基于愈創(chuàng)木酚熒光減量準(zhǔn)確測(cè)定過氧化物酶活性的新方法

趙煬等

摘 要 利用H2O2/過氧化物酶（POD）/愈創(chuàng)木酚（GA）反應(yīng)體系的產(chǎn)物（470 nm）吸光度去定量POD活性是目前常用方法之一，但產(chǎn)物不穩(wěn)定且對(duì)比色皿有吸附現(xiàn)象是該反應(yīng)的主要缺點(diǎn)之一。為了解決此問題，本研究利用GA的熒光特性建立了一種能準(zhǔn)確測(cè)定POD活性的方法。用辣根過氧化物酶（HRP）作為測(cè)試樣品得到了以下優(yōu)化條件：0.5 mmol/L GA，0.5 mmol/L H2O2，0.05 mol/L PBS緩沖液（pH 6.0），反應(yīng)溫度20℃，樣品耗量20 μL；本方法的線性范圍為500～60000 U/L（r=0.9993），RSD≤2.4%（n=11），檢出限為385 U/L。在優(yōu)化條件下，用白蘿卜提取液作為測(cè)試樣品，用本方法（（9714±132） U/L）與比色法（（9926±352） U/L）和循環(huán)催化流動(dòng)分析法（（9608±456） U/L）進(jìn)行了對(duì)比，結(jié)果表明， 3種方法相互一致性很好。endprint