刺五加葉亞慢性經口毒性試驗研究

張晶瑩，宋昕恬，孫蘭，孟令儀，白雪松（.吉林省疾病預防控制中心，吉林長春30062；2.吉林醫藥學院營養教研室，吉林吉林3203）

刺五加葉亞慢性經口毒性試驗研究

張晶瑩1，宋昕恬1，孫蘭1，孟令儀1，白雪松2，*
（1.吉林省疾病預防控制中心，吉林長春130062；2.吉林醫藥學院營養教研室，吉林吉林132013）

摘要：評價刺五加葉的食用安全性。根據《食品安全性毒理學評價程序和檢驗方法》對刺五加葉進行90 d喂養試驗。Wistar大鼠80只，分為4組，雌雄各半，分別給予實驗組刺五加葉8.0、6.0、4.0 g/kg BW，對照組給予正常飼料。90 d后各組動物生長發育情況良好，給予刺五加葉對大鼠體重、食物利用率無明顯影響，血常規、肝功能、腎功能、臟器系數等指標未見異常。刺五加葉對大鼠血液生化、血液學等指標無明顯影響，未引起大鼠肝臟、腎臟等主要器官組織形態學改變。

關鍵詞：刺五加葉；亞慢性經口毒性試驗；大鼠

刺五加[Acanthopanax senticocus（Rupr：et Maxim.）Harms]系五加科植物[1]，是我國北方地區常用的藥材之一，主要入藥部位為干燥根及根莖，其莖、葉也具有藥理活性[2-3]作用。隨著人們對于刺五加研究不斷的深入，刺五加葉中的多種有效活性成分不斷被開發出來，具有深入研究的價值。為了滿足新資源食品評審的要求，根據《食品安全性毒理學評價程序和檢驗方法》對大鼠進行了90 d喂養試驗。

1　材料和方法

1.1試劑與儀器

刺五加葉，粉末狀：由五常北秀健康產業有限公司提供；SYSMEX-XT1800i型五分類血球計數儀：日本產；五分類試劑盒：由上海科華東菱診斷用品有限公司提供；TBA-120FR全自動生化分析儀：日本東芝；生化試劑盒：由深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司提供。

1.2實驗動物

健康Wistar大鼠，雌雄各40只，體重（70～85）g，由長春市億斯實驗動物技術有限責任公司提供，生產許可證號：SCXK-（吉）2011-0004。本實驗動物環境設施合格證，吉動設字10-1005，溫度20℃～22℃、濕度55%～65%。

1.3方法

動物購入后飼養3 d，隨機分為對照組及3個受試物組，每組雌雄各10只。人體推薦量為每日3.0 g，即3.0 g/60 kg BW，相當于0.05 g/kg BW。最高劑量組以成人日攝入量的160倍計，即8.0 g/kg BW，中劑量組6.0 g/kg BW相當于成人攝入量的120倍，低劑量組4.0 g/kg BW，相當于成人攝入量的80倍。將3個試驗組受試物均勻摻入基礎飼料中（采用逐漸擴大、充分混勻、反復過篩的方法），含量依次為10.0%、8.0%、6.0%。對照組喂飼正常基礎飼料。大鼠飼料攝入量按體重8%計算，由于高、中、低劑量組受試物的比例均大于5%，故飼料中補充酪蛋白（由甘肅省臨夏州華安生物制品有限公司生產），具體方法如下：基礎飼料蛋白含量為18.94%，高劑量組樣品占飼料比例10.0%，超出最大規定量5.0%，則高劑量組飼料按0.947%比例加入酪蛋白。中劑量組樣品占飼料比例8.0%，超出最大規定量3.0%，則中劑量組飼料按0.568%比例加入酪蛋白；低劑量組樣品占飼料比例6.0%，超出最大規定量1.0%，則低劑量組飼料按0.189%的比例加入酪蛋白。大鼠單籠喂養90 d，自由飲食。

