維生素B4片溶出度方法學研究

林燕瓊,李彩霞,林惠武

(1.廈門大學附屬第一醫院 藥學部， 福建 廈門 361003；2.廈門大學附屬第一醫院思明分院 藥學部，福建 廈門 361000)

?

維生素B4片溶出度方法學研究

林燕瓊1,李彩霞1,林惠武2Δ

(1.廈門大學附屬第一醫院 藥學部， 福建 廈門 361003；2.廈門大學附屬第一醫院思明分院 藥學部，福建 廈門 361000)

目的 建立維生素B4片溶出度檢測方法。方法 采用槳法，以900 mL pH6.8磷酸鹽緩沖溶液為溶出介質，溫度37.0 ℃，轉速為50 r/min，選取時間為45 min，經0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液，采用紫外分光光度法測定維生素B4片的溶出量，檢測波長為262 nm，溶出限度為標示量的80%。結果 維生素B4濃度在4～16 μg/mL范圍內與吸光度呈良好的線性關系，r=0.9999(n=5)，平均回收率為100.1%，RSD=1.0%(n=9)。結論 該方法簡便、靈敏、準確，對不同生產企業的處方、工藝有一定考察作用，可用于維生素B4片的溶出度測定。

維生素B4片；溶出度；紫外分光光度法

維生素B4片又名磷酸氨基嘌呤，可以作為RNA和DNA的組成物質應用于蛋白質生物合成的過程中，主要用于預防治療各種原因引起的白細胞減少癥、急性粒細胞減少癥[1]。其為高溶解性、高滲透性藥物，分子結構式見圖1。

圖1 維生素B4片結構式Fig.1 Vitamin B4 structural formula

其生物藥劑分類系統屬于BCSⅠ類藥物[3]。對于BCSⅠ類藥物制劑，以0.1 mol/L鹽酸溶液為介質，在適當的溶出度試驗條件下，15 min的溶出量大于85%時，可認為藥物的生物利用度不受溶出行為的控制，即制劑的行為與溶液相似。在這種情況下，胃排空速度是藥物吸收的限速步驟。如果藥物溶出比胃排空時間慢，需要在多種介質中測定溶出曲線，在禁食狀態下，胃內滯留(排空)T50%時間為15～20 min。該品種為2015年版《中國藥典》標準提高品種，原標準只采用崩解時限檢查[2]，無法考察不同生產企業的處方、工藝的優劣，本文根據其生物學及藥劑學特性，通過對其溶出度特性的研究，建立了溶出度檢測方法。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 維生素B4片原料藥(貨號3507，天津市天廠家)；維生素B4片購自5家生產企業，各3批，貨號分別為：生產企業A(3501～3503)、B(3504～3506)、C(3508～3510)、D(3517～3519)、E(3541～3543)；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器 RCZ-8M溶出試驗儀(購自大天發科技有限公司)，UV-2600紫外可見分光光度計(購自日本島津公司)，METTLER TOLODO SG2型酸度計(購自德國梅勒特公司)。

1.3 方法 分別選用0.1 mol/L鹽酸溶液(取9 mL濃鹽酸加蒸餾水稀釋至1000 mL)、pH 4.5的醋酸鹽緩沖溶液(取醋酸鈉(三水合物)2.99 g加水溶解，加入2 mol/L醋酸溶液14.0 mL，加水稀釋至1000 mL)、pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液(取0.2 mol/L磷酸二氫鉀溶液250 mL，加0.2 mol/L氫氧化鈉溶液118 mL，用水稀釋至1000 mL)和水(脫氣)4種溶出介質[4]，轉速50 r/min，溫度37.0 ℃的條件下，取樣時間分別為5、15、30、45、60、75 min取樣，取樣5 mL，同時相應地補充溶液5 mL，照紫外分光光度法在(262±2)nm下測定吸光度[5]，另取維生素B4原料藥適量，用相應的溶出介質溶解并稀釋為11 μg/mL的磷酸腺嘌呤溶液，作為對照溶液。

1.4 溶解度及穩定性研究 取磷酸腺嘌呤(維生素B4)原料藥各約1 g，用4種溶出介質溶解并稀釋至25 mL，并置37.0 ℃的水浴中1 h，并不斷振搖制成過飽和溶液。再取原料藥11 mg，用相應的溶出介質溶解并稀釋為每1 mL含11 μg的磷酸腺嘌呤溶液，作為對照溶液，測定并計算過飽和溶液的溶解量，即為該物質的在溶出介質中的溶解度。

1.5 溶出曲線測定 取A廠家3501批、B廠家3504批、C廠家3508批、D廠家3517批、E廠家3541批樣品各6片，分別于上述4種溶出介質中按照1.3項下的方法測定。

