載脂蛋白E基因多態性與老年人輕度認知功能障礙的關聯研究

何　璐，袁也豐，任稱發，孫偉銘，鄒　卿

載脂蛋白E基因多態性與老年人輕度認知功能障礙的關聯研究

何璐，袁也豐，任稱發，孫偉銘，鄒卿

摘要目的研究江西省老年人載脂蛋白E基因（ApoE）多態性的分布及其與輕度認知功能障礙（MCI）的關系。方法以符合美國精神障礙診斷與統計手冊第4版（DSM-IV）診斷標準的120例MCI老人作為患者組，以120例健康體檢者作為對照組，使用聚合酶鏈反應對其進行ApoE基因多態性的檢測。結果兩組人群中ApoEε3／3基因型分布的百分比最大，其次為ApoEε3／4，而ApoEε2／2最少；患者組和對照組ApoEε4基因頻率分別為14．17%、7．91%，兩者比較差異有統計學意義（X2＝4．77，P＜0．05），兩組人群中ApoEε3等位基因分布的百分比最大；ApoEε4等位基因與MCI呈正相關性（OR＝1．92，P＝0．029）。結論江西省漢族老人中，

ApoEε3／3為最常見的基因型，ApoEε3為最常見的等位基因，ApoEε4等位基因可能是老年人MCI發病的危險因子。

關鍵詞老年人；輕度認知功能障礙；載脂蛋白E基因多態性

1　材料與方法

1．1病例資料

1．1．1患者組

選取2014年2月～9月于南昌大學第一附屬醫院心身醫學科門診就診的MCI患者120例作為患者組，其中男73例，女47例；年齡60 ～88（68．31±6．06）歲，病期3月～10年。入組標準：符合美國精神障礙診斷與統計手冊第4版（DSM-IV）中的MCI診斷標準：①主觀感覺記憶力減退；②全面衰退量表、簡明精神狀態檢查量表及日常生活能力量表檢測存在認知功能減退，但不足以診斷癡呆；③生活與社會功能降低；④缺血指數量表（Hachinski）評分≤4分，排除由特定原因引起的認知功能損害；⑤病程至少大于3個月。年齡≥60歲；漢族；相互間無血緣關系。排除標準：①診斷不明；②嚴重軀體疾病；③阿爾茨海默病、帕金森氏病、腦器質性疾病等所致的各種癡呆患者；④外地遷移至江西暫時居住的患者。

1．1．2對照組

選取同期南昌大學第一附屬醫院門診健康體檢者120例作為對照組，其中男76例，女44例；年齡61～84（67．31±5．94）歲。入組標準：①不符合DSM-IV中MCI的診斷標準；②性別、年齡、文化程度、生活背景等與患者組盡量匹配，并確定無血緣關系；③無癡呆家族史。排除標準同患者組。患者組和對照組在性別、年齡方面差異無統計學意義（X2＝0．374，F＝1．334，P＞0．05）。

1．2方法

1．2．1DNA提取

常規抽取研究對象外周靜脈血2 m l，EDTA-Na2抗凝，采用北京康為世紀公司提供的BloodGen Mini Kit（0．1～1 ml）試劑盒提取DNA。1%瓊脂糖凝膠、電壓150 V、電流100 mA、20 min電泳后凝膠成像系統檢測。

1．2．2ApoE基因多態性檢測

對所提取的全基因組DNA進行基因擴增，應用軟件Primer Premier5對ApoE基因的引物進行設計及合成，引物序列上游引物：5’-AGGAACAACTGACCCCGGT-3’，下游引物：5’-TGCTCCTTCACCTCGTCCA-3’。聚合酶鏈反應（PCR）體系50μl：Prem Taq（Ex Tag Version）2．0 D331A 12．5μl，基因組 DNA 0．3μg，上下游引物（10μmol／L）各1μl，加滅菌蒸餾水定容至50μl。PCR反應條件：95℃預變性3 min，94℃變性30 s，57℃退火35 s，72℃延伸40 s，35個循環后，72℃繼續延伸6 min后降至4℃。PCR產物經純化回收

2015－04－08接收

1．3統計學處理

采用SPSS 17．0軟件進行分析，先計算出各等位基因頻率和基因型頻率，做Hardy-Weinberg吻合度檢驗；按公式優勢比（odds radio，OR）＝（a／c）／（b／d）＝ad／bc進行OR分析，采用X2檢驗進行組間等位基因頻率比較，雙側檢驗。

