2008-2013年寧夏小腸結腸炎耶爾森菌分布特征分析

劉 翔，劉陽波，郭邦成，閆立群，沈 梅，魏 瓊，梁俊容，王 鑫，郝 瓊

2008-2013年寧夏小腸結腸炎耶爾森菌分布特征分析

劉 翔1，劉陽波1，郭邦成1，閆立群1，沈 梅1，魏 瓊1，梁俊容2，王 鑫2，郝 瓊1

目的 了解寧夏小腸結腸炎耶爾森菌的分布特征。方法 按照《全國小腸結腸炎耶爾森菌病監測方案》對寧夏2008-2013年采集的各類樣本進行分離培養，將分離株送中國疾病預防控制中心傳染病所進行血清分型、毒力基因檢測和脈沖場凝膠電泳(PFGE)分型。結果 采集各類樣本9 643份，檢出173株小腸結腸炎耶爾森氏菌，總檢出率1.79%；各年度和各樣本檢出率差異均有統計學意義(P<0.01)。血清型O∶3和O∶9均攜帶ail和ystA基因，全部從豬和腹瀉病人樣本中檢出；血清型O∶5、O∶8和未分型菌株均沒有攜帶ail和ystA基因，在豬、牛、羊、雞和狗樣本中都有檢出。結論 小腸結腸炎耶爾森菌在寧夏分布較為廣泛，豬是主要宿主，流行的致病性血清型以O∶3為主，O∶9為輔，且在我區的分布沒有時間、地域上差異。

小腸結腸炎耶爾森菌;血清型;毒力基因；PFGE

小腸結腸炎耶爾森菌是一類人獸共患病病原菌[1],20世紀50年代以前僅6個國家發現該菌,自20世紀50年代以后發現該菌的國家不斷增加,現已遍及全世界[2],引起許多國家的高度關注。其多寄居在豬、犬等多類家畜家禽體內,感染人后能引起多種疾患[3],除引起胃腸道癥狀外,還能引起呼吸系統、心血管系統、骨骼結締組織等疾患,甚至可引起敗血癥,造成死亡[4]。為了解寧夏地區小腸結腸炎耶爾森菌的分布特征, 我們于2008-2013年在寧夏開展小腸結腸炎耶爾森菌調查研究，并對分離的菌株進行血清分型、毒力基因檢測和脈沖場凝膠電泳(PFGE)分型，現將調查結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 樣本來源 2008-2013年在寧夏地區采集腹瀉病人糞便、食品、鼠類盲腸內容物和家畜家禽糞便及咽拭子樣本進行檢測。其中，腹瀉病人糞便樣本來自中衛市、青銅峽市、平羅縣和海原縣；食品全部在銀川市各農貿市場和超市采購；鼠類盲腸內容物從銀川市和海原縣采集；家畜家禽糞便及咽拭子主要從銀川市、中衛市和海原縣采集。

1.2 檢測方法 按照《全國小腸結腸炎耶爾森菌病監測方案》中要求對各類樣本進行檢測后，將分離菌株送往中國疾控中心傳染病預防控制所進行血清分型、毒力基因檢測和脈沖場凝膠電泳PFGE分型。

1.3 主要試劑及培養基 CIN-Ι培養基(美國BD)，小腸結腸炎耶爾森氏菌診斷血清(日本生研)，尿素(日本榮研)，api 20E生化條(法國梅里埃)，均在有效期內使用。

1.4 數據統計分析 使用Excel 2007和SPSS 21.0軟件進行統計分析，采用雙側檢驗，P<0.05為有統計學意義，基因聚類分析用BioNumerics 5.0完成。

2 結 果

2.1 各年度檢出情況 2008-2013年，共采集各類樣本9 643份，分離到173株小腸結腸炎耶爾森氏菌，檢出率2013年(3.32%)最高，其次為2009年(2.45%)和2011年(2.14%)，2010年(0.47%)檢出率最低，各年度檢出率無明顯上升或下降規律(見表1)，差異有統計學意義(χ2=48.892，P<0.01)。

