復方人參揮發油氣霧劑對異丙腎上腺素致大鼠心肌缺血損傷的影響

丁云錄，李馳坤，歐喜燕，李曉兵，張琦，陳聲武*

（長春中醫藥大學，長春130117）

復方人參揮發油氣霧劑對異丙腎上腺素致大鼠心肌缺血損傷的影響

丁云錄，李馳坤，歐喜燕，李曉兵，張琦，陳聲武*

（長春中醫藥大學，長春130117）

目的觀察復方人參揮發油氣霧劑對異丙腎上腺素（ISO）誘導的急性心肌缺血損傷大鼠心電圖和血清心肌酶的影響。方法72只Wistar大鼠隨機分為6組，即正常對照組、模型對照組、陽性對照組、復方人參揮發油氣霧劑3個劑量組，每組12只。采用腹腔注射ISO方法復制大鼠急性心肌缺血模型，觀測心電圖，檢測心肌組織中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量以及血清天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）、乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸磷酸激酶（CK）活性。結果復方人參揮發油氣霧劑能明顯提高心肌組織中SOD活性，降低心肌組織中MDA含量，降低血清AST、LDH和CK活性，并改善心電圖的異常，與心肌缺血模型組比較有統計學意義（P＜0.05，P＜0.01）。結論復方人參揮發油氣霧劑可有效抑制急性心肌缺血損傷大鼠ST段的抬高和調節心肌酶活性，保護心肌細胞膜的結構完整性，從而保護缺血損傷心肌。

心肌缺血；異丙腎上腺素；復方人參揮發油氣霧劑

復方人參揮發油氣霧劑由人參超臨界提取物、桂枝超臨界提取物、川芎超臨界提取物、丹參超臨界提取物、甘松超臨界提取物組方而成。其中人參大補元氣，桂枝溫通經脈，丹參通絡止痛，甘松理氣止痛，川芎活血行氣，5味藥配伍合理，益氣養心通絡止痛的功效確切。5種藥物可從不同角度治療冠心病，本研究所述藥物劑型為氣霧劑，可以直接作用于疾病部位或通過吸入達到有效血藥濃度，減少了藥物用量及對胃腸道的刺激性，避免了首過效應，并且可以迅速緩解心絞痛癥狀，較常用口服劑型具有起效迅速，服用方便的優點，更適合應用于冠心病急癥治療。本研究旨在證實其對異丙腎上腺素誘導的急性心肌缺血損傷大鼠心電圖和血清心肌酶的影響，為復方人參揮發油氣霧劑對冠心病心絞痛臨床治療提供科學研究依據。

1 實驗材料

1.1 動物Wistar大白鼠，清潔級，雄性，體質量（200±20）g。動物合格證號：SCXK-（吉）2011-0004，購于長春市億斯實驗動物技術有限責任公司。

1.2 藥品及試劑復方人參揮發油氣霧劑由長春中醫藥大學研發中心提供。陽性對照藥：硝酸甘油氣霧劑，規格：0.5 mg／撳，200撳／瓶，批號20120321，山東京衛制藥有限公司產品。鹽酸異丙腎上腺素注射液，批號：120701，上海禾豐制藥有限公司產品。天冬氨酸氨基轉移酶（AST）試劑盒，批號：120521，中生北控生物科技股份有限公司產品。肌酸激酶（CK）試劑盒，批號：120511，中生北控生物科技股份有限公司產品。乳酸脫氫酶（LDH）測試盒，批號：20120911，南京建成生物工程研究所產品。丙二醛（MDA）測試盒，批號：20120911，南京建成生物工程研究所產品。超氧化物歧化酶（SOD）測試盒，批號：20120911，南京建成生物工程研究所產品。

1.3 儀器Powerlab／8s型八導數據分析記錄儀及相關附件，澳大利亞埃德公司產品。酶標儀，型號：BIO680，日本BIORAD公司產品。可調高速勻漿器，型號：FSH-2，江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司生產。電熱恒溫水浴鍋，型號：HH·SY21-Ni，北京長源試驗設備廠產品。臺式高速冷凍離心機，型號：Biofuge Stratos，德國賀利氏公司產品。

