HPLC-ELSD 法測定黃芪泡騰片中黃芪甲苷的含量

金 平，顧 燕

（1.江蘇省中醫(yī)院，南京210029；2.江蘇睿博醫(yī)藥有限公司，江蘇南京211112）

HPLC-ELSD 法測定黃芪泡騰片中黃芪甲苷的含量

金 平1，顧 燕2

（1.江蘇省中醫(yī)院，南京210029；2.江蘇睿博醫(yī)藥有限公司，江蘇南京211112）

目的 建立黃芪泡騰片中黃芪甲苷含量測定方法。方法 采用高效液相色譜和蒸發(fā)光檢測器（HPLCELSD）方法，十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（5 μm，250.0 mm×4.6 mm），流動相水∶乙腈（68∶32），流速1 mL/min；柱溫30℃，載氣流量為2.7 L/min。結果 黃芪甲苷為1.112～6.672 μg時呈良好的線性關系，平均回收率為99.56%（RSD=1.67%），3批樣品每片含黃芪甲苷均在2.00 mg以上。結論 該方法準確可靠、重現性好，可用于黃芪泡騰片中黃芪甲苷的含量測定。

黃芪甙/分析； 色譜法，高壓液相； 含量測定

黃芪泡騰片是黃芪經提取、濃縮、干燥后加輔料制備而成的。功能主治：固本止汗。用于氣虛血虧，表虛自汗，四肢乏力，精神不足或久病衰弱。同類品種黃芪精口服液在臨床上廣泛應用于呼吸系統、消化系統、心血管系統、內分泌系統等疾病[1-2]。現代研究表明，黃芪中主要活性成分黃芪甲苷具有調節(jié)機體免疫功能、保護腎上腺皮質和骨髓功能的效應。本文用高效液相色譜和蒸發(fā)光檢測器（HPLC-ELSD）法建立了黃芪泡騰片中黃芪甲苷的含量測定方法，為產品質量的提高提供參考[3-4]。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 Agilent1100 HPLC儀，蒸發(fā)光散射檢測器；黃芪購自江蘇省藥材公司，經鑒定符合《中華人民共和國藥典》一部2010年版黃芪項下有關規(guī)定。黃芪甲苷對照品（供含量測定用，批號：0781-2003113）購自中國藥品生物制品檢定所。黃芪泡騰片，自制。乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

1.2.1 色譜條件 十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（5 μm，250.0 mm×4.6 mm）；流動相：水∶乙腈（68∶32），流速1 mL/min；柱溫30℃；蒸發(fā)光散射檢測器。理論塔板數按黃芪甲苷計算應不低于3 000。

1.2.2 對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液的制備

1.2.2.1 對照品溶液 精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成0.5 mg/mL的對照品溶液。

1.2.2.2 供試品溶液 取黃芪泡騰片10片，研細，取細粉2 g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇適量提取3 h，蒸干甲醇，殘渣加水10 mL溶解，水飽和正丁醇提取3次，每次40 mL，合并正丁醇液，氨試液洗滌2次，每次40 mL，氨試液棄去，正丁醇液蒸干，殘渣以少量甲醇轉移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，即得。

1.2.2.3 陰性對照液 按處方比例稱取除去黃芪的輔料1.4 g，精密稱定，按1.2.2.2項下供試品溶液制備方法制成陰性對照液。

1.2.3 測定法 取對照品溶液5、10 μL及供試品溶液10 μL，注入HPLC儀，測定，以外標兩點法對數方程計算，即得。

1.3 方法學驗證

1.3.1 專屬性試驗 按1.2.2項下方法制備陰性對照液、對照品溶液及供試品溶液，按測定方法進行檢測，取陰性對照液、黃芪甲苷對照品溶液及供試品溶液各10μL，注入HPLC儀，考察陰性制劑是否對檢測存在干擾。

（5）獲取貸款的回收款后，按照約定，貸款服務機構嚴格履行約定。一方面，履行時限約定，對保管部門完成資金劃撥。另一方面，履行信息披露約定，向信托公司提交數據分析及管理報告。

1.3.2 線性關系考察 精密稱取黃芪甲苷對照品11.12mg于10 mL的容量瓶中，用甲醇溶解定容，作為儲備液。分別精密吸取儲備液 1、2、3、4、5、6 mL于 10mL容量瓶中，用甲醇定容至10 mL。精密吸取6個不同濃度的對照液10 μL，注入HPLC儀，各進2針，用HPLC儀測定，計算回歸方程與相關系數。