表1 2008—2013年小腸結腸炎耶爾森菌檢出情況

2.2 各類樣本檢出情況 共監測鼠類、腹瀉病人、食品和家畜家禽4類樣本，檢出率家畜家禽(3.22%)最高，其次為食品(1.70%)、腹瀉病人(0.07%)，鼠類標本均未檢出小腸結腸炎耶爾森氏菌(見表2)。各類樣本檢出率有統計學意義(χ2=128.516，P<0.01)。

表2 各類樣本小腸結腸炎耶爾森菌檢出率

2.3 毒力基因在不同血清型中分布 對所有菌株使用文獻[5-6]報道的方法進行毒力基因鑒定, 判斷致病性。并將其分為Ⅰ型(ail-、ystA-、ystB-、yadA-、virF-)、Ⅱ型(ail-、ystA-、ystB+、yadA-、virF-)、Ⅲ型(ail+、ystA+、ystB-、yadA-、virF-)、Ⅳ型(ail+、ystA+、ystB-、yadA+、virF+)，其中42株基因I型和43株基因II型為非致病性菌株，均分布在O∶5、O∶8和未分型的血清型中；10株基因III型和78株基因IV型為致病性菌株，都分布在O∶3和O∶9血清型中，且所有O∶3血清型菌株均為基因IV型(見表3)。

表3 不同血清型菌株毒力基因攜帶情況

2.4 不同血清型在各類樣本中分布 所有菌株中，O∶3血清型檢出最多(49.71%)，O∶9血清型檢出最少(1.16%)，主要分布在豬和腹瀉病人樣本中；O∶5、O∶8和未分型菌株分布較廣，在牛、羊、雞、狗和雞肉、羊肉樣本中均有檢出(見表4)。

表4 不同血清型菌株在各類樣本中的分布情況

2.5 致病性菌株PFGE分型結果 參考美國疾病預防控制中心PulseNet實驗手冊對86株O∶3和2株O∶9血清型菌株用NotI內切酶酶切后進行PFGE分型，分型條帶采用Bionumerics 5.0軟件進行聚類分析。結果顯示，所有O∶3血清型菌株被分為12種帶型，優勢帶型主要為K6GN11C30021和K6GN11C30012，分別占36.05%和24.42%，在我區各市、縣均有分布，另外10種帶型共占39.53%。2株O∶9血清型菌株均為K6GN11C 90003型，全部從中衛市的豬樣本中檢出。

3 討 論

小腸結腸炎耶爾森菌廣泛分布于自然界多種動物，人類主要通過接觸家畜糞便污染水源、食品或者土壤等造成小腸結腸炎耶爾森菌感染[7]。此次調查結果顯示，歷年來小腸結腸炎耶爾森菌在寧夏除鼠類外的家畜家禽、腹瀉病人和食品中均有分布，其中豬源菌最多，占83.24%，其余牛、羊、雞、狗及腹瀉病人樣本中共檢出29株，占16.76%。

圖1 致病性小腸結腸炎耶爾森氏菌PFGE分型聚類圖

豬和腹瀉病人檢出分離株大多為致病性O∶3菌株，牛、羊、雞、狗檢出均為非致病性O∶5和O∶8血清型和未分型菌株，提示豬為致病性菌株的主要傳染源， 防止致病株通過豬肉食品造成人類感染和傳播。

173株菌進行毒力基因檢測，結果85株基因Ⅰ型和Ⅱ型菌株均無致病性，血清型主要為O∶5、O∶8和未分型菌株，在家禽家畜糞便和生肉中都有檢出；88株基因III型和IV型菌株均有致病性，血清型主要為O∶3和O∶9，其中O∶3血清型占97.73%，O∶9占2.27%，這與近年來國際報道O∶3型菌株的流行呈上升趨勢相一致[7]，其中僅有2株O∶3從腹瀉病人樣本中檢出，其余均從豬樣本中檢出，占致病性菌株的97.73%。