2　結果

2.1基因組DNA檢測結果

基因組DNA部分電泳結果見圖1。

2.2ApoE基因擴增產物電泳圖

ApoE基因PCR擴增產物片斷大小為469 bp，電泳結果見圖2。

2.3Hardy-Weinberg吻合度檢驗

患者組和對照組ApoE基因型頻率及等位基因頻率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律，吻合度檢驗良好（X2＝4．76、2．33，P＞0．05）。

2.4ApoE基因型分布

患者組和對照組ApoE基因型頻率均以ε3／3最高，其次為ε3／4，對照組缺失ε4／4，兩組間ApoE基因型比較，差異均無統計學意義。見表1。

表1　患者組與對照組　ApoE基因型頻率的分布［n（%）］

2.5ApoE等位基因頻率

患者組和對照組ε4等位基因頻率分別為14．17%、7．91%，兩者比較差異有統計學意義（X2＝4．77，P＝0．029），兩組ApoE等位基因頻率均以ε3最高，見表2。

表2　患者組與對照組　ApoE等位基因頻率的分布（%）

2.6ApoE等位基因頻率風險分析

通過計算OR值估計ApoE基因與MCI的關系，結果證明ApoEε4等位基因與MCI呈正相關性（OR＝1．920，95%CI：1．061～3．472），ε2（OR＝0．661，95%CI：0．334～1．307）、ε3（OR＝0．803，95%CI：0．507～1．272）等位基因與MCI發病無顯著相關性。

3　討論

MCI是介于正常老化與癡呆之間的一種臨界狀態，屬于退行性疾病，平均每年約10%～15%的MCI患者發展為癡呆［2-3］。近年來關于MCI的生物學診斷標志取得了較大的進展。研究［4］表明ApoE基因對MCI的發病具有一定的影響。

ApoE基因位于19號染色體，在編碼112和158位氨基酸的突變產生3種等位基因，即ε2、ε3、ε4。流行病學研究［5］顯示，中國漢族人群中ApoE基因最常見的基因型為ε3／3，最常見的等位基因為ε3。本研究測定的6種基因型中，ε3／3基因型分布頻率最高，ApoE等位基因中以ε3分布頻率最高，與上述流行病學研究結果相符。

本研究顯示對照組ε4等位基因頻率為7．91%，與國內報道［6］的我國漢族人群的7．5%基本一致，患者組ε4等位基因頻率則高達14．17%，兩者比較差異有統計學意義，這與國內外一些相關研究［7-8］的結果基本一致，提示MCI可能與ApoEε4等位基因相關。

研究［9］表明，ApoEε4等位基因是MCI的危險因素。Barabash etal［10］分析ApoE基因型對MCI的影響，結果顯示，ApoEε4等位基因可增加MCI的危險度（OR＝6．04）。本研究通過風險分析提示ApoEε4等位基因與MCI呈正相關性（OR＝1．92），攜帶ApoEε4等位基因者患MCI的可能性是未攜帶者的1．92倍，推測ApoEε4等位基因可能是MCI患病的風險因子之一。兩項研究OR值差異較大，可能與研究對象的入組標準、種族、地域等因素有關，也可能與研究對象的年齡范圍有關，本研究以國內普遍認可的60歲作為老年人的界定，與國際標準存在偏差。

陳靜等［11］對貴州市≥60歲的MCI老年人進行ApoE多態性檢測，結果提示ApoEε2為MCI的保護因子。但本研究結果提示ε2等位基因與MCI無顯著相關性，這可能與研究對象數量、地域、入組標準及研究試驗方法不同等因素有關，也可能是環境或其他因素參與遺傳交互作用的結果。

綜上所述，本研究證實了江西地區漢族老年人MCI與ApoE基因的多態性存在關聯，ApoEε4等位基因可能是MCI的風險基因，這提示ApoE基因型檢測可作為臨床醫師評估MCI發病危險性的輔助手段。但由于MCI的患病受多重因素影響，下一步擬對江西地區MCI患者進行大樣本研究，進一步探討ApoE基因多態性與MCI的關系，為MCI的防治提供依據。

參考文獻

［1］Petersen R C，Smith G E，Waring S C，et al．Mild cognitive impairment：clinical characterization and outcome［J］．Arch Neurol，1999，56（3）：303－8．

［2］Winblad B，Palmer K，Kivipelto M，et al．Mild cognitive impairment-beyond controversies，towards a consensus：report of the InternationalWorking Group on mild cognitive impairment［J］．J Intern Med，2004，256（3）：240－6．

