黑參提取物體內抗腫瘤作用研究

袁 媛，甘 雨，王 菲，黃 赫，杜佳林，李顯華

（遼寧省中醫藥研究院，遼寧 沈陽 110034）

腫瘤是威脅人類健康的重大疾病之一，目前放化療抑制腫瘤的同時對人體有很大的傷害。較多的研究報道表明人參的抗腫瘤作用明顯，紅參的抗腫瘤活性優于人參。為探討黑參的抗腫瘤活性，筆者通過實體瘤S180生長的抑制作用、HepA肝癌腹水瘤的生命延長作用以及免疫功能調整作用，對黑參提取物、紅參提取物的抗腫瘤活性進行了比較，確定了黑參的抗腫瘤療效。

1 實驗材料

動物與瘤株：昆明種小鼠270只，體質量18～22g，雌雄各半，購自遼寧長生生物技術有限公司，許可證號SCXK（遼）2010-0001。S180瘤株、HepA肝癌腹水瘤均購于上海軒研生物科技有限公司。

儀器：超凈工作臺（型號class Ⅱ TYPE A2 BSC系列生物安全柜，北京東聯哈爾儀器制造有限公司生產）。

藥品：消癌平（南京圣和藥業有限公司生產，生產批號201304241），環磷酰胺（通化茂祥制藥有限公司生產，生產批號130201），黑參提取物（低、中、高劑量）自制得到[1，2]，紅參提取物（低、中、高劑量）自制得到。

2 實驗方法[3，4]

2.1 實體瘤S180抑瘤作用

荷瘤小鼠造模。將S180瘤株用生理鹽水以1000r/min經10min離心洗滌2次后，洗掉細胞中胰蛋白酶和培養液中血清等成分，用臺盼藍染色法計數活細胞數，用生理鹽水將腫瘤細胞稀釋成1×106～1×107濃度，進行傳代。無菌條件下取S180腹水瘤小鼠，抽取傳代第8日的荷瘤小鼠的腹水置于盛有生理鹽水的帶塞試管中，按瘤株與生理鹽水1∶3稀釋，每個接種點以0.2mL，1×106～1×107個細胞數，用1mL的皮下注射器注射接種到右前肢腋窩處腋下部皮下，共90只，整個操作于30min內完成。

給藥及計算抑瘤率。接種24h后將小鼠按體質量隨機分為9組，每組10只。環磷酰胺西藥對照組，給藥濃度為25mg/kg；消癌平中藥對照組，給藥濃度為25mg/kg；6個給藥組分別給予紅參、黑參提取物低、中、高劑量，折合生藥量分別為13.6mg/kg、27.2mg/kg和40.8mg/kg；模型對照組給予同體積的蒸餾水。以上各組均為灌胃給藥，0.8mL/20g，1日1次，連續給藥10日，荷瘤小鼠末次給藥24h后稱體質量，脫臼處死，剝離取下腋下腫瘤并用濾紙吸干，立即稱取瘤重，計算抑瘤率，進行療效評價。計算公式為腫瘤生長抑制率（%）=（空白對照組平均瘤質量－給藥組平均瘤質量）/空白對照組平均瘤質量×100%。

2.2 HepA肝癌腹水瘤生命延長作用

荷瘤小鼠造模。無菌條件下抽取傳代第8日的荷瘤小鼠的腹水置于盛有生理鹽水的帶塞試管中，按瘤株與生理鹽水1∶3稀釋，作為HepA小鼠肝癌腹水瘤細胞懸液。用一次性注射器或經高壓消毒的注射器吸取HepA小鼠肝癌腹水瘤細胞懸液0.2mL，于經碘酊、乙醇消毒過的腹部皮膚作腹腔注射。共90只，整個操作于30min內完成。