1.3.3 精密度試驗 按照1.2.2.2項下方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液重復進樣測定6次，測定，計算相對標準偏差（RSD），考察精密度。

1.3.4 穩(wěn)定性試驗 按照1.2.2.2項下方法制備供試品溶液，每隔2 h按1.2.3項下測定方法進行檢測，共考察12 h，考察溶液的穩(wěn)定性。

1.3.5 重現性試驗 取黃芪泡騰片10片，研細，取細粉2 g，精密稱定，平行6份，按1.2.2.2項下方法制備供試品溶液，按1.2.3項下測定方法進行檢測，考察重現性。

1.3.6 加樣回收率試驗 取黃芪泡騰片細粉1 g，精密稱定，平行9份，另取配制成一定濃度的黃芪甲苷對照品溶液，分別精密移取相當于樣品中黃芪甲苷量的80%、100%、120%的黃芪甲苷對照品溶液各3份加入樣品中，制備加樣回收供試品液，按1.2.3項下測定方法進行檢測，計算回收率。

1.3.7 樣品含量測定 分別取3個批號（120302、120909、120404）的黃芪精泡騰片細粉2 g，精密稱定，每個批號平行2份，按1.2.2.2項下方法進行制備，按1.2.3項下測定方法進行檢測，計算黃芪甲苷的含量。

2 結 果

2.1 專屬性試驗結果 陰性制劑在黃芪甲苷的保留時間處無干擾，見圖1、2、3。

圖1 黃芪甲苷對照品

圖2 黃芪泡騰片供試品

圖3 黃芪泡騰片陰性制劑

2.2 線性關系考察結果 黃芪甲苷為1.112～6.672 μg時呈良好的線性關系。見表1。

表1 線性關系考察結果

2.3 精密度試驗結果 連續(xù)進樣6針，RSD為0.54%，本方法精密度良好。見表2。

表2 精密度試驗結果

2.4 穩(wěn)定性試驗結果 12 h內峰面積對數 RSD為0.20%，表明供試品溶液在12 h內穩(wěn)定。見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗結果

2.5 重現性試驗結果 平行測定6份，結果黃芪甲苷含量為0.0977%，RSD為1.42%，表明該方法重現性好。見表4。

表4 重現性試驗結果

2.6 加樣回收率試驗結果 加樣回收率為 97%～103%，平均回收率為99.56%，RSD為1.67%，該含量測定方法的回收率較好。見表5。

表5 加樣回收率試驗結果

2.7 樣品含量測定結果 3批樣品的每片含黃芪甲苷的含量均在2.00 mg以上，可作為制定質量標準的參考。見表6。

表6 樣品含量測定結果

3 討 論

黃芪甲苷紫外吸收弱，僅在末端有弱吸收，參照藥典中黃芪項下的含量測定方法，采用HPLC-ELSD法選擇合適的流動相及檢測器參數。《中華人民共和國藥典》中黃芪藥材的含量測定方法，樣品處理復雜，而黃芪泡騰片中黃芪是經過加工制成的，對有效成分進行了富集，因而處理簡單。

黃芪單方或復方中黃芪甲苷的含量測定方法均有文獻報道，早期有薄層掃描法等，近幾年均采用HPLCELSD法。流動相有甲醇與水或乙腈和水，經比較本制劑采用乙腈與水作為流動相。有研究報道各方法中柱溫有30、35、40℃，漂移管的溫度也從65～100℃不等[5-12]。經過試驗，本制劑柱溫采用30℃，漂移管溫度80℃，氮氣作為載氣，流速2.7 L/mim，黃芪甲苷峰形好，與其他成分有良好的分離度。樣品處理方法中采用氨試液將其他皂苷轉化為黃芪甲苷，也在一定程度上去除了干擾。

黃芪泡騰片為8類新藥，國內尚未見同品種劑型上市，經試驗優(yōu)選了樣品的處理方法及色譜條件的參數，為控制黃芪泡騰片中活性成分黃芪甲苷的含量提供了檢測依據。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.21.039

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1009-5519（2015）21-3302-03

2015-06-13）

金平（1985-），女，江蘇南京人，中藥師，主要從事中藥調配工作；E-mail：guoguo_091113@163.com。