尼可地爾原料藥含量測定方法的比較研究

肖 瑤成都市食品藥品檢驗研究院，四川成都 610000

尼可地爾原料藥含量測定方法的比較研究

肖 瑤
成都市食品藥品檢驗研究院，四川成都 610000

[摘要]目的 比較尼可地爾原料藥含量測定的不同方法，并確立更加簡單、快速的含量測定方法。 方法 采用高效液相色譜法測定尼可地爾原料藥的含量，并與日本藥局方第16改正版中收載的非水滴定法進行比較。 結果 采用高效液相色譜法尼可地爾的線性范圍為14.32～238.60μg/mL（r=1.0000），平均回收率為100.2%（RSD=0.5%）。兩種方法的測定結果無顯著性差異。 結論 高效液相色譜法簡單、快速、準確，可作為尼可地爾原料藥的含量測定方法。

[關鍵詞]尼可地爾；含量測定；高效液相色譜法；非水滴定法

尼可地爾是鉀通道開放劑，屬于冠脈擴張藥，可有效治療心絞痛，近年在臨床上得到了廣泛的應用。[1-4]尼可地爾的含量測定方法文獻上有報道電化學法[5-6]、分光光度法[7]和高效液相色譜法[8]，而日本藥局方（JP16）收載了尼可地爾原料藥，其含量測定方法為非水滴定法[9]。本研究建立了高效液相色譜法測定尼可地爾的含量，并與日本藥局方（JP16）中的非水滴定法進行比較，兩種測定方法的結果無顯著性差異，而采用本研究建立的高效液相色譜法又能與日本藥局方中尼可地爾有關物質的分析方法實現統一。

1 儀器與試藥

1.1儀器

Agilent1260型高效液相色譜儀，Agilent 1260VWD紫外吸收檢測器；HP8453紫外分光光度儀；賽多利斯BP211D電子天平。

1.2試藥

尼可地爾工作對照品（印度Vital Laboratories Pvt.Ltd.，批號：WS/13：060214，含量：99.8%）；尼可地爾原料藥（印度Vital Laboratories Pvt.Ltd.，批號：N03，N04，N05）；四氫呋喃、三乙胺、三氟乙酸均為色譜純；水為二次蒸餾水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1高效液相色譜法

2.1.1色譜條件 采用Thermo Hypersil GOLD （250mm×4.6mm，5μm）色譜柱；流動相為水-四氫呋喃-三乙胺-三氟乙酸（982︰10︰5︰3）；檢測波長為254nm；柱溫25℃；流速為1mL/min；進樣體積10μL。

2.1.2溶液的制備 供試品溶液的制備 取尼可地爾供試品適量，精密稱定，用流動相溶解并稀釋制成每1mL約含80μg的溶液，作為供試品溶液。

對照品溶液的制備：取尼可地爾工作對照品適量，精密稱定，用流動相溶解并稀釋制成每1mL約含80μg的溶液，作為對照品溶液。

2.1.3專屬性試驗 取尼可地爾工作對照品適量，分別在高溫、高濕、光照、酸、堿及氧化條件下[10]進行破壞，并進樣分析，見圖1。結果表明尼可地爾峰與其他雜質峰分離良好，說明方法專屬性良好。

2.1.4檢測限與定量限 根據S/N=3為檢測限、S/N=10為定量限，精密稱取尼可地爾工作對照品適量，用流動相溶解并稀釋制成相應溶液，按“2.1.1”項下進行測定，結果尼可地爾檢測限為0.29ng，定量限為0.86ng。

2.1.5線性與范圍考察 精密稱取尼可地爾工作對照品適量，用流動相溶解并稀釋成濃度為14.32、28.63、57.26、95.44、143.2、238.60μg/mL的系列對照品溶液，按“2.1.1”項下進行測定，記錄色譜圖，見表1。以峰面積（y）為縱坐標，尼可地爾濃度（x）為橫坐標，進行線性回歸，回歸方程為y=23.162x+2.4318（r=1.0000），結果表明尼可地爾在14.32～238.60μg/mL范圍內線性關系良好。

圖1　強制降解試驗Ⅰ：高濕，Ⅱ：高溫，Ⅲ：光照，Ⅳ：酸破壞，Ⅴ：堿破壞，Ⅵ：氧化

表1　線性測定結果

2.1.6回收率試驗 取已知含量的尼可地爾原料藥（含量：99.9%）約10mg，精密稱定，共9份，分別置250mL量瓶中，精密加入尼可地爾工作對照品適量，按“2.1.2”項下操作，分別制成濃度約為64、80 和96μg/mL的溶液，各三份，按“2.1.1”項下進行測定，記錄峰面積，計算回收率。結果見表2。低濃度回收率為100.4%，中濃度回收率為99.5%，高濃度回收率為100.7%；RSD分別為0.09%、0.15%、0.04%。平均回收率（n=9）為100.2%，RSD為0.5%。

