T-Synthase及Tn、s-Tn抗原在上皮性卵巢癌中的表達及其臨床意義

邸曼,陳必良,陳良鳳,張千峰,周卓

(西京醫院 婦產科，陜西 西安 710032)

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T-Synthase及Tn、s-Tn抗原在上皮性卵巢癌中的表達及其臨床意義

邸曼,陳必良Δ,陳良鳳,張千峰,周卓

(西京醫院 婦產科，陜西 西安 710032)

目的 探討T-Synthase及Tn、s-Tn抗原在上皮性卵巢癌中的表達及其臨床意義。方法 選取西京醫院從2012年1月～2014年1月獲得的30例上皮性卵巢癌和5例正常卵巢組織標本，應用免疫組化SABC法檢測比較標本中T-Synthase及Tn、s-Tn抗原的表達情況。結果 T-Synthase在正常卵巢組織中的表達陽性率為100.00%，而在上皮性卵巢癌組織中只有6.67%，2組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。Tn抗原在正常卵巢組織中的表達陽性率為20.00%，而在上皮性卵巢癌組織中有83.33%，2組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。s-Tn抗原在正常卵巢組織中的表達陽性率為20.00%，而在上皮性卵巢癌組織中有96.67%，2組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。結論 T-Synthase活性降低使Tn、s-Tn在卵巢癌組織中存在異常表達，T-Synthase、Tn、s-Tn腫瘤相關抗原在卵巢癌的發生和發展中起著重要作用。

上皮性卵巢癌；T-Synthase；Tn；s-Tn

卵巢腫瘤是女性生殖器常見的3大惡性腫瘤之一。由于缺乏早期診斷，卵巢惡性腫瘤死亡率居婦科惡性腫瘤首位，而上皮性卵巢癌占卵巢惡性腫瘤的85%～90%，好發于50～60歲婦女[1]。目前，上皮性卵巢癌發病率逐漸攀升，這就要求提高篩選力度，在早期檢測出上皮性卵巢癌患者，為患者制定合理的治療方案，更好的對患者的預后進行評價。腫瘤的發生涉及的病理生理反應較為復雜，其細胞的異常增殖、黏附、運動，細胞外基質降解，血管生成是目前研究的熱點[2]。在腫瘤發生的分子機制研究中發現，Tn和STn在上皮性卵巢癌中表達[3]，但在正常的組織中不表達或表達很少。遺傳學證據顯示，Tn和STn的高表達是由于伴侶分子Cosmc基因突變導致其功能喪失[4-5]，最終使T-Synthase失活[6]。T-Synthase及Tn、s-Tn抗原可以作為人類癌癥新的分子標志物，而Tn和s-Tn抗原以及Cosmc基因也將成為治療腫瘤的新靶點[7]。本研究旨在通過應用免疫組化SABC法，研究T-Synthase及Tn、s-Tn抗原在上皮性卵巢癌中的表達情況，為臨床提供診斷、治療及預后評價提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 標本來源于西京醫院從2012年1月～2014年1月收治進行手術切除，術后病理檢查確診的原發性上皮性卵巢癌患者30例，平均年齡(52.00±10.56)歲。患者在手術前，均無放化療和免疫治療病史，無癌癥家族史，無煙酒毒物接觸史。按照世界衛生組織(WHO)1998 年卵巢腫瘤組織學分類法，其中漿液性囊腺癌14例，粘液性囊腺癌16例。按照國際婦科聯盟(FIGO)2013年的分期標準，30例上皮性卵巢癌患者中Ⅰ期6例，Ⅱ期10例，Ⅲ期12例，Ⅳ期2例。并取得同期引起他良性疾病而手術切除的正常卵巢組織5例，平均年齡(52.20±8.77)歲。 本研究征得患者同意，并簽署知情同意書，并得到本院倫理委員會批準。