綜上所述，我區目前小腸結腸炎耶爾森氏菌的主要宿主是豬，不同宿主的血清型分布有差異性，流行的致病性菌株血清型是O∶3和O∶9，全部分布在豬和腹瀉病人中，其余家禽家畜樣本中分離的菌株均無致病性，這與國內其它報道一致[8-11]。說明在我區從事豬養殖和加工的人群中感染小腸結腸炎耶爾森氏菌的風險較大，而在從事牛、羊、雞養殖和加工的人群中感染的風險較小，但不排除生產、加工過程中交叉污染的可能性。

PFGE方法穩定性好、敏感性高,被廣泛用于菌株的遺傳關系的研究，我們對所有致病性菌株進行PFGE分型，2株O∶9被分為同一帶型，相似度100%，說明來自同一克隆系，86株O∶3血清型菌株被分為12個帶型，大部分帶型相似度在88%～100%之間，說明親緣關系較近，其中優勢帶型K6GN11C30021和K6GN11C30012，共占60.47%，各年度在我區不同地區的豬和腹瀉病人樣本中均有分布，說明其在我區分布沒有時間和地域上的差異，2株人源的菌株和豬源的菌株相似度均在100%，說明人群的感染可能來自于豬，提示我們日常生活中應養成良好的衛生習慣，并加強豬群檢疫、衛生監管等工作，切傳染源、傳播途徑，降低小腸結腸炎耶爾森氏菌的感染風險，防止小腸結腸炎耶爾森氏菌病在人群中暴發。

[1]Pei YW, Feng KJ, Fang YY, et al. Study on the distribution and toxicity ofYersiniaenterocoliticacarried by animals in Shandong province[J]. J Med Pest Control, 2011, 27(2):104-105. (in Chinese) 裴耀文,馮開軍,房玉英，等.山東省宿主動物中小腸結腸炎耶爾森菌分布狀況及毒力研究[J].醫學動物防制,2011,27(2): 104-105．

[2]Liu Y, Wang YL. Research progress on pathogenesis and determination ofYersiniaenterocolitica[J]. Environ Health, 2008, 25(8): 749-751. (in Chinese) 劉義,王艷玲.小腸結腸炎耶爾森菌的致病及檢測研究進展[J].環境與健康雜志,2008,25(8):749-751．

[3]Li ML, Mu YJ, Dang LC, et al. Surveillance analysis ofYersiniaenterocoliticain Henan Province from 2007 to 2010[J]. Chin J Zoonoses, 2013, 29(3): 312-315. (in Chinese) 李孟磊,穆玉嬌,黨李成,等.河南省2007—2010年小腸結腸炎耶爾森菌監測分析[J].中國人獸共患病學報,2013，29(3):312-315．

[4]Xiao YC, Wang X, Qiu HY, et al. Study of biotyping for pathogenicY.enterocoliticastrains in China[J]. Chin J Zoonoses, 2010, 26(7): 651-653. (in Chinese) 肖玉春,王鑫,邱海燕,等.中國致病性小腸結腸炎耶爾森菌生物分型研究[J].中國人獸共患病學報,2010,26(7):651-653.

[5]Thoerner P, Bin Kingombe CI, Bogli-Stuber K, et al. PCR detection of virulence genes inYersiniaenterocoliticaandYersiniapseudotuberculosis and investigation of virulence gene distribution[J]. Appl Environ Microbiol, 2003, 69: 1810-1816. DOI: 10.1128/AEM.69.3.1810-1816.2003

[6]Wang X, Qiu H, Jin D, et al. O∶8 serotype Yersinia enterocolitica strains in China[J]. Int J Food Microbiol, 2008, 125: 259-266. DOI: 10.1016/j.ijfood micro.2008.04.016

