采用X射線衍射解析人鳥嘌呤核苷酸解離刺激因子RalGDSRas結合結構域的空間結構
2015-06-18 10:45:18黃雪英雷明沈陽張巍劉艷麗劉珂趙浩斌祁超
分析化學 2015年6期
黃雪英 雷明 沈陽 張巍 劉艷麗 劉珂 趙浩斌 祁超
摘 要 Ras結合結構域（RBD）是鳥嘌呤核苷酸解離刺激因子（RalGDS）家族成員C端的高保守區，通過它連接Ras和Ras相關蛋白。利用Red Wings和SGC1 screens相關的懸滴法設盤結晶，按體積比1∶1加蛋白液到含1∶100胞內蛋白酶GluC（w/w）的結晶溶液（2 mol/L （NH4）2SO4， 0.2 mol/L NaAc， 0.1 mol/L HEPES， 5% MPD， pH 7.5）中，晶體3天長成可組裝大小。利用X射線晶體衍射技術解析了人RalGDS的Ras結合域（RalGDSRBD）的晶體結構，對比鼠和人RalGDSRBD，主要是Ras結合區的C端不同。人RalGDSRBD通過Glu838和Glu840在RalGDS和Ras蛋白間形成氫鍵， 而在同一位點，鼠RalGDSRBD通過Asp820和Asp822形成氫鍵。人RalGDSRBD結構中含ββαββαβ型三維結構的泛素樣構象， 一個單體的C端殘基與相鄰單體的β折疊形成平行βββββ結構。
關鍵詞 鳥嘌呤核苷酸解離刺激因子（RalGDS）； Ras結合結構域（RBD）； Ras蛋白endprint
