高效液相色譜同位素稀釋質(zhì)譜法定量分析人生長激素

金有訓(xùn)等

摘 要 建立了人生長激素（hGH）純化分析和高效液相色譜（HPLC）與同位素稀釋質(zhì)譜（IDMS）聯(lián)用高準(zhǔn)確度絕對定量方法。采用快速蛋白液相色譜來分離純化hGH，以傅里葉變換離子回旋共振質(zhì)譜儀（FTICRMS）準(zhǔn)確地測定蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量。 純化的hGH經(jīng)酸水解后，采用KINETEX C18色譜柱為分析柱，以水（含0.1%三氟乙酸）和乙腈為流動相，等梯度分離，流速0.2 mL/min， 溫度40℃，采用電噴霧正離子模式進行電離，選擇多反應(yīng)監(jiān)測模式進行檢測，內(nèi)標(biāo)法定量分析。結(jié)果表明，F(xiàn)TICRMS所測得的分子量實測值與理論值僅相差0.31 Da， 脯氨酸、纈氨酸和苯丙氨酸在液相條件下5 min內(nèi)達到基線分離，在最優(yōu)條件下，hGH含量測定結(jié)果為186.80 SymbolmA@

g/g，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.52%。利用本方法參加國際比對，比對結(jié)果與參考值等效一致。本方法具有簡易、實用的特點，并且準(zhǔn)確可靠，可作為hGH純品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值方法，為hGH的日常檢測提供參考。