家族性中樞神經系統炎性脫髓鞘病患者HLA－DQB1基因多態性的研究

高雅然，于寧，高燕軍

(1.承德醫學院，河北承德 067000 2.承德醫學院附屬醫院神經內科，河北承德 067000）

家族性中樞神經系統炎性脫髓鞘病患者HLA－DQB1基因多態性的研究

高雅然1，于寧1，高燕軍2*

(1.承德醫學院，河北承德 067000 2.承德醫學院附屬醫院神經內科，河北承德 067000）

目的：探討家族性中樞神經系統炎性脫髓鞘病患者人類白細胞抗原(HLA）－DQB1基因的多態性。方法：應用序列特異性引物－聚合酶鏈反應(PCR－SSP）技術分析13例家族性中樞神經系統炎性脫髓鞘病患者的HLA－DQB1基因的多態性。結果：HLA－DQB1*03等位基因頻率顯著高于HLA－DQB1*02、05、06(P＜0.05）。結論：在家族性脫髓鞘病患者的HLA－DQB1基因多態性的研究中，DQB1*03的基因頻率顯著高于其他，推測HLA－DQB1*03可能是該類疾病的易感基因。

HLA－DQB1;脫髓鞘病;基因多態性;多發性硬化

中樞神經系統炎性脫髓鞘病(central nervous system inflammatory demyelinating diseases，CNSIDD）是一類病因不盡相同、臨床表現各異、卻又有共同的病理過程，以神經髓鞘脫失、軸突相對完好為特征的自身免疫性疾病的統稱。脫髓鞘疾病中多發性硬化(multiple sclerosis，MS）最為多見［1］。國外研究表明，CNSIDD的發病受遺傳基因的影響，HLA－Ⅱ基因多態性與MS的易患性緊密相關［2，3］。迄今，國內外關于CNSIDD與HLA－DRB1基因相關性的研究較多，而與HLA－DQB1基因多態性的研究少見報道。本研究采用PCR－SSP方法分析承德地區13例家族性CNSIDD患者HLADQB1等位基因的多態性。

1 資料與方法

1.1 研究對象：研究對象為2007年至2012年承德醫學院附屬醫院門診和住院的2個家系13例CNSIDD患者。其中男7例，女6例，年齡37～56歲，平均(41.5 ±13.2）歲。本研究共追溯到2家系51人，其中13人患病，患者多中年急性、亞急性起病，無明顯前驅感染病史，MRI示雙側大腦半球白質內多發斑片狀異常信號，多數患者出現頭暈、頭痛，記憶力、智能較前減退，其中一例出現偏癱，綜合診斷為家族性脫髓鞘病。經檢查排除腦白質營養不良、腦血管病、經典MS(依據2010年McDonald［4］的MS診斷標準）等的可能性，故暫定義為家族性中樞神經系統脫髓鞘病。該研究通過倫理委員會同意，受試者全部知情并同意。

1.2 方法

1.2.1 基因組DNA的提取：取研究受試者外周靜脈血5mL，EDTA抗凝。采用血液基因DNA提取試劑盒(TIAN amp Blood DNA Kit），提取出基因組DNA。1.2.2 HLA－DQB1等位基因的檢測：采用PCR－SSP法，按照HLA－DQB1基因SSP分型試劑盒(德國PROTRANS公司）所示試驗方法進行分析。①配制主混合液：BufferR46ul，Buffer－Y94ul，Tag酶1.1ul。加34ulDNA樣品(50－100ng/ul）到主混合液，并充分混勻、加樣。②PCR擴增程序：起始變性94℃、2min，變性94℃10s、退火和延伸65℃1min，10個循環，變性94℃、10s，退火6l℃、50s，延伸72℃、30s，20個循環，4℃保溫。③凝膠制備和電泳，分析判斷結果。

1.3 統計學分析：應用SPSS17.0統計軟件，進行四格表卡方檢驗。

2 結果

13例家族性脫髓鞘患者中，共計檢出4種HLADQB1等位基因，見表1。經統計學分析，HLA～DQB 1 *03等位基因頻率顯著高于HLA－DQB1*02、05、06等位基因頻率(P＜0.05）。故推測HLA－DQB1*03等位基因可能與家族性CNSIDD的易患性相關。

表1 13例家族性脫髓鞘患者HLA－DQB1等位基因的分布

3 討論

目前CNSIDD的病因及發病機制尚未完全明確，此類疾病多集中在自身免疫損傷和髓鞘結果破壞兩大環節，具有明顯的遺傳異質性［5］。雖然此類疾病各具特點，但以MS為最多見［6］，是一種范圍很廣的系譜疾病，這些疾病常相互重疊，易被誤診。MS呈現家族聚集現象，同胞間患病相對危險度增加。

目前普遍認為HLA－DRB1基因與MS強關聯，此外，研究證實HLA－DQB1也發揮重要作用。但目前不同種群易感基因不盡相同。在對挪威與瑞典白人、非洲裔巴西人的研究顯示MS與DQB1*0602相關聯［7，8］。而我國上海的一項研究［9］顯示DQB1*0502與該地區21例MS人群顯著相關聯，吳曉牧等在2011年的一項研究顯示南方漢族人群MS患者同樣與DQB1*0502相關［10］。香港的一項研究通過對DR陽性表達的MS患者與DR陽性對照組的比較發現，HLA－DQB1*0602基因頻率在病例組顯著高于對照組，提示DQB1*0602可能與MS的發病相關。

2012年的一項分析研究表明，DQB1鏈接上第38位的Ala/Val殘基與*0602作用正相關，與*0502* 0601負相關。由此可知，特定獨立的DQB1*授予MS易感性和抵抗性。Lincoln等［11］認為，MS患者HLA單倍型比單個位點更能發揮作用，單獨攜帶DRB1* 1501和DQB1*0602的患者罹患MS的相對危險度(RR）顯著低于單體型DRB1*1501－DQB1*0602攜帶者的RR。通過對突尼斯MS患者的研究發現，HLA－DRB1*15－DQB1*06和HLA－DRB1*04－DQB1* 04單倍型與MS易患性相關。而以色列的阿拉伯MS患者則是與HLA－DRB1*0301－DQB1*0201相關。說明不同種群單倍型組合形式不盡相同。

本研究結果顯示，HLA－DQB1*03等位基因頻率(50%）顯著高于HLA－DQB1*02、05、06(P＜0.05），故推測DQB1*03基因可能是家族性CNSIDD的易感基因。各國各地區研究結果不盡相同，本研究結果目前國內尚未見報道，可能與東西方人種、環境因素、實驗技術的差異有關，也可能和本研究樣本量小有關。同時也支持不同臨床類型的脫髓鞘病關聯不同等位基因的觀點，因為本文的患者并不能嚴格歸類于經典MS或NMO(視神經脊髓炎），進一步深入的研究可能會揭示此類疾病的病因及發病機制。

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B

10.3969/j.issn.1006－6233.2015.06.033

1006－6233(2015）06－0973－03

*通訊作者：高燕軍，Email：yanjungao2009@126.com