［3］Petersen R C．Mild cognitive impairment as a diagnostic entity ［J］．J Intern Med，2004，256（3）：183－94．

［4］肖世富．老年輕度認知功能損害的臨床神經生物學標志［J］．中華醫學雜志，2005，85（42）：3017－20．

［5］汪瑋琳，馮克娜，周玉穎，等．2型糖尿病中老年住院患者輕度認知障礙與載脂蛋白E基因多態性的關系［J］．中國慢性病預防與控制，2013，21（6）：666－8．

［6］鄢盛愷，周新，哈黛文．聚合酶鏈反應限制性片段長度多態性檢測載脂蛋白E基因型［J］．中華醫學檢驗雜志，1997，20 （1）：28－31．

［7］葉葳．ApoEε4等位基因對MCI患者的認知功能及1H-MRS代謝物的影響［D］．福建醫科大學，2013．

［8］陳曉紅，王蔭華，湯哲，等．輕度認知功能障礙的神經心理學研究和ApoE基因多態性分析［J］．中國理論康復與實踐，2005，11（3）：202－5．

［9］葉妮，張臨洪．載脂蛋白E基因多態性與輕度認知障礙相關性研究［J］．中國神經免疫學和神經病學雜志，2008，15（1）：74－5．

［10］Barabash A，Marcos A，Ancin I，et al．APOE，ACT and CHRNA7 genes in the conversion from amnestic mild cognitive impairment to Alzheimer′s disease［J］．Neurobiol Aging，2009，30（8）：1254－64．

［11］陳靜，黃文湧，楊敬源，等．老年人輕度認知功能損害與ApoE基因多態性關系［J］．中國公共衛生，2011，27（7）：836 －8．

中圖分類號R 749．99

文獻標志碼A

文章編號1000－1492（2015）10－1468－03輕度認知功能障礙（mild cognitive impairment，MCI）是中樞神經系統的退行性病變，是一種神經功能障礙，多見于老年人，臨床特點為記憶力下降、注意力減退、工作能力和效率降低、新事物學習能力下降，但日常認知能力和生活自理能力相對保持，故被大多數學者稱為“癡呆的前期狀態”［1］，其病因未明，因此探討MCI病因、發病機制及防治措施已成為國內外學者關注的焦點。該研究選取載脂蛋白E基因（Apo lipoprotein E gene，ApoE）為目標基因，對遺傳背景相似的江西地區漢族正常老人及MCI患者進行研究，進一步探討ApoE基因與MCI的關系，旨在為MCI的防治提供依據。

基金項目：江西省科技廳科技計劃項目（編號：20132BBG70069）；江西省衛生廳科技計劃項目（編號：2009BAI77B03）

作者單位：南昌大學第一附屬醫院心身醫學科，南昌330006

作者簡介：何璐，女，碩士研究生；袁也豐，男，教授，主任醫師，博士生導師，責任作者，E-mail：yuanyefen＠sina．com試劑盒（SK1141，上海生工生物工程技術服務有限公司）純化后，運用3730序列分析儀對目的基因進行直接測序，從而獲得ApoE基因的不同基因型。

The study on the relation between the distribution of Apo lipoprotein E（ApoE）genotypes and m ild cognitive impairment

He Lu，Yuan Yefeng，Ren Chengfa，et al
（The First Affiliated Hospital of Nanchang University，Nanchang330006）

AbstractObjectiveTo study the relation between the distribution of Apo lipoprotein E（ApoE）genotypes and mild cognitive impairment in Jiangxi，China．MethodsThe patientgroup was collected from patientswith MCI（n ＝120）in accordancewith the diagnostic and statisticalmanual ofmental disorders fourth edition（DSM-IV）diagnosis standard．The normal group was collected from the healthy check-ups．The ApoE gene polymorphism were determined using the polymerase chain reaction．Resu ltsThe ApoE ofε3／3 genotypes had highest frequency，followed byε3／4 andε2／2 had lowest frequency in the elderly of Jiangxi．The frequency of the ApoEε4 genotypeswas higher in MCIgroup than in the control group（14．17%vs7．91%，P＜0．05）．ApoE epsilon 4 allele was positively associated with the onset of MCI（P＜0．05）．ConclusionAmong the elderly of Jiangxi，ApoEε3／3 is the most common genotype，ApoEε3 is themost common allele，MCIprevalence is associated with ApoE gene polymorphism and the ApoEε4 allele could be a pathogenic risk factor for MCI．

Key wordselderly；mild cognitive impairment；Apo lipoprotein E gene polymorphism