不同途徑注入大腸埃希菌致家兔熱癥蒙醫(yī)未熟熱期、成熟熱期模型研究△

額爾敦朝魯 加曼·沙俄 紀(jì)月齡 李 立 楊玉秋 胡玉榮 趙福全 王高娃 高玉峰 包春生

(1.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028007;2.內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000)

蒙醫(yī)將溫?zé)岵“Y按其發(fā)熱過程分若干階段進(jìn)行辨證、分期論治［1］，其中，未熟熱期、成熟熱期是熱癥最常見的階段即證期。未熟熱期是溫病的初始階段，大多數(shù)感染性疾病早期均出現(xiàn)未熟熱期，未熟熱期因疾病和治療干預(yù)等或治愈或轉(zhuǎn)變?yōu)槎鄠€(gè)不同的證期，其每個(gè)證期癥候、治療方

法、預(yù)后均不同，因此未成熟熱證期是熱癥診療的關(guān)鍵時(shí)段。成熟熱期為單純熱，因易于診斷并可進(jìn)行單純的清熱治療，因此使未熟熱證轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒鞜嶙C是臨床治療的主要原則。為以現(xiàn)代方法研究這一病機(jī)理論，作者在前期研究基礎(chǔ)上采用家兔不同途徑注射大腸埃希菌致發(fā)熱的方法［2］建立蒙醫(yī)未熟熱證期轉(zhuǎn)變成熟熱證期的模型，對比觀察和分析模型動(dòng)物的體溫和癥狀變化，探討該模型能否應(yīng)用于蒙醫(yī)溫病研究，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物: 選用日本大耳白兔體重在2.0 ～2.5kg，雌雄兼用，雌兔不孕，購于吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。許可證號: SCXK-吉20130002。將基礎(chǔ)體溫在38.5 ～39.5 ℃之間的日本大耳白兔隨機(jī)分為腦刺痛組、腹刺痛組、黏熱癥組和空白組各8 只。

1.1.2 藥品和儀器: 大腸埃希菌購于衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所，菌號44825 -3。IL -1、IL -6、TNF -α 試劑盒購于上海滬尚生物科技有限公司。全自動(dòng)多功能酶標(biāo)儀: 芬蘭Thermo，型號MK3;細(xì)菌標(biāo)準(zhǔn)比濁儀: 法國生物梅里埃公司，型號DENSIMAT。

1.2 方法

1.2.1 家兔基礎(chǔ)體溫的測定: 采用人工測肛溫法［3］，實(shí)驗(yàn)前將家兔固定，安靜1h 后，每隔1h 測體溫3 次，取3 次體溫平均值為基礎(chǔ)體溫。

1.2.2 模型的建立: 腦刺痛組采用小腦延髓池法［4］，固定家兔，模型組家兔每只經(jīng)小腦延髓池注射8 ×107個(gè)/mL［5］的大腸埃希菌溶液;腹刺痛組采用腹腔多點(diǎn)注射法，仰臥位固定家兔，模型組家兔每只腹腔內(nèi)分4 個(gè)點(diǎn)注射3 ×108個(gè)/mL［5］的大腸埃希菌溶液1mL;“黏”熱癥組采用耳緣靜脈注射法，模型組每只家兔耳緣靜脈注射8 ×107個(gè)/mL［6］大腸埃希菌溶液。每種模型試驗(yàn)空白組按同一途徑注射等量的生理鹽水。注射完畢開始測體溫、觀察家兔癥候表現(xiàn)，此期間家兔處于自由飲水、進(jìn)食狀態(tài)。

1.2.3 觀測指標(biāo): 體溫觀察: 采用人工測肛溫法，每隔20min 測體溫、連續(xù)測體溫至12h、計(jì)算TRI12，繪出體溫曲線。①發(fā)熱高峰值;②體溫反應(yīng)指數(shù)(Temperature Response Index，TRI)，計(jì)算出12h 體溫反應(yīng)指數(shù)(TRI12)。

1.2.4 觀察未成熟熱、成熟熱期證候 觀察證候包括: 一般活動(dòng)、精神，飲食水量，被毛，出汗，是否寒戰(zhàn)，心率，心跳，呼吸，眼及眼結(jié)膜，耳及部部血管及脈搏、舌、尿、便等。

2 結(jié) 果

2.1 家兔體溫變化: 表1，圖1 可見各模型組體溫曲線有明顯的上升階段，高熱階段，呈現(xiàn)高熱持續(xù)的平臺(tái)，空白組則體溫處于正常范圍波動(dòng)狀態(tài)。

表1 各組家兔發(fā)熱高峰值(℃)、TRI12(cm2)

2.2 模型家兔癥候表現(xiàn)

