液相色譜－電感耦合等離子體質譜聯用測定生物體中的有機錫

劉 揚 朱金秀

(大連市環境監測中心站，大連 116023)

有機錫化合物當今已經成為人們廣泛關注的一類環境污染物，主要是由于有機錫化合物是用途最廣、用量最大的有機金屬化合物，而且在環境中對生物具有特殊的毒性作用。有機錫主要用于塑料工業生產的穩定劑和催化劑、各種殺蟲劑、除草劑、紡織品防霉以及海洋船只防污涂料中。據統計，我國每年大約有3000 噸三丁基錫等防污涂料進入海洋，對海洋環境造成污染。有機錫對海洋魚類、甲殼類動物、軟體動物和海洋藻類的影響是非常大的，能干擾海洋生物內分泌系統的正常機能，從而導致人類和其他野生動物生殖系統產生障礙與疾病［1］。因此研究生物體中有機錫的存在形態及其準確的測量方法對于掌握海洋生物中有機錫的污染狀況有著非常重要的意義。

近20年來，環境中有機錫的分析技術發展很快。由于有機錫既含有金屬元素，又具有有機物的性質，因此常用的有機錫的檢測方法多采用氣相色譜與各種特征檢測器聯用，如GC－FPD、GC/MS、GC－ICP－MS 等。其中高效液相色譜－電感耦合等離子體質譜(HPLC－ICP－MS)聯用技術以其操作簡單、高靈敏度、快速而受到人們的重視［2］。本次工作采用文蛤、魚等海洋生物作為研究對象，用流動相超聲萃取技術進行樣品前處理，高效液相色譜－電感耦合等離子體質譜法進行有機錫的測定。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

1200 型高效液相色譜(美國Agilent 公司);7500ce電感耦合等離子體質譜儀(美國Agilent 公司);

實驗用水均為經超純水系統純化過的水;乙酸、三乙胺(優級純試劑，科密歐公司生產)，三甲基氯化錫(TMT)、二丁基氯化錫(DBT)、三丁基氯化錫(TBT)、二苯基氯化錫(DPT)、三苯基氯化錫(TPT)為產于德國的有機錫標準物質，甲醇、乙腈(色譜純試劑，德國Merk 公司產品)。

1.2 儀器的工作參數

ICP－MS 工作條件及參數:射頻功率:1600W;采樣深度:9.0mm;樣品錐:鉑錐;載氣流速:0.65L/min;補償氣流速:0.1L/min;選擇氣:O2/Ar 混合氣，其中O2的體積占30%;霧化室溫度:－5℃;進樣系統:有機專用(石英的T 接頭和有機專用炬管)。

液相色譜的工作條件及參數:Agilent TC－C18 柱:250mm×416mm，5μm。流動相:V(乙腈)∶V(水)∶V(乙酸)= 65∶23∶12，0.05% 的三乙胺;流速:0.5L/min;進樣量10.0μL。

1.3 生物樣品的前處理

取生物體的可食部分，依次用去離子水和超純水洗凈后，再用紗布拭干水分，打碎均勻后，在超低溫冰箱中冷凍24h，然后置于凍干機冷凍干燥72h，充分干燥后粉碎成干粉儲存于密閉玻璃瓶中，冷凍保存。同時準確記錄凍干前后重量，并由此獲得樣品水分含量［3－4］。

準確稱取0.6g 凍干樣品，放在密閉的玻璃瓶中，分別加入9ml 流動相，蓋上瓶蓋，放入超市超聲萃取20min，沉降2 個小時后，取上清液用0.22μm 有機濾膜過濾后備用［5］。

1.4 定性定量分析

1.4.1 標準曲線的制備

準確稱取TMT、DBT、TBT、DPT、TPT 的標準物質，溶于色譜純的甲醇或乙腈中，配成1000mg/L 的儲備液。將儲備液用乙腈稀釋成適當濃度的標準使用液。將有機錫標準使用溶液用流動相分別稀釋成1.0、2.0、5.0、10.0、50.0、100.0、200.0μg/L 的標準溶液，分別以5 種有機錫的濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線［6］。有機錫參考色譜圖如圖1 所示。

圖1 有機錫色譜圖

1.4.2 樣品的測定

取與標準工作液相同體積的樣品萃取液注入液相色譜儀進行分離，電感耦合等離子體質譜儀進行檢測。以其標準溶液峰的保留時間定性，峰面積定量。

2 結果與討論

2.1 生物體中有機錫加標回收率的測定

為進一步驗證該方法對生物體中有機錫提取的準確性和可靠性，以文蛤樣品為基質進行加標回收率測定。準確稱取0.6g 凍干樣品，分別加入9μL 的100mg/L 的液體有機錫的混合標準溶液，吸附平衡后用9mL 流動相超聲萃取20min，靜置后取上清液，用0.22μm 的有機濾膜過濾后備用［6］。加標濃度為100μg/L，平行添加3 份樣品進行加標回收率實驗，五種有機錫化合物平均加標回收率測定結果列于表1。

表1 五種有機錫化合物的平均加標回收率

2.2 方法檢出限的確定

在與樣品測定相同的色譜條件下，準確稱取0.6g凍干樣品，分別加入9μL 的5mg/L 的液體有機錫的混合標準溶液，然后與加標回收率測定相同的前處理方法，平行測定7 個樣品，并用測定值的標準偏差乘以t值(t=3.143)，求出方法的檢出限［7］。五種有機錫化合物的檢出限測定結果列于表2。

表2 五種有機錫的方法檢出限

3 結 論

采用超聲溶劑萃取和液相色譜與電感耦合等離子體質譜聯用(HPLC－ICP－MS)分析技術，可以將生物體中的五種有機錫三甲基氯化錫(TMT)、二苯基氯化錫(DPT)、二丁基氯化錫(DBT)、三苯基氯化錫(TPT)、三丁基氯化錫(TBT)很好得分離并且準確進行定性定量測定，方法的回收率在50%～140% 之間，檢出限在0.1～0.7mg/kg 之間。但該方法中DPT 的回收率偏低。

［1］江桂斌．國內外有機錫污染研究現．衛生研究，2001，3(1):1－3．

［2］于振花，荊淼，王小如，陳登云，黃彥良．液液萃取－高效液相色譜－電感耦合等離子體質譜同時檢測海水中的多種有機錫．光譜學與光譜分析，2009，29(10):2855－2859．

［3］海洋監測規范第6 部分:生物體分析GB17378.6－2007．

［4］丘紅梅，張慧敏，申治國，黎雪慧，等．液相色譜與電感耦合等離子體質譜聯用測定海產品中的TPT．中國衛生檢驗雜志，2008，18(11):2197－2203．

［5］于振花，荊淼，王庚，曹煊，丘紅梅，等．高效液相色譜－電感耦合等離子體質譜聯用同時檢測海產品中的多種有機錫．分析化學研究報告，2008，36(8):1035－1039．

［6］馬冰峰，郭嵐，雷曉康，柳英霞，萬益群．微波輔助提取－高效液相色譜－電感耦合等離子體質譜測定海產品中苯基錫化合物．分析科學學報，2014，30(6):858－862．

［7］崔彥杰，巢靜波，康天放，宋增良.高效液相色譜—電感耦合等離子體質譜聯用測定牡蠣中的有機錫．質譜學報，2011，32(2):82－85．