HPLC法同時測定三七花盤中人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3的含量

赫玉芳趙昱瑋司學玲劉 暢南敏倫▲焦連慶

1.吉林省中醫藥科學院，吉林長春 130012；2.修正藥業長春高新制藥有限公司，吉林長春 130012

HPLC法同時測定三七花盤中人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3的含量

赫玉芳1趙昱瑋1司學玲2劉 暢2南敏倫1▲焦連慶1

1.吉林省中醫藥科學院，吉林長春 130012；2.修正藥業長春高新制藥有限公司，吉林長春 130012

目的建立HPLC法同時測定三七花盤中人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3的含量。方法采用ACE 5 C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱；流動相：乙腈-0.05%磷酸溶液（32∶68）；流速：1.0mL/min；檢測波長：203nm；柱溫：25℃。結果人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3分別在10.25～143.50mg/L（r=0.9993，n=7）和10.94～153.16mg/L（r=0.9997，n=7）范圍內呈良好線性關系；平均回收率（n=6）分別為98.78%和98.17%。結論本測定方法簡便、快速、準確，為三七花盤的綜合開發利用提供了參考，有利于控制三七花盤的質量。

三七花盤；人參皂苷Rb1；人參皂苷Rb3；高效液相色譜法

三七花盤為五加科植物三七[Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen]果實成熟摘除后的花盤干燥品，又稱三七花梗。主產于云南，民間將其用作茶和食品，對治病和養生均有好處。目前為止，對三七根、莖葉、剪口、花研究較多，但是對三七花盤還沒有將其充分開發，對其化學成分及藥理作用的研究較少，是三七行業利用較薄弱的資源[1-3]。本研究首次利用高效液相色譜法確定三七主要皂苷類成分為人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3，二者的含量最高，同時確定了最佳的含量測定方法，為三七花盤作為新資源的開發利用提供理論依據及思路。同時為三七花盤的深加工，提高三七下游產業附加值具有重要意義，并且對三七產業持續發展有顯而易見的作用。

1 儀器與試劑

LC-10A高效液相色譜儀（日本島津）；Mettler-Toledo天平AB204-N（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3均購自中國食品藥品檢定研究院（批號分別為：110704-200718、111686-200801）；三七花盤采于云南文山、廣西德保、山東煙臺、貴州貴陽、山西咸陽，經吉林省中醫藥科學院趙全成教授鑒定為三七[Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen]的花盤；甲醇、乙腈磷酸均為色譜純，水為娃哈哈純凈水（20130817）。

2 試驗方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：ACE 5 C18（250mm×4.6mm，5μm）流動相：乙腈-0.05%磷酸溶液（32∶68）；流速1.0mL/min；檢測波長：203nm；柱溫：25℃；進樣量10μL。理論塔板數按人參皂苷Rb3計算應不低于5000。分離度達到要求（圖1）。

圖1 對照品溶液（a）與樣品溶液（b）高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

取精密稱取人參皂苷Rb1對照品10.25mg、人參皂苷Rb3，對照品10.94mg，精密稱定，置同一5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品貯備液。精密吸取混合對照品貯備液2mL，置10mL容量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得混合對照品溶液。取三七花盤樣品粉末（通過直徑為0.300mm篩），約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，加熱回流提取2h，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾得供試品溶液[4-8]。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：分別精密吸取2.2項下對照品溶液及供試品溶液，按上述色譜條件測定，在人參皂苷Rb1及人參皂苷Rb3色譜峰處，供試品溶液色譜具有相同保留時間的色譜峰。結果見色譜圖1。

線性關系考察：分別精密量取混合對照品貯備液，用甲醇將人參皂苷Rb1配制成質量濃度分別為10.25，20.50，41.00，61.50，82.00，102.50，143.50mg/L，將人參皂苷Rb3配制成質量濃度分別為10.94，21.88，43.76，65.64，87.52，109.40，153.16mg/L的系列對照品混合溶液，按上述條件進行測定。分別以人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb3質量濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標繪制標準曲線。人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb3的回歸方程分別為：y=1.11×104x-4.19×103（r=0.9993）；y=2.62×104x+1.25×103（r=0.9997）；人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb3的線性范圍分別為10.25～143.50mg/L和10.94～153.16mg/L。曲線線性良好。

精密度試驗：精密吸取對照品混合溶液，連續6次進樣，測定峰面積。人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb3的RSD分別為0.78%、0.99%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取同一產地藥材6份，按照供試品溶液制備方法進行制備，進樣分析，結果人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb3含量的RSD分別為1.2%、1.4%（n=6），表明本實驗方法重復性良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、10h，進行測定峰面積，人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb3的峰面積的RSD分別為1.3%、1.2%（n=5），說明了該溶液在8h內穩定性良好。

加樣回收試驗：精密稱取三七花盤（云南文山）6份各約0.5g，置于50mL錐形瓶中，分別精密加入濃度為8.342mg/mL人參皂苷Rb1對照品溶液1.0mL和濃度為11.230mg/mL人參皂苷Rb3對照品溶液1.0mL。制備供試品溶液，按上述色譜條件測定。實驗結果見表1。