1.6 建立的溶出方法 取本品，按照溶出度測定法(中國藥典2010年版二部附錄ⅩC 第二法)[5]，以磷酸鹽緩沖溶液(pH 6.8)900 mL為溶出介質，轉速為50 r/min，依法操作，經45 min時，取溶液適量，濾過，精密量取續濾液適量，用溶出介質定量稀釋制成約含11 μg/mL的溶液，照紫外-可見分光光度法(中國藥典2010年版二部附錄Ⅳ A)[6]，在262 nm波長處分別測定吸光度；另取本品10片，精密稱定，研細，精密稱取適量(相當于平均片重)，用溶出介質定量稀釋制成約含11 μg/mL的溶液，濾過，取續濾液，同法測定，計算每片的溶出量。限度為80.0%。

1.7 方法學驗證[7]

1.7.1 輔料干擾：通過將淀粉、糊精、微晶纖維素、硬脂酸鎂、羧甲淀粉鈉、蔗糖按不同比例混合制備混合輔料，平均每片制劑所含的輔料量按0.09 g計算。

取1片輔料量按1.6項下溶出方法進行操作，經0.45 μm的濾膜過濾，并在220～300 nm波長范圍內掃描。

1.7.2 濾膜吸附試驗：選用C廠家(編號3517)的溶出溶液，采用離心(經4000 r/min，離心5 min)、過濾(經0.45 μm的濾膜)方式，對離心溶液、初濾液及續濾液進行檢測。

1.7.3 試驗方法準確度考察(以回收率表示)：精密稱定原料藥(編號3507)約5、8、10 mg，按濃度50%、80%、100%各平行稱取3份，分別置1000 mL量瓶中，再分別加入混合輔料(相當于1片制劑的量)約0.09 g，用pH 6.8磷酸鹽緩沖溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻。經0.45 μm濾膜過濾，取濾液在262 nm波長處測定吸收度。

1.7.4 線性與范圍：精密稱取原料藥0.01348 g至100 mL量瓶中，加入pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液溶解、定容、搖勻；用刻度吸管精密移取上述溶液3、2、3、5、3 mL分別至25、25、50、100、100 mL量瓶中，用pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液定容、搖勻，所得溶液濃度依次為16.176、10.784、8.088、6.740、4.044 μg/mL；照紫外光度測定法在262 nm波長處測定吸光度。

1.7.5 溶出溶液穩定性考察：選用C廠家(編號3517)的樣品按1.3項下方法操作，經45、75、105、165 min取樣，并經0.45 μm濾膜過濾，取濾液在262 nm波長處測定吸收度。

1.7.6 精密度試驗：精密稱定VB4原料藥約10 mg，平行稱取6份分別至100 mL量瓶中，用pH 6.8磷酸鹽緩沖溶液溶解、定容、搖勻。再精密移取5 mL至50 mL量瓶中，用pH 6.8磷酸鹽緩沖溶液定容、搖勻。在262 nm波長處測定吸收度。

2 結果

2.1 輔料干擾 輔料在261 nm波長處幾乎無吸收，吸光值平均為0.0037(n=5)。故輔料對溶出度測定基本無干擾。

2.2 濾膜吸附試驗 初濾液與離心溶液比較，吸光度下降了1.3%，續濾液與初濾液比較，吸光度未發生變化。說明經0.45 μm的濾膜過濾，濾膜對樣品有吸附作用，濾膜吸附約為1.2%，溶出量減少0.03%，在允許的限度范圍內。

2.3 準確度考察 維生素B4片溶出度的平均回收率100.1%(n=9)，RSD=1.05%，見表1。

表1 回收率試驗結果Tab.1 Results of recovery test

2.4 維生素B4片的溶解度及穩定性研究 維生素B4片的溶解度及穩定性研究結果見表2。維生素B4片在0.1 mol/L的鹽酸溶液中溶解度最高，為20.3 mg/mL，穩定時間為20 h。

表2 維生素B4片在不同介質中的溶解度及穩定性Tab.2 Solubility and stability of Vitamin B4 tablets in different medium

2.5 5家生產企業分別在不同溶出介質中的溶出曲線 5家生產企業分別在不同溶出介質中的溶出曲線見圖2。

圖2 5家生產企業分別在4種溶出介質中的溶出曲線圖比較Fig.2 Comparison of the dissolution curves of 5 production enterprises in four kinds of dissolution medium

2.6 溶出介質的選擇 維生素B4片是速溶制劑， 5家生產企業在0.1 mol/L鹽酸溶液中溶出比較快，5 min樣品溶出量已達到85%以上，無法對生產企業的不同處方、工藝的進行區分；pH 4.5的醋酸鹽緩沖溶液、pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液及水，3種的溶出速率較緩慢，但水無酸堿緩沖能力，對于處方中所產生的酸堿度無法進行控制，故選用pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液較好，能避免制劑對溶出介質酸堿度的干擾。在pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液溶出介質中，有4家生產企業的樣品在溶出時間30 min，樣品的溶出量均達到了80%，故溶出時間設定為45 min。同一溶出介質不同生產企業的溶出曲線見圖3。

圖3 同一溶出介質中不同生產企業的溶出曲線圖比較Fig.3 Comparison of dissolution curves of different production enterprises in the same dissolution medium

