蒙藥忠倫阿湯的長期毒性實驗研究△

湛春波 董秋梅 郝 華 劉春慧 王 琦 屈愛桃 邢雅儒 陳 琨

(1.內蒙古醫科大學2011 級研究生，內蒙古 呼和浩特 010110;2.內蒙古醫科大學中醫學院，內蒙古 呼和浩特010110;3.內蒙古醫科大學2012 級研究生，內蒙古 呼和浩特010110;4.內蒙古醫科大學藥學院，內蒙古 呼和浩特010110 5.赤峰市第二蒙醫中醫醫院，內蒙古 赤峰 024000;)

蒙藥忠倫阿湯由梔子、訶子、川楝子、苦參和地格達(蒙藥又名當藥、紫花地丁)5 味藥組成，具有清熱、涼血、舒筋、止痛功效，是傳統蒙醫治療熱性黃水病，游痛證、痛風等的常用方劑［1］，其癥狀病程相當西醫學的類風濕關節炎、急性風濕熱等，目前國內已有報道，在臨床上使用忠倫阿湯原方及加減類方在治療風濕免疫病、骨關節炎等方面具有一定療效［2］。既往的基礎研究已表明蒙藥忠倫阿湯抗炎鎮痛作用明確，并能抑制膠原誘導性關節炎大鼠模型的足腫脹，具有較好的抑制腫瘤壞死因子、白介素等免疫炎癥的作用［3］。本研究旨在觀察藥物實驗大鼠的長期毒性，為進一步指導臨床合理用藥提供依據，現將實驗結果報道如下。

1 材 料

1.1 實驗藥物：忠倫阿湯散，蒙藥復方制劑，黃色粉末，味苦，由內蒙古國際蒙醫院提供，生產批號：20121216 規格：3g/袋，每袋含生藥3g，臨床成人用藥劑量為：1 袋/次(3g/次)，2 次/日。

1.2 實驗動物：Wistar 大鼠80 只，雌雄各半，由內蒙古大學動物實驗中心提供，許可證號：SCXK(蒙)2002-0001，清潔級。

2 方 法

2.1 動物飼養室環境：動物實驗觀察室溫度為(18 ±2)℃，相對濕度為40% ～60%，動物飼養于獨立通風隔離籠具中。

2.2 實驗過程

2.2.1 動物分組：Wistar 大鼠80 只，雌雄各半，按體重隨機分組，分高劑量組、中劑量組、低劑量組、空白對照組共4組，每組雌鼠10 只，雄鼠10 只，雌雄分籠飼養，每籠5 只。

2.2.2 實驗藥物煎煮配置方法、藥物濃度及給藥劑量的確定：忠倫阿湯散劑分別按大鼠臨床等效給藥劑量的50 倍、25 倍、12.5 倍作為高、中、低各組的給藥劑量，耐藥倍數取近似值6，每星期稱體重1 次，按體重調節給藥劑量，實驗藥物輕煎冷卻至室溫后萃取上清液，按實驗要求蒸發掉多余水分，至所需體積后放入4℃冰箱備用，每日定時灌胃2次。

2.2.3 實驗方法：研究方法參考彭城［5］《中醫藥動物實驗基本技術方法》，及陳奇《中藥藥理研究方法學》［6］。長期毒性實驗給藥15 周后停藥，每組隨機抽取10 只大鼠做血常規，血液生化指標分析，并解剖，相關臟器稱重，計算臟器系數，將所取臟器進行固定，準備進行病理組織學實驗觀察，余下大鼠停止灌胃給藥，正常飼養2 周進行解剖觀察。

2.2.4 觀測指標：一般情況：每天2 次灌胃后觀察大鼠的反應，包括自主活動，精神狀態、飲水、攝食、尿液糞便等情況，進行記錄。血液學檢查：白細胞總數及其分類、紅細胞計數、血紅蛋白、血小板等。血液生化學檢查：AST、ALP、ALT、BUN、TP、ALB、Cr、TC、T-BIL、GLU 等十項指標。大鼠病理組織學檢查：大鼠乙醚吸入麻醉后心臟取血，解剖，取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、卵巢、睪丸、胸腺、甲狀腺、腦組織，經10%中性福爾馬林溶液浸泡固定，常規石蠟切片，HE染色。

2.3 統計方法：統計資料用±s 表示，用SPSS17.0 醫學統計軟件進行分析，結果取α=0.05，P＜0.05 認為有統計學意義。

3 結 果

3.1 一般情況：忠倫阿湯給藥組尿量明顯多于對照組，高劑量組大鼠尿量高于中劑量組，中劑量組高于低劑量組(鼠籠托盤內尿液可見)，且高劑量組有藍綠色尿液，停藥后各組小便情況無差別。給藥期間各組大鼠偶有大便稀，可自行緩解。行為活動和毛色各組無顯著差異。

3.2 體重：由表1、表2 可知，對照組與高、中、低各組比較，蒙藥忠倫阿湯灌胃給藥15 周，停藥恢復性觀察2 周，各組大鼠體重遞增，P＞0.05，沒有統計學意義。

表1 給藥期各組忠倫阿湯對大鼠體重的影響(±S，單位g ，n=20)

表2 停藥2 周后各組蒙藥忠倫阿湯對大鼠體重的影響(±S，單位g，n=10)

表3 給藥期各組忠倫阿湯對大鼠生化指標的影響(±S，n=10)