1.2 主要試劑 免疫組化試劑：兔抗人C1GALT1(bs-9685R，1:200)單克隆抗體、兔抗人Tenascin c(bs-1039R，1:200)單克隆抗體均購自北京博奧森生物技術有限公司，鼠抗人TAG72單克隆抗體(ab16838，1:100，英國艾美捷科技有限公司)，SABC法免疫組織化學試劑盒(KIT-5020 羊抗鼠/兔，福州邁新生物技術有限公司)、檸檬酸鹽修復液(0.01 mol M，pH6.0，方法為檸檬酸0.4g，檸檬酸鈉或者檸檬酸三鈉3 g，加蒸餾水至1000 mL即可，此時液體的pH值正好是6.0，自配)，PBS(磷酸鹽緩沖液pH7.2～pH7.4 自配)，3%H2O2(以PBS緩沖液配置)，濃縮型DAB試劑盒(天津灝陽生物制品有限公司)，HE染色試劑盒、Mayer蘇木素均購自鄭州唯爾生物科技有限公司。

1.3 方法 石蠟切片采用HE染色，免疫組化采用SABC法，嚴格參照試劑盒說明書進行。

1.4 評價方法 對于病例切片的讀取，采用2位富有經驗的病例醫師進行讀片，T-Synthase及Tn、s-Tn抗原檢測陽性標準為細胞膜呈染色為黃色或棕黃色染色。評價方法參照Sulzers分級法進行評價[9-10]，依據切片著色強度分為4級：棕褐色陽性顆粒定為3分；棕黃色陽性顆粒定為2分；淺黃色陽性顆粒定為1分；無陽性著色定為0分。依照著色范圍分為4級：Ⅳ級是陽性細胞率≥51%定為3分；Ⅲ級是陽性細胞率定為26%～50%定為2分；Ⅱ級是陽性細胞率≤25%定為1分；Ⅰ級是無陽性細胞著色定為0分。每張切片隨機選取5個高倍視野，分別計數100個細胞的陽性率，求其平均值。切片染色結果結果評價標準為著色強度評分與著色范圍評分之積：0分定為陰性(-)；1～2分定為陽性(+)；3～6分定為中度陽性(++)；7～9分定為強陽性(+++)。在分析結果時，<6分定為陰性，≥6分定為陽性。

1.5 統計學方法 采用軟件SPSS17.0 進行統計學分析，計數資料率的比較采用Fisher確切概率法，以P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 T-Synthase在正常卵巢組織及上皮性卵巢癌組織中的表達情況 T-Synthase在正常卵巢組織中大部分(80.00%)高水平表達，呈強陽性，而在上皮性卵巢癌組織中只有較少部分(6.67%)低水平表達，呈弱陽性。T-Synthase在正常卵巢組織中的表達陽性率為100.00%，而在上皮性卵巢癌組織中只有6.67%，2組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。見圖1、表1。

圖1 T-Synthase在正常卵巢組織和T-Synthase在上皮性卵巢癌組織中的表達(SP，×400)Fig.1 T-Synthase expression in normal ovarian tissue and epithelial ovarian cancer (SP,×400)

組別例數T-Synthase[n(%)]-+++/+++陽性率(%)正常卵巢組織50(0.00)1(20.00)4(80.00)100.00上皮性卵巢癌組織3028(93.33)2(6.67)0(0.00)6.67*

*P<0.05，與正常卵巢組織比較，compared with normal ovarian tissues

2.2 Tn抗原在正常卵巢組織和上皮性卵巢癌中的表達情況 Tn抗原在正常卵巢組織中小部分(20.00%)低水平表達，呈弱陽性，大部分為表達情況為陰性(80.00%)，而在上皮性卵巢癌組織中只有大部分(63.33%)高水平表達，呈強陽性。Tn抗原在正常卵巢組織中的表達陽性率為20.00%，而在上皮性卵巢癌組織中有83.33%，2組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。見圖2、表2。

圖2 Tn抗原在正常卵巢組織和上皮性卵巢癌組織中的表達(SP，×400)Fig.2 Tn antigen expression in normal ovarian tissue and epithelial ovarian cancer(SP,×400)