2.1.7重復性試驗 取同一批尼可地爾原料藥（批號：N03）6份，按“2.1.2”項下制備供試品溶液，進行測定，平均含量為99.9%，RSD為0.7%，表明方法重復性良好。

2.1.8供試品溶液穩定性試驗 取供試品溶液，在室溫下放置，分別在0、2、4、6、8、24h按“2.1.1”項下進行測定，見表3。

表2　HPLC法回收率測定結果

表3　供試品溶液穩定性試驗結果

尼可地爾峰面積RSD為0.4%，結果表明供試品溶液在24h內穩定。

2.1.9耐用性 取同一批尼可地爾原料藥（批號：N03），按“2.1.2”項下制備供試品溶液，分別使用Thermo Hypersil GOLD（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱、資生堂（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱、菲羅門（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱進行測定，結果含量分別為99.9%、99.7%、99.9%，表明方法耐用性良好。

2.1.10樣品測定 取3批尼可地爾原料藥，按“2.1.2”項下制備供試品溶液和對照品溶液，按“2.1.1”項下進行測定，記錄峰面積，按外標法計算尼可地爾含量，見表6。

2.2非水滴定法

2.2.1測定方法 取本品約0.3g，精密稱定，加醋酸酐-冰醋酸（7︰3）混合溶液30mL使溶解，照電位滴定法（中國藥典2010年版二部附錄ⅦA），用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1mL高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當于21.12mg的C8H9N3O4。

2.2.2重復性試驗 取同一批尼可地爾原料藥（批號：N03）6份，按“2.2.1”項下測定，平均含量為100.4%，RSD為0.5%。

2.2.3回收率試驗 精密稱取尼可地爾工作對照品適量，按“2.2.1”項下測定見表4。

表4　非水滴定法回收率測定結果

2.3兩種測定方法結果的比較

取尼可地爾原料藥（批號：N03）用高效液相色譜法和非水滴定法進行測定，并將結果進行t檢驗[11-13]分析，t測＝2.109（＜t表2.228），P=0.18（＞0.05），結果表明兩種方法的測定結果無顯著性差異（α=0.05），見表5。

表5　兩種含量測定方法結果比較（n=6）

分別采用高效液相色譜法和非水滴定法測定尼可地爾原料藥的含量，見表6。

表6　樣品含量測定結果（n=3）

3 討論

尼可地爾在日本藥局方中有收載，其中有關物質檢查項采用高效液相色譜法，因此本文借鑒有關物質的液相色譜條件建立了含量測定方法。對尼可地爾進行強制降解試驗發現尼可地爾對濕度和光照相對穩定，不易被破壞；而在高溫、酸堿及氧化條件下很不穩定，易被破壞。在尼可地爾供試品溶液室溫放置過程中，部分雜質會不斷增加，但對尼可地爾主峰面積影響不大，所以在含量測定中尼可地爾室溫放置24h穩定。

在考察該含量測定方法與日本藥局方中的非水滴定法的測定結果有無顯著性差異時，我們取N03批樣品各6份，分別測定，將兩個樣本均值進行比較。首先進行F檢驗，結果F測＜F0.05，5，5，說明兩組數據的精密度不存在顯著性差異，即兩種方法的精密度相當；然后進行t檢驗，結果t測＜t0.05，10，說明在95%的置信水平上兩種方法的測定結果無顯著性差異。表明該高效液相色譜法能有效控制尼可地爾的質量。

雖然非水滴定法作為容量分析法測定結果準確度高、成本低，但是當對樣品進行批量分析檢驗時，其時間成本偏高，而本文建立的高效液相色譜法利用儀器的高效、準確可以為藥物分析工作者帶來便利。另外由于該含量測定方法與有關物質項的色譜條件一致，所以能一定程度上縮短藥品檢驗時間、提高檢驗工作效率。

作為抗心絞痛的有效治療藥物，目前尼可地爾的劑型有片劑、注射劑等[14-16]，本研究建立的含量測定方法可以為后續的制劑研究提供參考。

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[中圖分類號]R927.2

[文獻標識碼]B

[文章編號]2095-0616（2015）23-75-04

收稿日期：（2015-07-29）

Comparative study on determination method of nicorandil

XIAO Yao
Chengdu Institutes for Food and Drug Control, Chengdu 610000,China

[Abstract]Objective To compare different methods for the determination of nicorandil and establish a more simple and faster determination method. Methods The HPLC method was used to determine the content of nicorandil and compared with nonaqueous titration method stated in the Japanese pharmacopoeia sixteenth edition. Results The linear range of nicorandil was 14.32 - 238.60μg/mL（r=1.0000）,and the average recovery rate was 100.2% （RSD=0.5%）by HPLC. There was no significant difference between the results of HPLC and nonaqueous titration method. Conclusion The HPLC method was simple, fast and accurate, which could be used to determine the content of nicorandil.

[Key words]Nicorandil; Determination; HPLC; Nonaqueous titration