歐盟水飛薊提取物質量標準中的含量測定研究及啟示

趙紅菊 趙雙春

歐盟水飛薊提取物質量標準中的含量測定研究及啟示

趙紅菊 趙雙春

（遼寧省藥品認證中心，遼寧沈陽110003）

通過對歐盟水飛薊提取物質量標準和我國水飛薊素質量標準進行對比分析研究，指出了目前我國水飛薊素質量標準與歐盟水飛薊提取物質量標準之間存在的差異，并提出了相關的建議。

歐盟；水飛薊提取物；水飛薊素；含量

1 水飛薊提取物的定義

《中華人民共和國藥典（2010年版）》對“水飛薊”的定義為菊科植物水飛薊Silybu mmarianum（L.）Gaertn.的干燥成熟果實。待秋季水飛薊果實成熟時，采收其果序，曬干，打下果實，除去雜質，再曬干。在國家藥品標準中，則將“水飛薊素”（Silymarn）描述為由菊科植物水飛薊的果實，經提取精制所得的松散粉末。

歐盟藥典8.0對“水飛薊干燥提取物（以下簡稱為水飛薊提取物）”（Milk Thistle Dry Extract）進行了定義，即為水飛薊果實經精煉提取后制備而成。從其定義可以看出，歐盟藥典中的“水飛薊干燥提取物”即我國藥品標準中的“水飛薊素”。

2 水飛薊提取物質量標準研究

2.1 水飛薊提取物含量限度

2.1.1 歐盟水飛薊提取物含量限度

歐盟對水飛薊提取物的含量進行了詳細的規定：以水飛薊賓計，含水飛薊素應為標示量的90%～110%；水飛薊素在干燥提取物中的含量應在30%～65%。以水飛薊素計，含水飛薊亭和水飛薊寧總量為20%～45%，含水飛薊賓A和水飛薊賓B總量為40%～65%，含異水飛薊賓A和異水飛薊賓B總量為10%～20%。

2.1.2 我國水飛薊素含量限度

我國國家藥品質量標準中對“水飛薊素”的含量測定為按干燥品計算，含水飛薊素以水飛薊賓（C25H22O10）計算，不得少于68%；含水飛薊賓和異水飛薊賓不得少于30%。

2.2 水飛薊提取物含量測定方法

2.2.1 歐盟水飛薊提取物含量測定方法

歐盟對水飛薊提取物含量測定進行了詳細的規定，其含量測定選擇液相色譜法，具體方法藥典規定如下：

測試溶液：在甲醇溶液中溶解60 mg提取物，并且用同樣溶劑稀釋至100 mL。

對照溶液：在甲醇中溶解相當于10 mg水飛薊賓的水飛薊對照提取物，并且用同樣溶劑稀釋至100 mL。

色譜柱：柱長=0.125 m，柱直徑=4 mm。流動相A：磷酸-甲醇-水（0.5:35:65）。流動相B：磷酸-甲醇-水（0.5:50:50）。時間—流動相情況如表1所示。流速：0.8 mL/min。

表1 時間—流動相

檢測波長：288 nm。

注射對照溶液：10 μL。

鑒別峰：通過水飛薊對照提取物色譜圖，可得到水飛薊寧、水飛薊亭、水飛薊賓A、水飛薊賓B、異水飛薊賓A和異水飛薊賓B的色譜峰。但測試溶液中的水飛薊寧色譜峰可能在大小上會有差異或者消失。