2.4 樣品分析

將不同產地三七花盤樣品粉碎（通過直徑為0.300mm篩），按照供試品溶液制備方法制備，測定人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb3的峰面積并計算含量。結果見表2。

表2 不同產地人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3含量測定結果

3 討論

本研究曾以三七中指標性成分三七皂苷R1、人參皂苷Rg1和人參皂苷Rb1為指標性成分建立含量測定，但在實驗中發現，三七花盤中幾乎不含三七中的指標性成分三七皂苷R1及人參皂苷Rg1，人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3是三七花盤中含量較高兩種人參皂苷，可能也是主要的活性成分，與文獻報道三七花盤中主要含有人參皂苷Rb1、Rb3、Rc、Re，基本一致[9-10]，由于三七每年要留紅籽，而廢棄的花盤中皂苷含量較高，約為4%～5%，如果能加以利用，開發新的活性，具有一定的經濟效益和社會效益[11-14]。為了能更好的控制三七花盤的質量，本研究首次采用HPLC法對三七花盤中人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb3進行含量測定，為三七花盤質量標準的建立打下堅實的基礎。將需要進一步對三七花盤藥理活性進行研究，明確其應用價值，填補本資源利用空白。

表1 回收率實驗結果

[1] 黃躍進.三七傳統非藥用部位的開發利用探討[J].中醫藥信息，1999，（6）：19-20.

[2] 劉英，曲媛，崔秀明，等.文山、紅河三七花皂苷含量的比較研究[J].云南大學學報（自然科學版），2014，36（5）：734-739.

[3] 居乃香，孫靜.三七藥理作用的研究進展[J].北方藥學，2014，11（11）：90-91.

[4] 張冰，陳曉輝，畢開順.HPLC法同時測定三七花中人參皂苷Rb1和三七皂苷Fe的含量[J].藥物分析雜志，2010，30（2）：233-234.

[5] 周迎春，趙懷清，梁寧.高效液相色譜法同時測定三七總皂苷中人參皂苷Rg1、Re、Rb1與三七皂苷R1的含量[J].沈陽藥科大學學報，2003，20（1）：27.

[6] 沈嵐，馮怡，徐德生，等.反相高效液相色譜法測定三七花中人參皂苷Rb1的含量[J].時珍國醫國藥，2009，20（6）：1482-1483.

[7] 王隸書，程東巖，程東紅.HPLC法測定不同產地的三七葉中人參皂苷Rb3的含量[J].中國藥師，2003，6（5）284-285.

[8] 沙延淳，葉小輝，楊祝仁，等.三七止血片中三七含量測定[J].遼寧中醫藥大學學報，2013，15（8）：48-49.

[9] 魏均嫻.三七果梗皂甙成分的研究[J].中國中藥雜志1992，（2）：96.

[10] 魏均嫻.三七果梗皂甙成分的研究（續）[J].中國中藥雜志，1992，17（10）：611.

[11] 高瑛，翟永松，杜守穎，等.RP-HPLC法測定三七藥材中總皂苷含量[J].中國藥品標準，2011，12（5）：346.

[12] 高愛紅.三七的質量評價與鑒別[J].河北中醫雜志2004，26（9）：720.

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[14] 孫大雨，王德明，王彥波.不同季節及要用部位三七藥材的質量分析[J].黑龍江醫藥，2014，27（3）634-635.

Content determination of ginsenoside Rb1 and ginsenoside Rb3 in flower disc of Panax notoginseng by HPLC

HE Yufang1ZHAO Yuwei1SI Xueling2LIU Chang2NAN Minlun1JIAO Lianqing1

1.Academy of Chinese Medical Sciences of Jilin Province,Changchun 130012,China;2.Xiuzheng Pharmaceutical Group Changchun High Tech Pharmaceutical Co.Ltd.,Changchun 130012,China

ObjectiveTo establish a high performance liquid chromatographic(HPLC)method for simultaneous detection of ginsenoside Rb1 and ginsenoside Rb3 in flower disc of Panax notoginseng.MethodsACE5 C18column (250mm×4.6mm,5μm)was used with a mixture of acetonitrile-0.05% phosphoric acid(32∶68,V:V)as the mobile phase.The flow rate was 1.0mL/min,the detection wavelength of 203nm,the column temperature of 25℃.ResultsThe linear range of ginsenoside Rb1 and ginsenoside Rb3 were 10.25～143.50mg/L(r=0.9993,n=7)and 10.94～153.16 mg/L (r=0.9997,n=7)respectively.The average recovery rates were 98.78% and 98.17%,respectively.ConclusionThe method is simple,accurate and sensitive with good reproducibility.It can provide references for resources development and be used for quality controlling of flower disc of Panax notoginseng.

Flower disc of Panax notoginseng;Ginsenoside Rb1;Ginsenoside Rb3;HPLC

R284

B

2095-0616（2015）05-42-03

2014-12-29）

吉林省科技發展計劃重大項目（20086042）。

▲通訊作者