組別例數Tn抗原[n(%)]-+++/+++陽性率(%)正常卵巢組織54(80.00)1(20.00)0(0.00)20.00上皮性卵巢癌組織305(16.67)6(20.00)19(63.33)83.33*

*P<0.05，與正常卵巢組織比較，compared with normal ovarian tissues

2.3 s-Tn抗原在正常卵巢組織和上皮性卵巢癌中的表達情況 s-Tn抗原在正常卵巢組織中小部分(20.00%)低水平表達，呈弱陽性，大部分為表達情況為陰性(80.00%)，而在上皮性卵巢癌組織中只有大部分(86.67%)高水平表達，呈強陽性。s-Tn抗原在正常卵巢組織中的表達陽性率為20.00%，而在上皮性卵巢癌組織中有96.67%，2組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。見圖3、表3。

圖3 s-Tn抗原在正常卵巢組織和上皮性卵巢癌組織中的表達(SP，×400)Fig.3 s-Tn antigen expressions in normal ovarian tissue and epithelial ovarian cancer(SP,×400)

組別例數s-Tn抗原[n(%)]-+++/+++陽性率(%)正常卵巢組織54(80.00)1(20.00)0(0.00)20.00上皮性卵巢癌組織301(3.33)3(10.00)26(86.67)96.67*

*P<0.05，與正常卵巢組織比較，compared with normal ovarian tissues

3 討論

尋找腫瘤相關的特異性標志物是目前針對腫瘤的診斷和治療的研究方向之一。CA72-4、AFP、CA199、CA125、CEA、CA15-3等許多的腫瘤標志物已被臨床獲得廣泛的應用[11]，但是它們的特異性和靈敏度還不夠高，所以科研人員和醫務人員都在不斷的尋找新的腫瘤標志物， 上皮性卵巢癌的在這方面更是如此[12]。同樣在治療方面，也迫切找到在上皮性卵巢癌組織中具有特異性的靶點。T-Synthase是合成核心1結構必須且唯一的糖基轉移酶，而在人體許多生理過程中起到至關重要的生物學功能的物質粘蛋白型O-聚糖就是從核心1結構的一種衍生物T-Synthase的主要功能是把半乳糖添加到GalNAcal-Ser/Tn抗原的糖鏈上。人體中形成有活性的T-Synthase必須有一個重要的分子伴侶Cosmc的參加，而在很多腫瘤如胃癌、肺腺癌、乳腺癌、宮頸癌、結腸癌中Cosmc基因都發生了突變，最終造成當Cosmc的功能喪失，這樣將會直接造成T-Synthase的合成障礙或活性減低，甚至失活，最終會造成組織細胞僅能合成Tn抗原和s-Tn[7，13-15]。