給藥及計算生命延長率。接種24h后將小鼠按體質量隨機分為9組，每組10只。環磷酰胺西藥對照組，給藥濃度為25mg/kg；消癌平中藥對照組，給藥濃度為25mg/kg；6個給藥組分別給予紅參、黑參提取物低、中、高劑量，折合生藥量分別為13.6mg/kg、27.2mg/kg和40.8mg/kg；模型對照組給予同體積的蒸餾水。以上各組均為灌胃給藥，0.8mL/20g/次/日，連續給藥10日，荷瘤小鼠末次給藥24h后稱重，從第11天開始停止給藥，繼續飼養觀察，在觀察期間記錄小鼠的一般情況（飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物、中毒表現和死亡情況等）。計算存活時間及生命延長率。計算公式為生命延長率（%）=（給藥組平均生存時間－空白對照組平均生存時間）/空白對照組平均生存時間×100%。

2.3 免疫功能調整作用

將接種S180瘤株24h的小鼠按體質量隨機分為9組，每組10只。環磷酰胺西藥對照組，給藥濃度為25mg/kg；消癌平中藥對照組，給藥濃度為25mg/kg；6個給藥組分別給予紅參、黑參提取物低、中、高劑量，折合生藥量分別為13.6mg/kg、27.2mg/kg和40.8mg/kg；模型對照組給予同體積的蒸餾水。以上各組均為灌胃給藥0.8mL/20g，日1次，連續給藥10日，荷瘤小鼠末次給藥24h后稱重，斷尾取血，測白細胞數。之后處死小鼠，摘取胸腺、脾臟稱重，計算胸腺指數、脾臟指數。計算公式為胸腺指數=（胸腺質量/小鼠質量）×10，脾臟指數=（脾臟質量/小鼠質量）×10

2.4 統計分析

采用spss軟件對數據進行處理，數據以（±s）表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

3 實驗結果

各組對S180實體瘤抑制作用見表1。

表1 各組對S180實體抑瘤作用

各組對HepA肝癌腹水瘤的生命延長作用見表2。

表2 各組對HepA肝癌腹水瘤生命延長

各組免疫功能調整作用見表3。

表3 各組胸腺及脾臟指數比較

4 討 論

常規化療藥物多為細胞毒性藥物，在殺傷瘤細胞同時也損害機體的免疫系統，而免疫功能低下又可促進腫瘤的發生和發展，因此腫瘤的發生與機體的免疫狀況密切相關。因此，通過用一些增強免疫功能的藥物可使腫瘤消退或延緩其發展。

人參（Panax ginseng C.A.Meyer）為五加科植物人參的干燥根，是亞洲常見藥材，具有很高的藥用和歷史文化價值，被譽為“草藥之王”，在科學研究領域和國際市場一直占有極其重要的地位，被廣泛應用。其性平，味甘、微苦，微溫，用于大補元氣、復脈固脫、補脾益肺、生津止渴、安神益智。現代臨床醫學和藥理學研究表明，人參具有提高機體免疫力、抗疲勞、抗腫瘤、降血糖以及抗炎等多種活性，在醫學及養生方面具有可觀的價值。近年來，各種各樣的人參炮制品作為功能食品用于飲食，其中包括白參、紅參、黑參等。黑參是利用傳統的九蒸九曝炮制方法將人參反復蒸制烘干而得到的一種人參深加工品，是繼紅參后的又一人參新產品[1]。黑參比白參和紅參有更強的抗腫瘤、抗炎、提高免疫力等生物活性。實驗表明，黑參高劑量組可以抑制荷瘤小鼠S180實體瘤腫瘤生長，延長HepA肝癌腹水瘤小鼠的存活時間，改善免疫功能指標。提示黑參在抗腫瘤以及腫瘤免疫調節方面具有進一步研究和開發的價值。

[1] 袁媛，徐榮培.人參新炮制品—黑參的研究進展[J].中華中醫藥學刊，2013，31（11）：2379-2381.

[2] 袁媛，于艷，徐榮培.HPLC法測定19個人參新炮制品—黑參樣品中的人參皂苷含量[J].遼寧中醫雜志，2013，40（10）：1993-1995.

[3] 徐淑云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學[M].3版.北京：人民衛生出版社，2002：1766.

[4] 陳奇.中藥藥理研究方法學[M].2版.北京：人民衛生出版社，2006：1006.