赭曲霉毒素A模擬抗原表位及噬菌體展示酶聯(lián)免疫吸附分析法的建立

王呂　熊斯誠　鄒旭強　陳超超　邵輝鋒　陳雪嵐

摘 要 以驢抗鼠二抗包被微孔板，以捕獲方式包被抗赭曲霉毒素A（OTA）單克隆抗體，利用噬菌體隨機七肽庫篩選OTA模擬抗原表位，并以其替代檢測抗原，建立了基于噬菌體展示技術(shù)的酶聯(lián)免疫吸附分析（Phage ELISA）檢測OTA的方法。結(jié)果表明，篩選獲得的模擬OTA 抗原表位七肽氨基酸序列為GMSWMMA。基于模擬表位噬菌體建立的Phage ELISA方法半數(shù)抑制濃度（IC50值）為（0.15 ± 0.02） ng/mL，檢測OTA的線性范圍為0.03～0.50 ng/mL，OTA的檢出限為0.03 ng/mL，且Phage ELISA與其它4種常見真菌毒素（黃曲霉毒素B1、伏馬毒素B1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及玉米赤霉烯酮）無交叉反應(yīng)。大米樣品OTA加標(biāo)實驗表明，批內(nèi)加標(biāo)回收率為97.0%～115.2%，批間加標(biāo)回收率為107.2%～123.1%，與ELISA試劑盒檢測結(jié)果比較，無顯著性差異。

關(guān)鍵詞 赭曲霉毒素A；噬菌體展示肽庫；模擬表位；酶聯(lián)免疫吸附法endprint