通過本實驗得出T-Synthase在正常卵巢組織中的表達陽性率為100.00%，而在上皮性卵巢癌組織中只有6.67%，2組間比較差異有統計學意義(P<0.05)，這說明T-Synthase在正常卵巢組織中的表達較上皮性卵巢癌組織中的表達陽性率較高，T-Synthase主要在正常卵巢組織中表達，而在上皮性卵巢癌組織中幾乎不表達；T-Synthase在正常卵巢組織中大部分(80.00%)高水平表達，呈強陽性，而在上皮性卵巢癌組織中只有較少部分(6.67%)低水平表達，呈弱陽性，這說明T -Synthase在正常卵巢組織中表達一般為高水平，而在上皮性卵巢癌組織中即使有少數表達也為低水平。Tn抗原在正常卵巢組織中的表達陽性率為20.00%，而在上皮性卵巢癌組織中有83.33%，2組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。Tn抗原主要在上皮性卵巢癌組織中表達，而在正常卵巢組織中幾乎不表達；Tn抗原在正常卵巢組織中小部分(20.00%)低水平表達，呈弱陽性，大部分為表達情況為陰性(80.00%)，而在上皮性卵巢癌組織中只有大部分(63.33%)高水平表達，呈強陽性，說明Tn抗原在上皮性卵巢癌組織中表達一般為高水平，Tn抗原在正常卵巢組織中即使有少數表達也為低水平。s-Tn抗原在正常卵巢組織中的表達陽性率為20.00%，而在上皮性卵巢癌組織中有96.67%，2組間比較差異，有統計學意義(P<0.05)，這說明s-Tn抗原在主要在上皮性卵巢癌組織中表達，而在正常卵巢組織中幾乎不表達；s-Tn抗原在正常卵巢組織中小部分(20.00%)低水平表達，呈弱陽性，大部分為表達情況為陰性(80.00%)，而在上皮性卵巢癌組織中只有大部分(86.67%)高水平表達，呈強陽性，s-Tn抗原在上皮性卵巢癌組織中表達一般為高水平，Tn抗原在正常卵巢組織中即使有少數表達也為低水平。s-Tn抗原在上皮性卵巢癌組織中的廣泛表達，而在正常卵巢組織中的表達有限，提示s-Tn與了上皮性卵巢癌的病情演變有重大關系，且比較有利于區分正常組織與癌變組織，可作為的標志物，在以后的病例診斷中具有巨大的使用價值，這與國內外報道相符合[16-17]，T-Synthase及Tn、s-Tn抗原在上皮性卵巢癌中的整體表達情況說明T-Synthase在正常卵巢組織中含量明顯高于卵巢癌組織，其活性的降低或喪失是導致腫瘤細胞表達Tn、s-Tn 抗原的主要原因，其中Tn、s-Tn的表達量在卵巢癌組織中較正常卵巢組織含量高，且s-Tn比Tn的陽性率和敏感性更高。

綜上所述，本研究確定了T-Synthase、Tn、s-Tn在不同卵巢組織中的表達情況，說明T-Synthase活性降低使Tn、s-Tn在卵巢癌組織中存在異常表達，Tn、s-Tn腫瘤相關抗原在卵巢癌的發生和發展中起著重要作用。

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(編校：吳茜)

T-Synthase and Tn, s-Tn antigen expression in epithelial ovarian cancer and its clinical significance

DI Man,CHEN Bi-liangΔ,CHEN Liang-feng,ZHANG Qian-feng,ZHOU Zhuo

(Department of Gynaecology and Obstetrics, Xijing Hospital, Xi′an 710032, China)

ObjectiveTo study the expression and clinical significance of T-Synthase and Tn,s-Tn antigens in epithelial ovarian tumor.MethodsSamples of 30 patients with epithelial ovarian cancer and 5 patients with normal ovarian tissue were collected from Xijing hospital from January 2012 to January 2014, the expression of T-Synthase and Tn,s-Tn antigens in each groups were detected by SABC immunohistochemistry in histological section and compared.ResultsThe expression positive rate of T-Synthase in normal ovarian tissues was 100.00%, while in epithelial ovarian cancer tissues was 6.67%, the difference was statistical significant (P<0.05).The expression positive rate of Tn antigen in normal ovarian tissues was 20.00%, while in epithelial ovarian cancer tissues was 83.33%, the difference was statistical significant (P<0.05).The expression positive rate of s-Tn antigen in normal ovarian tissues was 20.00%, while in epithelial ovarian cancer tissues was 96.67%, the difference was statistical significant (P< 0.05). ConclusionThe decreased activity of T-Synthase will lead to the abnormal expression of Tn and s-Tn in ovarian cancer tissue.The tumor associated antigen of T-Synthase,Tn and s-Tn plays an important role in the occurrence and development of ovarian carcinoma.

epithelial ovarian cancer; T-Synthase; Tn; s-Tn

邸曼，女，碩士在讀，研究方向：婦科腫瘤，E-mail：446277270@qq.com；陳必良，通訊作者，男，主任醫師，研究方向：圍生醫學與婦科腫瘤，E-mail：cblxjh@fmmu.edu.cn。

R737.31

A

1005-1678(2015)01-0091-04