2.7 線性與范圍 磷酸腺嘌呤濃度在4～16 μg/mL的范圍內呈良好的線性關系，相關系數為1，線性方程為y=0.0574C+0.0025(n=5，C為μg/mL)。

2.8 溶出溶液穩定性考察和儀器精密度試驗 樣品在45 min內穩定。溶液吸收系數RSD為0.29%，表明儀器的精密度良好。

2.9 驗證試驗 5家生產企業共15批樣品按照2.6方法測定，僅有1批測定結果低于限度80%，其余14批達到限度要求，測定結果見表3。

表3 溶出度測定結果Tab.3 Results of dissolution determination

3 討論

維生素B4屬于生物分類系統BCSⅠ類藥物，其體內吸收性能與溶出度方法已無相關性[8]，建立體外溶出度方法的重要目的是能夠保證藥品批間質量的一致性。

選擇釋放介質的一個重要標準是漏槽條件[9]，漏槽條件是指藥物所處釋放介質的濃度遠小于其飽和濃度，生理學解釋為藥物在體內被迅速吸收，制劑的體外包括釋放度等測定需要模仿體內生理條件的、滿足藥物溶解、吸收的過程，漏槽條件起到了修正作用。因此測定藥物在不同介質中的溶解度可以初步擬定其制劑的釋放介，故選擇pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液作為體外溶出介質。在pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液中維生素B4片的溶出速率較緩慢，對處方工藝有一定區分度，并避免由于片劑本身處方工藝中輔料對溶出介質的酸堿度干擾[10]。

實驗結果顯示D廠家的3517批樣品在45 min時未達到標示量的80%，但該廠家其余2批(批號3518、3519)達到溶出限度，由此可猜測D廠家對其生產工藝進行了調整，由此可看出選擇pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液作為溶出介質對于維生素B4片的體外溶出度測定達到了有效的質量一致性考察目的。

[1] 衛生部藥典委員會編．中華人民共和國衛生部藥品標準．化學藥品及制劑[S]．第一冊．北京：化學工業出版社，1989：137.

[2] 姜德長.維生素B4片溶出度測定方法研究[J].中國藥業,2007,16(2):31-32.

[3] Amidon GL，Lennern H，Shah VP．A theoretical basis for a biophannaceutie drug classification：the correlation of in vitro drug product dissolution and in varo bioavailabilit [J]．Pharm Res，1995，12(3)：413-420.

[4] 謝沐風.如何科學、客觀地制訂溶出度試驗質量標準[J].中國醫藥工業雜志,2012,43(3):243-252.

[5] 國家藥典委員會.中國藥典[M].2010版二部:附錄：85.

[6] 國家藥典委員會.中國藥典[M].2010版二部:附錄：23.

[7] 周海燕,朱曉玲,蔡紀青，等.紫外分光光度法測定維生素B4片含量[J].中國現代應用藥學, 2001, 18(2):138.

[8] 張寧,平其能.生物藥劑分類系統(BCS)及應用進展介紹[J].中國新藥雜志，2008，17(19):1655-1658.

[9] 石雷，范長春.辛伐他汀凝膠骨架緩釋片制備工藝與體外釋放考察[J].中國醫藥導報，2011,26(8)：76-78.

[10] 李芳美.影響片劑溶出度的因素探討[J].廣東藥學，2005,5(15)：19-21.

(編校：王冬梅)

Study on dissolution method of Vitamin B4 tablets

LIN Yan-qiong1,LI Cai-xia1,LIN Hui-wu2Δ

(1.Department of Pharmacy, The First Affiliated Hospital of Xiamen University, Xiamen 361003, China; 2.Department of Pharmacy, Siming Branch of the First Affiliated Hospital of Xiamen University, Xiamen 361000, China)

ObjectiveTo establish a test method for determining the vitamin B4 tablets dissolution. MethodsPaddle method was used to 900 mL pH6.8 phosphate buffer solution as the dissolution medium, the temperature of 37 ℃, the speed of 50 r/min, take time for 45 min. Taking the filtrate through the 0.45 μm microporous membrane filtration, vitamin B4 tablets dissolution quantity determined by ultraviolet spectrophotometry, determined the wavelength of 262 nm, dissolution limit for 80% of the labeled amount. ResultsVitamin B4 concentration had a good linear relationship with the absorbance in 4～16 μg/mL,r=0.9999 (n=5), the average recovery was 100.1%, RSD=1.0% (n=9). ConclusionThe method is simple, sensitive and accurate, has certain effect on prescription and study of the process of different production enterprises, can be used for the dissolution determination of vitamin B4 tablets.

Vitamin B4 tablets;dissolution;UV spectrophotometry

林燕瓊，女，大專，副主任藥師，研究方向：醫院藥學，E-mail:doctorlinyq@163.com；林惠武，通訊作者，男，本科，副主任藥師，研究方向：臨床藥學，E-mail:fjxmlhw361@163.com。

R927.2

A

1005-1678(2015)06-0147-04