2.2.1 腦刺痛組: 經(jīng)小腦延髓池注射大腸埃希菌稀釋液之后約60min 后體溫快速上升，并且出現(xiàn)精神稍差，活動(dòng)量減少;被毛時(shí)而聳立，時(shí)而寒戰(zhàn);呼吸淺快，心跳加速;耳時(shí)涼時(shí)熱;耳部血管時(shí)而纖細(xì)時(shí)而飽滿;舌無明顯改變;不進(jìn)食水。其中5 只于180min 時(shí)上述證候消失，2 只于120min 消失，1 只持續(xù)到400min。實(shí)驗(yàn)期間排尿排便的4 只家兔，尿色黃渾濁，糞便顏色變淺，質(zhì)地?zé)o改變;2 只家兔有扭頭靜臥的現(xiàn)象，以上癥候均符合人體疾病蒙醫(yī)溫病未成熟熱期臨床表現(xiàn)［6］，注射大腸埃希菌稀釋液約200min 后多數(shù)家兔出現(xiàn)精神倦怠乏力，被毛雜亂，寒戰(zhàn)消失;呼吸深快，心跳加速不明顯;耳灼熱，耳廓深紅，耳部血管充盈，觸之脈搏緊實(shí)有力;舌無明顯改變;不進(jìn)食水;實(shí)驗(yàn)期間排尿排便的5 只家兔，尿色深黃、有沉渣、氣味臭;糞便顏色淺，質(zhì)地干硬，臭味大。此階段約持續(xù)至900min。以上癥候符合人體疾病溫病成熟熱期臨床表現(xiàn)［7］。

2.2.2 腹刺痛組: 在腹腔注射大腸埃希菌細(xì)菌后約40min后體溫快速上升，并且出現(xiàn)精神差，活動(dòng)減少，被毛直聳，寒戰(zhàn)，呼吸淺快，耳涼，耳部血管纖細(xì)，舌無明顯改變，進(jìn)食水差。其中6 只家兔于130min 時(shí)消失，1 只家兔于80min 時(shí)上述證候消失，1 只家兔持續(xù)到200min。在實(shí)驗(yàn)中3 只家兔尿色無改變，糞便顏色無改變，質(zhì)地有的稀薄，以上癥候符合人體疾病蒙醫(yī)溫病未成熟熱期臨床表現(xiàn)［7］。注射大腸埃希菌細(xì)菌約140min 后多數(shù)家兔出現(xiàn)精神萎靡不振，靜臥不動(dòng)，被毛雜亂無光，呼吸頻率快，心跳加速，耳熱，耳廓赤紅，耳部血管充盈，觸之脈搏緊實(shí)有力，舌紫紅，不進(jìn)食水;在實(shí)驗(yàn)中5 只家尿色赤黃、有沉渣、氣味騷臭，糞便顏色發(fā)黑，質(zhì)地稀薄，臭味大，此階段約持續(xù)至380min。以上癥候符合人體疾病溫病成熟熱期臨床表現(xiàn)［7］。

2.2.3 黏熱癥組: 經(jīng)耳緣靜脈注射大腸埃希菌細(xì)菌后約60min 后體溫快速上升，精神差，活動(dòng)較前增多，寒戰(zhàn)，體表涼，被毛聳立，呼吸較前加快，心跳快;耳發(fā)涼，耳部血管纖細(xì)觸不到動(dòng)脈搏動(dòng);舌發(fā)白;不進(jìn)食水，尿無色透明，便硬，氣味少。上述證候約持續(xù)到200minm。以上癥候符合人體疾病蒙醫(yī)溫病未成熟熱期臨床表現(xiàn)［7］。注射大腸埃希菌細(xì)菌約200min 后多數(shù)家兔出現(xiàn)萎靡不振，體表熱，被毛雜亂，結(jié)膜充血，不再寒戰(zhàn);呼吸加快，心跳較之前加快，觸之耳熱，耳部脈搏緊實(shí)有力，耳廓深紅，耳部血管充盈，舌發(fā)紅，鼻尖濕潤，自動(dòng)少量飲水，進(jìn)食少;實(shí)驗(yàn)期間排尿排便的家兔，尿色深黃、氣味騷臭;糞便顏色淺，質(zhì)地干硬，臭味大。此階段約持續(xù)至450min。以上癥候符合人體疾病溫病成熟熱期臨床表現(xiàn)［7］。

2.2.4 空白組: 注射等量生理鹽水后未發(fā)現(xiàn)異常癥狀，實(shí)驗(yàn)過程體溫波動(dòng)未超過0.4℃，精神狀態(tài)良好，體表溫度正常，舌紫紅色，呼吸心跳平穩(wěn)，色澤正常，脈搏可觸及，尿稍清亮，糞便稍黃。

4 組家兔在不同階段在一般活動(dòng)、精神，飲水，被毛，鼻尖出汗，是否寒戰(zhàn)，噴嚏，呼吸，眼及眼結(jié)膜充血，耳部血管及耳部脈搏、舌、尿、便等方面表現(xiàn)出不同的癥狀變化。

