RNA結(jié)合蛋白HuR及TTP在結(jié)直腸癌中的表達(dá)和臨床意義①

孫宏建，侯志凌，曹洪濤，段篤文

(1.佳木斯市中心醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154002；2.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003)

RNA結(jié)合蛋白HuR及TTP在結(jié)直腸癌中的表達(dá)和臨床意義①

孫宏建1，侯志凌2，曹洪濤1，段篤文1

(1.佳木斯市中心醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154002；2.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：檢測(cè)RNA結(jié)合蛋白HuR及TTP在結(jié)直腸癌中的表達(dá)，分析兩者在結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用、關(guān)系。方法：免疫組化法檢測(cè)83例患者腫瘤組織以及26例癌旁正常組織中HuR及TTP的表達(dá)。結(jié)果：蛋白HuR在腫瘤細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)，而蛋白TTP在腫瘤組織中的表達(dá)則明顯低于癌旁正常組織中的表達(dá)。經(jīng)Spearman 等級(jí)相關(guān)分析HuR和TTP表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性(P<0.05)。結(jié)論：在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中，信使RNA的穩(wěn)定因子HuR表達(dá)上調(diào)，而信使RNA的降解因子TTP下調(diào)或缺失。在結(jié)直腸癌的發(fā)生過程中可能起拮抗作用。胞質(zhì)HuR蛋白的表達(dá)可促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展。

結(jié)直腸癌；RNA結(jié)合蛋白；人組織抗原R；鋅指蛋白36

信使RNA的降解是調(diào)控許多與腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)的重要機(jī)制。許多惡性腫瘤相關(guān)基因的信使RNA 的3′非翻譯區(qū)(3′untranslated region，3′UTR)含有保守的AU 重復(fù)序列(AU-rich element，ARE)，該序列可以與RNA 結(jié)合蛋白HuR及TTP結(jié)合，發(fā)生相互作用共同調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展[2，3]。本文采用免疫組織化學(xué)方法，檢測(cè)83例結(jié)直腸癌以及26例癌旁正常組織中RNA 結(jié)合蛋白HuR及TTP的表達(dá)水平，探索兩者在結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展中相互關(guān)系，并發(fā)掘HuR和TTP對(duì)結(jié)直腸癌監(jiān)測(cè)、診斷及治療可能具有的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院外科于2008-01～2012-11部分結(jié)直腸癌手術(shù)標(biāo)本共83例：其中男47例，女36例，年齡35～75歲，中位年齡55歲；Dukes分期：A期11例，B26例，C期32例，D期14例；證實(shí)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例，無轉(zhuǎn)移55例，另取距離腫瘤3cm以上的癌旁正常組織26例作為對(duì)照組。全部病例術(shù)后病理診斷明確、臨床資料完整且均為第一次手術(shù)治療的患者。

1.2 試劑

19F12 HuR 單克隆抗體，N-18、G-20 TTP多克隆抗，二抗來自SP-9000免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑盒。

1.3 免疫組織化學(xué)方法

石蠟切片經(jīng)常規(guī)脫蠟至水中, 將切片置于3%的過氧化氫溶液中10min以阻斷內(nèi)源性過氧化氫酶活性，高壓修復(fù),封閉液室溫封閉1h，一抗按說明書稀釋后滴加并4℃過夜,次日滴加二抗,室溫孵育30min，PBS/TBS洗3次，每次5min，滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白工作液室溫孵育30min，DAB顯色, 蘇木素復(fù)染, 切片置于80%、95%、95%、100%酒精脫水，脫水,中性樹膠封片。用緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判定

由兩位觀察者采用雙盲法在高倍鏡下進(jìn)行觀察，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，每個(gè)視野下計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，共計(jì)數(shù)一千個(gè)細(xì)胞。細(xì)胞陽性的染色定義是：細(xì)胞的結(jié)構(gòu)清晰，陽性顆粒的定位良好，背景與著色對(duì)比清晰，陽性表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)均參照Essapen[4]的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn),腫瘤細(xì)胞>10%著色即為陽性。其中HuR蛋白陽性反應(yīng)為棕黃色顆粒在腫瘤細(xì)胞核及胞質(zhì)中均有分布，而TTP蛋白則主要分布于胞質(zhì)中。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS for windows 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)系統(tǒng)軟件進(jìn)行處理，其中計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行檢驗(yàn)，兩種RNA結(jié)合蛋白HuR和TTP在結(jié)直腸癌中表達(dá)的相關(guān)性則運(yùn)用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，均以P<0.05差異為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RNA結(jié)合蛋白HuR和TTP的表達(dá)情況

顯示HuR和TTP在腫瘤組織以及癌旁組織中均有表達(dá)(圖1～4)。兩者在腫瘤組織以及癌旁正常組織細(xì)胞質(zhì)中的表達(dá)見表1～2。

圖1 結(jié)腸癌組織中HuR高表達(dá)

圖2 癌旁正常組織中HuR低表達(dá)

圖3 結(jié)腸癌組織中TTP低表達(dá)

圖4 癌旁正常組織中TTP高表達(dá)

表2 TTP在腫瘤組織及癌旁正常組織細(xì)胞中的表達(dá)

2.2 RNA結(jié)合蛋白HuR和TTP在結(jié)直腸癌中表達(dá)的相關(guān)性分析

在本次研究中結(jié)果顯示83例腸癌患者中癌組織胞質(zhì)HuR和TTP均陽性表達(dá)者僅1例胞質(zhì)HuR和TTP均陰性表達(dá)者48例，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示結(jié)直腸癌中胞質(zhì)RNA結(jié)合蛋白HuR和TTP表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，見表3。

表3 RNA結(jié)合蛋白HuR和TTP在結(jié)直腸癌中表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

在我國(guó)大腸癌發(fā)病率及死亡率占全部惡性腫瘤的第 4 位,僅次于胃癌、食管癌和肺癌等常見惡性腫瘤[5]。結(jié)腸癌患者死亡的最主要原因就是結(jié)腸癌向周圍組織的侵襲和轉(zhuǎn)移[6]。RNA結(jié)合蛋白HuR和TTP及其表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移是近年來的研究熱點(diǎn)。HuR蛋白能夠識(shí)別并結(jié)合很多靶基因信使RNA中的AREs，穩(wěn)定靶基因的信使RNA從而抑制信使RNA的降解，參與靶基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖、分化、信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄及翻譯、血管的新生、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞的凋亡以及其新陳代謝等多種生理生化過程[7]。蛋白TTP能與多種靶基因信使RNA的ARE結(jié)合，促進(jìn)多種靶基因的信使RNA降解[8]。TTP蛋白還通過調(diào)節(jié)介導(dǎo)炎性的細(xì)胞因子的降解，抑制相關(guān)炎癥基因的表達(dá)，從而發(fā)揮著一定的抗腫瘤作用。另外，TTP蛋白介導(dǎo)了許多和增殖有關(guān)的基因信使RNA的降解，或許有潛在的抑制許多惡性腫瘤異常增殖的作用[9]。

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孫宏建 (1982～) 男，黑龍江佳木斯人，在讀碩士研究生，主治醫(yī)師。

R735.3+5；R735.3+

B

1008-0104(2015)01-0091-02

2014-05-30)