2 實驗方法［1-5］

Wistar雄性大鼠72只，體質量（200±20）g，隨機分為：正常對照組，模型對照組，陽性對照藥組，復方人參揮發油氣霧劑高、中、低劑量組，共6組，每組12只。每天噴霧給藥1次，連續7 d。最后1次噴霧給藥30 min后，將動物腹腔注射10%的水合氯醛（400 mg／kg）體質量麻醉，仰位固定于鼠板上，穩定30 min，記錄一段正常標準Ⅱ導聯心電圖。待大鼠腹腔注射給藥1 h后，腹腔注射異丙腎上腺素2 mg／kg體質量。隨后，記錄1、3、5、10、30 min的標準Ⅱ導聯心電圖。以大鼠在腹腔注射異丙腎上腺素后各檢測時間點心電圖ST段偏移絕對值為觀測指標。1 h后，腹主動脈取血，分離血清，按試劑盒要求操作測CK、LDH、AST。取心臟，制作心肌勻漿，離心取上清液，按試劑盒要求操作測MDA、SOD。試驗數據以均數±標準差（ˉx±s）表示，統計學處理方法采用組間t檢驗。

3 實驗結果

本試驗通過腹腔注射大劑量異丙腎上腺素，造成大鼠亞急性心肌缺血的實驗動物模型。隨后，觀察了3個不同給藥劑量的復方人參揮發油氣霧劑對該種缺血性實驗動物模型心電圖的影響。結果表明，復方人參揮發油氣霧劑對異丙腎上腺素所引起的大鼠心肌缺血有明顯的保護作用。見表1。

表1 復方人參揮發油氣霧劑對異丙腎上腺素所致大鼠缺血性心電圖的影響（ˉx±s，n＝12）

當心肌梗死后，可導致心肌細胞及周圍組織溶解及壞死。壞死后的心肌細胞內糖原竭耗，肌紅蛋白外溢，CK、AST及LDH釋放入血。因此，血清心肌酶含量的變化是反映梗死程度的重要指標［6-7］。從表2所列數據可以看出，模型組動物血清AST、CK和LDH的釋放量均明顯高于對照組（P＜0.01或P＜0.05），表明模型復制成功。在給予復方人參揮發油氣霧劑藥物干預后，復方人參揮發油氣霧劑高劑量可以明顯降低大鼠血清中異常升高的AST、CK和LDH含量（與模型對照組比較均P＜0.05）；復方人參揮發油氣霧劑中劑量可以明顯降低大鼠血清中異常升高的CK和LDH含量（與模型對照組比較均P＜0.05）。上述試驗結果表明，復方人參揮發油氣霧劑在心肌缺血條件下，通過預防性給藥，可以明顯減少心肌酶的釋放，減輕心肌損傷程度。詳細結果見表2。

表2 復方人參揮發油氣霧劑對心肌缺血大鼠血清AST、CK、LDH含量的影響（ˉx±s，n＝12）U／L

隨著心肌缺血損傷機制研究的深入，發現大量氧自由基生成及脂質過氧化物反應增強是心肌缺血損傷的主要機制之一［8-10］，SOD作為氧自由基清除酶能清除超氧陰離子，保護心肌細胞，減輕心臟功能的損傷程度。其活力的高低常間接地反映機體清除自由基的能力，當心肌缺血受損時可導致SOD活性降低。MDA則在一定程度上反映機體內脂質過氧化的程度，間接反映細胞損傷的輕重。因此，冠心病患者心肌中SOD活性下降及MDA含量升高也是反映心肌缺血、缺氧程度的重要標志。本試驗中，模型對照組血清中過氧化脂質代謝產物MDA含量顯著升高；相反，超氧陰離子自由基清除酶SOD活性卻明顯下降。表明在心肌缺血缺氧損傷后產生了大量的過氧化脂質代謝產物MDA，同時使氧自由基清除酶SOD大量被消耗。從試驗結果中可以看出，復方人參揮發油氣霧劑高劑量組及中劑量組均有降低動物心肌勻漿中過氧化脂質代謝產物MDA含量及升高超氧陰離子自由基清除酶SOD活性的作用（與模型對照組比較P＜0.01或P＜0.05）。詳細結果見表3。