表3 3 組家兔證期及癥狀對比

3 討 論

蒙醫(yī)溫病學(xué)是研究發(fā)熱性疾病的學(xué)科，它把蒙醫(yī)溫病的病因歸結(jié)為疫、騷、傷、毒四大類，把發(fā)熱過程歸結(jié)為8 個(gè)階段即未熟熱、成熟熱、空虛熱、隱伏熱、澡濁熱、散播熱、陳舊熱和寒熱間期等［1］?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)感染性疾病屬蒙醫(yī)疫原性溫病。未熟熱證期是疾病初期臨床表現(xiàn)發(fā)熱伴有寒戰(zhàn)，熱型不規(guī)則，常于傍晚時(shí)體溫升高，全身關(guān)節(jié)、肌肉、骨骼酸痛，乏力、口苦等癥狀以及體現(xiàn)赫依、稀拉、巴達(dá)干共同病因的舌、脈、尿特征性表現(xiàn)的階段。由于未熟熱證期為疾病初始階段，且為此階段可轉(zhuǎn)變?yōu)榭仗摕?、隱伏熱、澡濁熱、散播熱等證期［1］而導(dǎo)致疾病遷延不愈，蒙醫(yī)視未成熟熱證期為治療溫病的關(guān)鍵點(diǎn)。蒙醫(yī)溫病機(jī)制研究尚未見他人報(bào)道，作者在前期內(nèi)毒素致蒙醫(yī)“黏”性腦刺痛癥未熟熱證至成熟熱證期模型研究的基礎(chǔ)上［2］進(jìn)行了大腸埃希菌不同途徑給藥致不同病癥的未熟熱證至成熟熱證期模型。結(jié)果顯示: 與空白組比較，3 個(gè)模型組發(fā)熱高峰值、TRI12 均有顯著升高、有顯著性差異(P＜0.05)，其發(fā)熱高峰值較空白組升高1.3 ～2.0℃，各模型組家兔發(fā)熱過程相當(dāng)并與人體感染性發(fā)熱疾病的發(fā)熱程度相近，體溫達(dá)到40.5℃～41℃。各模型組注射大腸埃希菌溶液后體溫逐漸上升，并出現(xiàn)精神萎靡，活動(dòng)量減少，閉眼，打噴嚏，蜷縮不動(dòng)，被毛直聳，寒戰(zhàn)，呼吸淺快，心跳快，耳時(shí)涼時(shí)熱，耳部血管時(shí)而纖細(xì)時(shí)而飽滿，有的耳下垂、抽搐，舌苔淺白，進(jìn)食水差等同樣的癥狀。腦刺痛組出現(xiàn)抽搐，尿色黃、渾濁，糞便顏色變淺等表現(xiàn)，其它兩組未見此類表現(xiàn)。以上完全符合人體疾病未熟熱證期的診斷要點(diǎn)。繼以上癥狀階段之后，3 組模型均出現(xiàn)精神倦怠乏力，被毛雜亂，寒戰(zhàn)消失;呼吸深快;眼紅，結(jié)膜充血，舌紫紅，鼻尖濕潤，耳灼熱，耳廓深紅，耳部血管充盈，觸之脈搏緊實(shí)有力;尿色赤黃、有沉渣、氣味騷臭，糞便顏色發(fā)黑，質(zhì)地稀薄，臭味大，不進(jìn)食、有飲水等共同的癥狀。此類癥狀符合人體疾病成熟熱證期診斷要點(diǎn)。3 組模型發(fā)熱程度基本一致，差距＜0.5℃。注入細(xì)菌后起始發(fā)熱時(shí)間相近，腹刺痛組于40 min 始出現(xiàn)發(fā)熱，較其它3 組滯后20 min。發(fā)熱持續(xù)時(shí)間各異，腦刺痛組持續(xù)時(shí)間長900 min，腹刺痛、黏熱證各為380 min、450 min。未熟熱證期持續(xù)時(shí)間腦刺痛組較短，占總的發(fā)熱時(shí)間的16.6%，腹刺痛、黏熱證各占41.6%、56%。

綜上，大腸埃希菌不同途徑給藥致熱癥引起的蒙醫(yī)未熟熱證期、成熟熱證期的家兔模型癥狀易于觀察，證期表現(xiàn)迥異易于觀察和鑒別，發(fā)熱持續(xù)時(shí)間、各證期持續(xù)時(shí)間較長，能夠滿足相關(guān)研究內(nèi)容的實(shí)施所需，認(rèn)為此3 種熱癥及證期模型符合蒙醫(yī)疾病特征及演變規(guī)律，可作為相關(guān)機(jī)理及藥效研究模型使用。

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