹[1]和蕁麻疹[2]安全有效。醋酸曲安奈德為腎上腺皮質激素類藥，外用有抗炎、抗過敏及止癢作用，能消除局部非感染性炎癥引起的發熱、發紅及腫痛[3]。目前，曲安奈德新霉素貼膏在臨床上仍在廣泛使用，質量標準收載在國家藥品標準化學藥品地方標準上升國家標準第十一冊中，無含量測定，為了完善藥品質量標準，本文采用高效液相色譜法進行曲安奈德新霉素貼膏中醋酸曲安奈德含量的測定。

1 儀器與材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀（戴安Ultimate 3000，DAD檢測器）；電子天平（普利賽斯 92SM-202A-DR）。

1.2 材料

醋酸曲安奈德對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100125-200404），曲安奈德新霉素貼膏（上海衛生材料廠有限公司，批號：111103，120512 130714）。甲醇為色譜醇（SIGMA-ALDRICH，批號SHBC0053V），水為純化水，其他化學試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：DIONEX Acclaim 120 C18（250mm× 4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-水（60∶40），檢測波長：240nm[4]，流速：1.0mL/min，柱溫：30℃，進樣體積為10μL，理論板數不低于3000。

2.2 試驗溶液的制備

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱定醋酸曲安奈德對照品12.5mg，置100mL容量瓶中，加甲醇適量振搖使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備溶液。精密量取對照品貯備溶液5mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液，備用。

2.2.2 供試品溶液制備[5-6]取本品約1.5片（39cm2），除去蓋襯，剪成小塊，精密稱定，置50mL燒杯中，加入石油醚（60～90℃）35mL，振搖，使膏體溶解，溶液轉移至另一燒杯中，容器及殘渣以石油醚（60～90℃）洗滌三次（20mL、15mL、10mL），洗滌液并入上述溶液中，再用同體積的乙醇洗滌容器及殘渣，將乙醇洗滌液在邊攪拌下緩緩加入上述合并的石油醚液中，靜置，使沉淀完全，濾過，濾液置分液漏斗中，容器及沉淀以石油醚（60～90℃）-乙醇（1∶1）混合液洗滌3次（20mL、10mL、10mL），洗液并入分液漏斗中，加水20mL，振搖，靜置，取乙醇液，石油醚層用少量80%乙醇液洗滌3次，合并乙醇液，置水浴上蒸干，殘渣加甲醇適量，振搖使溶解，置25mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，經0.45μm微孔濾膜濾過，備用。

2.2.3 陰性供試品溶液制備 取不含醋酸曲安奈德的空白制劑樣品，照2.2.2項下供試品溶液制備方法制備，備用。

2.3 系統適用性試驗

分別吸取2.2項下的對照品溶液，陰性供試品溶液，供試品溶液各10μL注入色譜儀并記錄色譜圖（如圖1），醋酸曲安奈德峰與其它峰分離完全，陰性供試品溶液在醋酸曲安奈德出峰位置無干擾。

圖1 HPLC色譜圖

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關系 取2.2.1項下的對照品溶液分別進2μL、5μL、10μL、15μL、20μL，按上述色譜條件測定，以峰面積為縱坐標，以進樣量（μg）為橫坐標，繪制標準曲線（如圖2），線性回歸方程為：y=26.544x+0.1067（r=0.9999）。表明醋酸曲安奈德在0.05～0.50μg范圍內線性關系良好。

圖2 醋酸曲安奈德線性關系圖

2.4.2 穩定性試驗 取樣品（批號：111103）,按2.2.2項下方法制備。分別放置0h、4h、8h、12h、16h后進樣分析，記錄峰面積平均值為7.351（RSD為0.46%），表明待測成分在該溶液體系中16h內穩定。2.4.3 精密度試驗 精密吸取2.2.1項下對照品溶液10μL，連續進樣6次，結果測得醋酸曲安奈德峰面積的平均值為7.659（RSD為0.38%，n=6）。表明儀器精密度良好。

2.4.4 重復性試驗 取同一批號（111103）的樣品5份，按2.2.2項下方法制備，測定含量，結果表明方法重復性較好。見表1。

表1 重復性試驗

2.4.5 回收率試驗 取本品（批號：111103）適量，共9份，約為0.75片（19.5cm2）的80%、100%、120%，精密稱定，精密加入2.2.1項下醋酸曲安奈德對照品貯備溶液2.5mL，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，測定，計算回收率。測得醋酸曲安奈德平均加樣回收率（n=9）為98.09%，RSD=0.73%。結果表明，用高效液相色譜法測定醋酸曲安奈德含量準確度高。見表2。2.4.6 樣品含量測定 按2.2.2項下方法制備，用0.45μm濾膜濾過，取續濾液，按2.1項下色譜條件測定，計算含量。結果見表3。

表2 回收率實驗（n=9）

表3 樣品含量測定結果

3 討論

3.1 提取溶劑選擇

用2.2.2項下的方法以石油醚（60～90℃）為溶劑溶解膏體與以氯仿為溶劑溶解膏體進行比較，結果乙醇沉淀后，用氯仿為溶劑的樣品過濾后溶液不澄清，故選用石油醚（60～90℃）為溶劑溶解膏體。關于醋酸曲安奈德含量測定方法，目前文獻報道主要有高效液相色譜法[7-10]，紫外-可見分光光度法[11]，熒光分析法[12]。高效液相色譜法具有分離效能高、分析速度快、選擇性高和靈敏度高等優點，是質量控制中最為常用的一種分析方法。本研究建立的曲安奈德新霉素貼膏中醋酸曲安奈德含量測定方法，結果醋酸曲安奈德在（0.05～0.50）μg范圍內線性較好（r=0.9999）,平均回收率為98.09%，表明該方法快速、簡便、可靠、準確度高、重復性好，可用于曲安奈德新霉素貼膏中醋酸曲安奈德含量測定。為曲安奈德新霉素貼膏質量標準的進一步完善提高提供依據。

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Determination of triamcinolone acetonide acetate in triamcinolone acetonide and neomycin paste by HPLC

HU Shoulian QIU Dongliang

Xinyang Provincial Institute of Food and Drug Control,Xinyang 464000,China

ObjectiveTo establish a method for content determination of triamcinolone acetonide acetate in triamcinolone acetonide and neomycin paste by HPLC.MethodsThe experimental condition of the RP-HPLC method was as follows：DIONEX Acclaim 120 C18（250mm×4.6mm，5μm）,with linear gradient elution using methanol and water（60∶40）,The detected wavelength was 240 nm,the flow rate was 1.0 ml/min,The column temperature was at 30℃.ResultsThe fluocinolone acetonide curve was linear in the range of 0.05～0.50μg（r=0.9999）.The average recovery rate was 98.09% withRSDof 0.73%.ConclusionThe method is simple,reliable,accurate and It could be used in the determination of triamcinolone acetonide acetate in triamcinolone acetonide and neomyc in paste

Triamcinolone acetonide and neomycin paste;Triamcinolone acetonide acetate;HPLC;Determination

R927.2

B

2095-0616（2015）05-48-03

2014-11-22）