實時熒光聚合酶鏈式反應偶聯高特異性核酸侵入反應檢測單核苷酸多態性

鄭夢琳等

摘 要 建立了實時熒光聚合酶鏈式反應（PCR）偶聯高特性核酸侵入反應檢測單核苷酸多態性（SNP）的方法。優化了體系中flap核酸內切酶1（FEN1酶）和野生型檢測探針等用量，確定了最佳反應條件，即FEN1酶用量為1.5 U，野生型檢測探針用量為0.125 μmol/L，0.5 μmol/L Invader突變型檢測探針，各0.25 μmol/L通用野生型（VIC）和突變型（FAM）熒光共振轉移發卡探針，顯著降低了野生型樣本和突變型樣本背景信號，避免了背景信號對檢測結果分型的干擾。采用本方法對編碼乙醛脫氫酶2（ALDH2）基因ALDH2*2位點21例樣本、細胞色素P450 2C19基因CYP2C19*2和CYP2C19*3位點各19例樣本進行分型檢測，結果表明， ALDH2*2位點GG純合10例，GA雜合8例，AA純合3例；CYP2C19*2位點GG純合9例，GA雜合8例，AA純合2例；CYP2C19*3位點GG純合18例，GA雜合1例。使用焦磷酸測序進行驗證，兩種方法檢測結果一致。本方法特異性好、操作簡便、耗時短、成本低，可實現對SNP單管閉管無污染的分型檢測。

關鍵詞 實時熒光PCR； 核酸侵入反應； 單核苷酸多態性； 乙醛脫氫酶2基因； 細胞色素P450 2C19基因