1.4觀察指標

1.4.1一般觀察指標

每天觀察動物的表現、行為活動、中毒狀況、死亡情況。每周稱一次體重、兩次食物攝入量，計算食物周利用率及總利用率。

1.4.2血液學指標及血液生化指標

于試驗中期尾靜脈采血，進行血液學及血液生化指標檢測。血液學指標采用SYSMEX-XT1800i進行檢測；血液生化指標采用TBA-120FR全自動生化分析儀進行檢測：谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、尿素（UREA）、肌酐（Cr）、血糖（Glu）、總蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、膽固醇（TC）、甘油三脂（TG）。禁食16 h后，于試驗第91天稱重，用1%戊巴比妥鈉生理鹽水溶液，按5.0 mL/kg BW腹腔注射麻醉后，下腔靜脈采血，進行血液學及血液生化指標檢測。

1.4.3病理檢查

第91天進行大體解剖，組織病理檢查（肝、腎、脾、胃、十二指腸、睪丸或卵巢）。

1.5數據統計

采用單因素方差分析，方差齊時，各組間兩兩比較用LSD方法，不齊時，各組間兩兩比較采用Tamhane’s方法。所有數據的統計處理均采用SPSS11.5統計軟件進行。

2　實驗結果

2.1一般觀察情況

整個實驗過程中動物無死亡，無異常行為表現。3個劑量組所有試驗組動物在實驗期內毛發光澤、黏膜紅潤，活動自如，排泄物無異常，生長發育正常，體重、進食量、食物利用率與對照組相比均無差異（P>0.05）。

2.2血液學指標

90 d喂養試驗中期和末期大鼠血常規檢驗結果表明，各劑量組動物的白細胞（WBC）、淋巴細胞（LY）、單核細胞（MO）和分葉細胞（GR）、紅細胞（RBC）、血紅蛋白（Hgb）各項指標結果均在正常范圍內，與對照組比較無統計學差異（P>0.05）。

2.3生化指標

由表1、2可見，試驗末期雄性高劑量組ALb與對照組比較，有統計學差異（P<0.05）；雄性中劑量組TG與對照組比較，有統計學差異（P<0.05）；雌性中劑量組ALT與對照組比較，有統計學差異（P<0.05），但在本實驗室歷史正常值范圍內，其余各劑量組各項血液生化指標試驗中期及末期ALT、AST、BUN、CR、GLU、TP、ALB、CHO、TG與對照組比較，無統計學差異（P>0.05）。

表1　刺五加葉90 d喂養試驗中期生化檢測結果Table 1　Acanthopanax leaves mid 90 d feeding study biochemical test results

表2　刺五加葉90 d喂養試驗末期生化檢測結果Table 2　Acanthopanax leaves end 90 d feeding study biochemical test results

2.4病理學檢查

刺五加葉90 d喂養試驗病理學檢查結果見圖1。

圖1　刺五加葉90 d喂養試驗病理學檢查結果Fig.1　Acanthopanax leaves 90 d feeding study pathology results

切片鏡檢，肝臟：呈暗紅色，質軟，表面光滑、平整，未見隆起及包塊。鏡下所見：對照組雌性2例，雄性1例，高劑量組雌性1例，雄性1例可見肝小葉點狀壞死；對照組雌性2例，雄性3例，高劑量組雌性1例，雄性3例可見肝小葉炎細胞浸潤；其余被膜完整，無明顯異常病理改變。脾：鏡下所見：高劑量組脾臟與對照組比較，無明顯差異。可清楚看到脾臟實質的紅髓、白髓及邊緣區三部分，被膜及脾小梁未見纖維結締組織增生，淋巴濾泡未見反應性增生。腎臟：高劑量組與對照組雙側腎臟等大似豆形，表面光滑平整，未見明顯增大與縮小。鏡下觀察：腎被膜光滑，腎小球在切片上呈圓形，腎皮質區腎小球未見明顯增大或萎縮、纖維化、變性等，毛細血管袢未見壞死，腎小球毛細血管未見擴張充血、管壁未見增厚。小管上皮完好，間質無炎細胞浸潤，為正常腎臟組織結構。其余動物腎臟一般結構均未發現異常改變。胃：鏡下主要觀察胃黏膜。對照組雌性1例，雄性2例，高劑量組雌性2例，雄性1例可見胃固有層內少量嗜酸粒細胞浸潤；余為正常胃黏膜結構。十二指腸：鏡下主要觀察黏膜，高劑量組與對照組十二指腸黏膜表面可見大小不一的腸黏膜，呈葉片狀，黏膜上皮呈高柱狀，可見十二指腸腸腺，各層結構的細胞未見異常，高劑量的十二指腸結構與對照組比較無明顯差異。睪丸：鏡下觀察：高劑量組與對照組睪丸曲細精管結構清晰，各級生精細胞形態正常，精子細胞清晰可見，支持細胞未見異常。睪丸間質未見出血、壞死、鈣化或精子肉芽腫形成。曲細精管內可見精原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞、精子細胞和精子，為正常睪丸組織結構。卵巢：鏡下觀察：高劑量組與對照組卵巢表面為扁平或立方細胞，皮質層內可見許多發育不同階段的卵泡，卵泡間為結締組織，髓質區由結締組織組成，含較多血管，高劑量組的卵巢與對照組相似，未見異常。