表3 復方人參揮發油氣霧劑對心肌缺血大鼠心肌勻漿組織中SOD和MDA的影響（ˉx±s，n＝12）

4 討論

異丙腎上腺素（ISO）是人工合成的β受體激動劑，臨床上常用于增強心肌收縮，但腹腔注射大劑量ISO可因增加心肌耗氧而造成大鼠急性心肌缺血，其心電圖、心肌酶學及組織病理學變化均類似于人類急性心肌梗死的病變特征［11］。與其他心肌缺血動物模型相比，這種模型方法成本低、操作簡單、可重復性強，且心肌壞死為非特異性損傷，目前已廣泛應用于探索心肌缺血壞死的發生機制和評價其防治措施的實驗研究。

ISO通過收縮冠狀動脈、增強心肌收縮力和增加心肌耗氧量等多方面機制誘發心肌缺血。在心肌缺血的實驗研究中，多以ST段抬高的毫伏數表示心肌損傷的程度。心肌缺血缺氧時，細胞膜通透性增強導致心肌酶外漏，其中尤以AST、LDH和CK為顯著，其含量與缺血缺氧程度呈正比［12］。氧自由基與心肌缺血損傷有密切關系，心肌缺血后SOD活性下降，而MDA大量蓄積，破壞了細胞膜的結構和功能，引起心肌細胞嚴重損傷，故其可判斷心肌損傷程度［13-14］。

本研究采用經典腹腔注射異丙腎上腺素誘導急性心肌缺血模型，觀察復方人參揮發油氣霧劑對模型動物心肌缺血損傷程度的影響。實驗結果顯示：復方人參揮發油氣霧劑可改善心電圖ST段偏移，降低心電圖ST段的異常抬高，同時明顯抑制急性心肌缺血時AST、CK、LDH的釋放，有降低動物心肌勻漿中過氧化脂質代謝產物MDA含量及升高超氧陰離子自由基清除酶SOD活性的作用，對抗ISO誘發大鼠所致的心肌缺血損傷，表明復方人參揮發油氣霧劑可保護心肌細胞膜結構完整性，對缺血性損傷的心肌細胞具有良好預防作用。

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Effects of ffrshfyqwj E1 on electrocardiogram and cardiac enzymes of myocardial injury induced by isoproterenol in rats

DING Yunlu，LI Chikun，OU Xiyan，LI Xiaobing，ZHANG Qi，CHEN Shengwu*
（Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，China）

ObjectiveTo observe the effects of ffrshfyqwj on electrocardiogram and cardiacenzymes of myocardial ischemic injury induced by isoproterenoe（ISO）in rats.MethodsSeventy-two Wistar rats were randomly divided into six groups as following（n＝12）.Acute myocardium ischemia rat model was established by ip of ISO.The level of，malondialdehyde（MDA）and superoxide dismutase（SOD）in myocardial homogenate and the content of AST，LDH，CK in serumwere observed after ISO injection.Rat ECGwas also recorded.ResultsFfrshfyqwj could significantly increase SOD activity and decrease content of MDA，AST，LDH，CK and improve the abnormity of ECG（P＜0.05，P＜0.01）.ConclusionFfrshfyqwj can inhibit the elevation of ST-T period ofacute myocardial ischemia rats，and regulate the activity of cardiac enzymes to protect the ischemic myocar-dium.

myocardial ischemia；isoproterenol；ffrshfyqwj

R285.5

A

1003-5699（2015）09-0945-04

：張瑞彬

2015-03-13）

10.13463／j.cnki.jlzyy.2015.09.024

吉林省中醫藥管理局中醫藥科技項目（YJS-0201）；吉林省科技發展計劃項目（20110932）。

丁云錄（1979-），男，大學本科，助理研究員，主要從事藥理學研究。

*通信作者：陳聲武，電話-（0431）86177510；電子信箱-chenshengwu 1958＠yahoo.com.cn