保留時間：水飛薊賓B約30 min，如果需要，調整梯度時間段。

分離度：水飛薊賓A峰和水飛薊賓B峰之間的分離度應不小于1.8。

水飛薊素總含量以水飛薊賓計，其公式為：

總水飛薊素中水飛薊寧和水飛薊亭的含量，其公式為：

總水飛薊素中水飛薊賓A和水飛薊賓B的含量，其公式為：

總水飛薊素中異水飛薊賓A和異水飛薊賓B的含量，其公式為：

在上述公式中所涉及的參數分別表示為：

A1=供試品色譜圖中得到的水飛薊亭峰面積；

A2=供試品色譜圖中得到的水飛薊寧峰面積；

A3=供試品色譜圖中得到的水飛薊賓A峰面積；

A4=供試品色譜圖中得到的水飛薊賓B峰面積；

A5=供試品色譜圖中得到的異水飛薊賓A峰面積；

A6=供試品色譜圖中得到的異水飛薊賓B峰面積；

A7=對照品色譜圖中得到的水飛薊賓A峰面積；

A8=對照品色譜圖中得到的水飛薊賓B峰面積；

m1=制備對照品溶液所使用的對照提取物質量，g；

m2=制備供試品溶液所使用的提取物質量，g；

p=對照提取物中水飛薊賓A和水飛薊賓B總的百分含量。

2.2.2 我國水飛薊素含量測定方法

水飛薊素（總黃酮）對照品溶液的制備：取水飛薊賓對照品約10 mg，精密稱定，將其置25 mL量瓶中，加甲醇適量，水浴加熱使其溶解，冷卻至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液的制備：取本品50 mg，精密稱定，將其置100 mL量瓶中，加甲醇適量，水浴加熱使其溶解，冷卻至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

水飛薊素測定法：精密量取對照品溶液和供試品溶液各5 mL，分別置25 mL量瓶中，分別精密加入2，4二硝基苯肼溶液2 mL，置50～55 ℃水浴中反應50 min，冷卻，加氫氧化鉀-甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，離心10 min，精密量取上清液5 mL，置25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，按照分光光度法，在490 nm的波長處分別測定吸收度，計算，即得。

水飛薊賓按照《中華人民共和國藥典（2000年版）》二部附錄VD高效液相色譜法測定。

色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸（50:50:0.5）為流動相；檢測波長為288 nm。理論板數按水飛薊賓峰計算應不低于5 000。

水飛薊賓測定法：取本品0.11 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另外精密稱取經60 ℃減壓干燥3 h的水飛薊賓對照品適量，加流動相溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含0.1 mg水飛薊賓的溶液，作為對照品溶液。精密吸取上述兩種溶液各5 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以水飛薊賓與異水飛薊賓峰面積之和計算，即得。

3 歐盟水飛薊提取物含量測定與我國水飛薊素含量測定對比啟示

通過對比歐盟水飛薊提取物含量測定標準與我國水飛薊素含量測定標準可知：

（1）歐盟對水飛薊提取物中各有效成分的劃分更加細致，規定了6種有效成分，同時也將有效成分的含量限度要求寫明在質量標準中。目前我國水飛薊素質量標準中只規定了水飛薊賓和異水飛薊賓總的含量限度要求，有效成分檢驗項目相對較少。

（2）歐盟對水飛薊提取物的含量測定方法進行了詳細的描述，規定了詳細的試驗方法和計算公式，6種有效成分均采用色譜法進行計算，這有利于企業和相關檢測機構統一執行標準。目前我國水飛薊素質量標準中缺少對有效成分詳細的計算公式描述，水飛薊素含量采用分光光度法，而水飛薊賓和異水飛薊賓總量采用高效液相色譜法，兩種不同的方法也許會對最終的結論產生影響。

4 結語

目前，我國共有11家藥品生產企業擁有水飛薊素品種，部分企業已開展了相關出口業務。建議國內相關的檢測機構不斷提高完善水飛薊素的質量標準，進一步和發達國家的質量標準接軌，不斷提升我國水飛薊素品種的質量檢測水平。

2015-03-26

趙紅菊（1983—），女，遼寧鞍山人，碩士研究生，副主任中藥師，研究方向：藥品風險管理。

趙雙春（1983—），男，河北邯鄲人，博士在讀，主管藥師，研究方向：藥品風險管理。