3　結論與討論

近年來，隨著刺五加葉的相關報道不斷增多，對刺五加葉中的化學成分和藥理活性具有了較好的研究[4-5]，但對其安全性評價方面較少。本次研究，給予不同劑量的刺五加葉進行90 d喂養試驗，期間動物的全身情況良好，活動正常，無口鼻出血情況、拒食和其它異常行為，生長發育良好。對體重、食物利用率均未見明顯影響。在實驗中期、末期對大鼠血液學、肝腎功能等指標進行了檢測，均無明顯影響。組織病理學檢查顯示，除有少許常見自發病變，肝、腎、脾、胃、十二指腸、睪丸、卵巢等主要器官無組織形態結構損傷，均未觀察到與喂養刺五加葉有關的組織病理學改變。為刺五加葉進入新資源食品提供理論依據和參考品。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010:192-193

[2]李志峰,楊金義,張武崗,等.刺五加的化學成分研究[J].中草藥, 2011,42(5):852-855

[3]梁啟明,曲紹春,于曉風,等.刺五加葉皂苷B對急性心肌梗死大鼠的保護作用[J].中草藥,2010,41(3):444-447

[4]劉建華,呂寧,李敬芬.刺五加莖葉果實的生藥學研究[J].時珍國醫國藥,2007,18(5):1193-1194

[5]王知斌,郭江濤,姜海,等.刺五加葉的化學成分和藥理作用研究[J].中醫藥信息,2013,30(3)29-31

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.24.011

收稿日期：2014-07-18

作者簡介：張晶瑩（1978—），女（漢），主管醫師，碩士，主要從事食品毒理學研究。

*通信作者：白雪松（1978—），男（滿），副教授，碩士，主要從事預防醫學。

Study on the Toxicity of Subchronic Oral of Acanthopanax Leaves

ZHANG Jing-ying1，SONG Xin-tian1，SUN Lan1，MENG Ling-yi1，BAI Xue-song2，*
（1.Jilin Provincial Center for Disease Control and Prevention，Changchun 130062，Jilin，China；2.Department of Nutrition，Jilin Medical College，Jilin 132013，Jilin，China）

Abstract：To investigate the toxicity of Acanthopanax leaves on rats，on the basis of Technical Standards for Testing﹠Assessments of Food，a ninety days feeding study of Acanthopanax leaves was conducted，80 rats were randomly divided into 4 groups，and each group consisted of 10 males and 10 females.The experimental group were given Acanthopanax leaves 8.0，6.0，4.0 g/kg BW for 90-days，control group received normal feed. The result showed that，after the challenge of Acanthopanax leaves，for 90-days，we detect no abnormality of animal growth and development，weight，and food efficiency.Also Acanthopanax leaves，there was no adverse effect of liver function，kidney function，and organ coefficients.Acanthopanax leaves at above mentioned doses causes no pathological changed in rats liver and kidney，and no changes in serum biological indexes.

Key words：Acanthopanax leaves；subchronic oral toxicity test；rats