高效液相色譜—電感耦合等離子質譜法分析水產品中有機錫的形態

冷桃花等

1 引 言

錫是一種廣泛應用于食品包裝行業的金屬材料之一，金屬錫本身是無毒的，但一些有機錫化合物的毒性卻非常高[1]。有機錫化合物被廣泛用于船舶防污涂料、農藥殺蟲劑、塑料工業等[2～4]，常見的有機錫化合物有三甲基錫（TMT）、三乙基錫（TET）、二丁基錫（DBT）、三丁基錫（TBT）、二苯基錫（DPhT）和三苯基錫（TPhT）等，其生理活性以三錫型為最強。由于有機錫化合物在各個行業的廣泛應用，導致其在環境中的含量得到了大量的累積，這對人類的健康而言是一種潛在的危害。有機錫能干擾牡蠣中鈣的代謝，使貝殼加厚，可食用部分減少，還可導致腹足類動物由雌性向雄性轉變，通過改變其雌雄比例進而影響其種群繁[5]。目前，已有多篇報道[6～12]證實世界各地的海岸港口檢測到了有機錫的存在。

近年來，許多研究者用各種分離檢測手段對有機錫進行分析，一種是用氣相色譜法[13～17]對有機錫進行分離檢測，一種是用高效液相色譜法[17～19]對有機錫進行分離檢測。食品中有機錫的國家標準檢測方法采用了氣相色譜法（GB/T5009.215）[20]，該方法樣品前處理過程復雜，需要多步的凈化和衍生，不容易實驗規模化操作，且針對不同的樣品，其不同的基質勢必影響樣品的提取效率，尤其是該技術所需要的衍生化步驟很難掌握，導致回收率不穩定。液相色譜法可以很好地分離有機錫化合物，且可以避免衍生化步驟，簡化了樣品前處理步驟，但紫外檢測器的靈敏度較低，難以滿足現實的需求。高效液相色譜與電感耦合等離子質譜的聯用在有機錫化合物分析當中得到了廣泛應用，且取得了初步的成效[21～23]。2008年，于振花等[22]應用HPLCICPMS聯用技術研究了海產品中5種有機錫TMT、DBT、TBT、DPhT和TPhT，其中DPhT和DBT的回收率較低。2011年，李湘等[23]應用HPLCICPMS詳細探討了海洋沉積物中的TMT，TET，TPhT和TBT的分離，4種有機錫化合物在24 min得到了很好分離，分離度、峰形均較好。從目前報道的文獻報道可知，HPLCICPMS聯用分析技術應用于有機錫的分析主要針對3～5種有機錫化合物，使用的色譜柱多為TCC18以及ACE C18柱，容易對目標化合物產生吸附，導致回收率偏低。

本研究在前期研究[24]的基礎上，采用30%（V/V）乙酸甲醇溶液為提取劑，低溫超聲萃取30 min，利用Eclipse Plus C18反相色譜柱，優化色譜分離條件，建立了水產品中7種有機錫化合物TMT， MBT， DBT， TBT， MPhT， DPhT和TPhT同時分離的HPLCICPMS的檢測方法，簡化樣品處理過程，極大縮短了樣品處理流程，提高了效率。

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

7500型電感耦合等離子體質譜儀、1200 series型高效液相色譜儀、ZORBAX Eclipse Plus C18反相色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）、ZORBAX SB C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）、ZORBAX 300SCX（150 mm×4.6 mm，5 μm）、ZORBAX Eclipse XDB C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），美國Agilent公司；AL204型萬分位電子分析天平（梅特勒托利多儀器（上海）有限公司）；Sigma 416K離心機（美國Sigma公司）；IKA T25 digital Ultra Turrax勻漿機（美國IKA公司）；超聲波清洗儀（上海科導超聲儀器有限公司）。

三甲基氯化錫（96.0%）、一苯基氯化錫（98%）、二苯基氯化錫（96.0%）、三苯基氯化錫（99.0%）、一丁基氯化錫（94.0%）、二丁基氯化錫（97.0%）、三丁基氯化錫（97.0%）， 德國Dr. Ehrenstorfer公司；乙酸（色譜純）、甲醇（色譜純）、三乙胺（色譜純），美國Sigma公司；其它化學試劑均為優級純。超純水（電阻率≥18.2 MΩ·cm，美國Millipore公司）。

3.2.2 超聲時間對樣品加標回收率的影響 采用2.3節方法處理樣品，考察了超聲時間對樣品提取回收率的影響。由圖4可知，樣品回收率隨著時間增加而提高，至10 min時達到最大，MPhT， DPhT和TPhT隨著超聲時間的繼續增加，回收率下降。其它化合物的回收率也相比10 min時回收率下降。因此，本研究選取超聲時間為10 min。

3.2.3 提取劑的體積及提取劑中乙酸的含量對樣品加標回收率的影響 根據2.3方法處理樣品，比較了提取劑的體積及提取劑中乙酸的含量對樣品加標回收率的影響。隨著提取體積的增加，樣品中TMT， MBT， DPhT， DBT， TPhT和TBT的回收率逐漸增高（圖4A），至提取劑量達到30 mL時，回收率達到最大。而MPhT在提取劑體積10 mL時回收率最高，隨提取劑體積的繼續增加，其回收率略有降低。綜合考慮，本研究選擇30 mL提取劑進行樣品前處理。

3.4 實際樣品的檢測

應用本研究優化的方法對市售的幾種貝類水產品進行測定，結果表明，大部分濕樣貝類水產品中未檢出有機錫，僅在濕制生蠔檢出12.5 μg/kg TPhT。而相對于干制水產品而言，毛蛤干粉中TBT和TPhT均有檢出，含量分別為53.4和98.1 μg/kg，與文獻＼[20＼]結果基本一致。牡蠣、花蛤、蟶子等干粉中也存在TPhT，含量分別為8.12， 12.2和14.3 μg/kg。本研究還在蟶子樣品中檢測到TMT，其含量為20.3 μg/kg，部分實際樣品檢出見圖5。

4 結 論

采用HPLCICPMS測定水產品中7種有機錫化合物，優化色譜分離條件和樣品前處理方法，利用高效液相色譜Eclipse Plus C18色譜柱分析7種有機錫化合物，線性范圍0～50 μg/L，線性相關系數R>0.995，檢出限0.11～0.60 μg/kg，7種有機錫化合物的回收率在72.1%～111.7%之間，7種有機錫化合物的相對標準偏差均在10%以內。本方法樣品前處理簡便快速、線性范圍寬、精密度高、重現性好，能有效地同時處理和分析7種有機錫化合物，適用于水產品中7種有機錫化合物的測定。endprint

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