[7]Cao YH, Xia SL,Gu L, et al. Investigation on host distribution ofYersiniaenterocoliticain China in 2004 and 2005[J]. Chin J Vector Bio Ctrl, 2007, 18(3): 238-240. (in Chinese) 曹彥華,夏勝利,顧玲,等.2004—2005年我國部分地區小腸結腸炎耶爾森氏菌宿主分布調查[J]. 中國媒介生物學及控制雜志,2007,18(3):238-240．[8]Yuan YP, Wu YH, Wang YQ, et al. Surveillance ofYersiniaenterocoliticain Dongtai, Jiangsu, 2011[J]. Dis Surveill, 2012, 27(5): 406-408. (in Chinese) 袁義平,吳銀華,王迎慶,等.2011年江蘇省東臺市小腸結腸炎耶爾森菌監測分析[J].疾病監測,2012,27(5):406-408．

[9]Xiao YC, Liang JR, Gu WP, et al. Investigation on distribution ofYersiniaenterocoliticain differed from animal hosts[J]. Chin J Zoonoses, 2012, 28(5): 418-420. (in Chinese) 肖玉春,梁俊榮,古文鵬,等.不同動物宿主小腸結腸炎耶爾森氏菌分離及結果分析[J].中國人獸共患病學報,2012,28(5):418-420．

[10]Guo H, Yang JC, Zhang L, et al. Etiologic study of 171Yersiniaenterocoliticastrains[J]. Chin J Dis Ctrl Prev, 2011, 15(1): 77-79. (in Chinese) 郭惠,楊晉川,張雷,等.171株小腸結腸耶爾森菌的病原學特征[J].中華疾病控制雜志,2011,15(1):77-79．

[11]Mu YJ, Zhao JY, Guo XC, et al. Etiologic study ofYersiniaenterocoliticaisolated from swine[J]. Chin J Zoonoses, 2012, 28(12): 1220-1222. (in Chinese) 穆玉嬌,趙嘉詠,郭曉醇,等.從生豬中分離小腸結腸炎耶爾森菌病原學研究[J].中國人獸共患病學報,2012,28(12):1220-1222．

Characteristics ofYersiniaenterocoliticain Ningxia, China, 2008-2013

LIU Xiang1,LIU Yang-bo1,GUO Bang-cheng1,YAN Li-qiong1,SHEN Mei1, WEI Qiong1,LIANG Jun-Rong2,WANG Xin2,HAO Qiong1

(1.NingxiaCenterforDiseaseControlandPrevention,Yinchuan750004,China; 2.NationalInstituteofCommunicableDiseasesPreventionandControl,ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention,Beijing102206,China)

We investigated the distribution characteristics ofYersiniaenterocoliticain Ningxia, China. In accordance with the requirements of the NationalYersiniaenterocoliticaDisease Monitoring Scheme,Y.enterocoliticawere isolated from different kinds of specimens collected in Ningxia in 2008 to 2013. Then they were serotyped and detected for virulence gene and analyzed the pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) in Chinese CDC. It was found that 173 strains were isolated from various types of 9 643 specimens, and the detection rate was 1.79%. There were statistical differences among detection rates in different years and in different specimens (P<0.01). Pathogenic serotypes O∶3 and O∶9 carried ail gene and ystA gene were detected from specimens of pigs and diarrhea patient. Non-pathogenic serotypes O∶5 and O∶8 and non-typeable strains didn't carry ail gene and ystA gene, and also can't be detected from swine, cattle, sheep, chickens and dogs. In conclusion,Y.enterocoliticawas widely distributed in Ningxia and pigs were the dominant animal host. In all pathogenic serotypes, the highest proportion was O∶3 following by O∶9. It was no time and regional difference in the distribution of that in Ningxia, China.

Yersiniaenterocolitica; serotype; virulence gene; PFGE

Hao Qiong, Email: haoq630620@163.com

10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.03.016

“艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治”國家科技重大專項(2013ZX10004203-002),劉翔與劉陽波對本文同等貢獻

郝瓊，haoq630620@163.com

1.寧夏回族自治區疾病預防控制中心細菌學檢驗科，銀川 750004； 2.中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所，北京 102206

R378.2

A

1002-2694(2015)03-0260-04

Supported by the National Science and Technology Major Project: AIDS and viral hepatitis and other major infectious diseases prevention and control (No. 2013ZX10004203-002)

2014-09-19；

2014-12-02