表4 停藥后忠倫阿湯停藥后對大鼠生化指標的影響(±S，n=10)

3.3 血常規：給藥期血常規，各項指標對照組和高、中、低各組均無顯著差異，即P＞0.05，沒有統計學意義。恢復期各組血常規各組間比較均無統計學意義(P＞0.05)。

3.4 生化指標：表3、表4 所示，與對照組比較，忠倫阿湯高、中、低劑量組給藥15 周和恢復性觀察2 周各組之間沒有顯著性差異，P＞0.05。

3.5 臟器系數：忠倫阿湯給藥15 周，肝、脾、腎、肺、卵/睪對照組和高、中、低各組比較無差異，P＞0.05。腎上腺、胸腺、心臟、甲狀腺、腦的臟器系數經分析，P＜0.05，有統計學意義，經兩組間比較，各組的對照組和高劑量組、中劑量組之間沒有差異，P＞0.05。

忠倫阿湯恢復期臟器系數，肝、脾、腎、卵/睪對照組和高中低各組比較無差異，P＞0.05。腎上腺、胸腺、心、肺、甲狀腺、腦，經兩組間比較，對照組和高劑量組、中劑量組沒有顯著差異，P＞0.05。

3.6 病理變化：長期毒性實驗中給藥組和對照組各組大鼠心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、卵巢、睪丸、胸腺、甲狀腺、腦組織未見明顯的增生和壞死，未見其他異常病理改變。

4 討 論

對天然藥物的安全性評價及毒理學研究目前越來越受到重視，對于指導臨床合理用藥，降低藥物的毒副作用及減少因毒性導致的新藥研發失敗具有重要意義［7］。天然藥中包括大量在少數民族地區使用的民族藥物，蒙藥在內蒙古地區應用廣泛，臨床療效顯著，雖然在大多數情況下使用安全有效，副作用相對較小，但是對于某些特殊疾病或人群，需長期用藥者，是否存在毒性反應等，要深入研究，通過實驗研究客觀科學評價藥物的毒性作用。

目前，關于忠倫湯散劑的臨床毒副作用反應，急慢性毒性實驗研究國內尚未見報道，由于缺乏臨床的安全性評價，及毒理學方面的實驗研究，嚴重限制了該藥物的推廣應用。本實驗結果顯示，給藥期間大鼠行為活動和毛色各組無顯著差異，飲水、攝食未見異常，體重均呈增長趨勢，血液學及血液生化學指標未見異常改變，各組臟器系數未見明顯差異，病理組織學檢查相關組織和臟器未見異常改變，停藥2周進行恢復性觀察，未見藥物有延遲毒性反應，因此，該實驗表明蒙藥忠倫阿湯在實驗階段內未見明顯毒性反應，提示該藥臨床給藥途徑和給藥劑量是基本安全的。

值得注意的是，在既往的研究中雖有報道指出川楝子在體內有蓄積作用，長期服用可引起蓄積中毒，苦參提取物也對肝腎細胞活力有明顯的抑制作用［8-10］，但本實驗中，并未發現蒙藥復方忠倫阿湯的肝腎病理損傷，推測是否由于組成蒙藥復方后，通過藥物之間的相互配伍，起到了減毒增效作用，需要在今后的實驗中，進一步深入探討。

另外，在實驗中由于大鼠臟器較小，取材時有可能附帶周圍結締組織、脂肪組織，空腔臟器中附帶的體液或血液，稱重時尚不能徹底剝離或清除，可能對臟器重量產生影響，實驗數據表現臟器系數組內差異較小，在今后的實驗中應盡量避免這些影響因素造成的誤差。

［1］李艷春，胡志忠，羅素琴，等.蒙藥三子散中還原糖的含量測定［J］. 內蒙古醫學院學報，2010，32(16)：551 ～553.

［2］斯琴高娃，董秋梅.甲氨蝶呤聯合蒙藥忠倫阿湯治療類風濕關節炎的療效觀察［J］. 環球中醫藥，2014，(5)：385 ～387.

［3］李林，高自立，屈愛桃，等.蒙藥忠倫阿湯的抗炎鎮痛作用研究及對膠原誘導性關節炎大鼠足腫脹的影響［J］.中國實驗方劑學雜志.2011，17(3)：184 ～186.

［4］高自立，董秋梅，松林，等. 蒙藥忠倫阿湯對膠原誘導性關節炎大鼠血清IL-1、IL-6 及TNF-α 的影響［J］.中醫雜志，2012，53(7)：1816 ～1817.

［5］彭城.中醫藥動物實驗基本技術方法［M］.北京：人民衛生出版社，2008：119.

［6］陳奇.中藥藥理研究方法學(第二版)［M］.北京：人民衛生出版社，2000：31 ～32.

［7］徐蓓，杜冠華. 藥物安全評價及藥物毒理學研究進展［J］.中國醫藥導刊，2006，8(5)：326 ～327.

［8］唐大軒，熊靜悅，梁婭君，等.川楝子對大鼠完全急性毒性作用研究［J］. 時珍國醫國藥，2011，22(10)：2387 ～2389.

［9］張茜，金若敏，祝曉雯，等.用肝腎共培養體系研究細胞毒性的方法學考察［J］. 中國中醫藥信息雜志，2011，18(11)：36 ～58.

［10］王小鶯，李麟，韓嘵萍，等.復方苦參注射液的體外抗菌作用及急性毒性試驗［J］. 中獸醫學雜志，2011(5)：13～14.