M uc15基因在卵巢癌組織中的表達及其與臨床病理因素之間的關系

楊國棟 趙樂▲

河南科技大學第一附屬醫院，洛陽471003

M uc15基因在卵巢癌組織中的表達及其與臨床病理因素之間的關系

楊國棟 趙樂▲

河南科技大學第一附屬醫院，洛陽471003

目的檢測Muc15基因在卵巢癌組織中的表達情況及其在卵巢癌組織發生、發展中所起的作用。方法應用Western blot、RT-PCR技術檢測本院2012年9月～2014年3月收治的65例正常卵巢組織、30例良性卵巢腫瘤組織及65例卵巢癌組織中Muc15蛋白相對表達量及mRNA相對表達量，分析其在三種組織中表達的差異。結果Muc15蛋白相對表達量、mRNA相對表達量在正常卵巢組織、良性卵巢腫瘤組織及卵巢癌組織中比較差異有統計學意義（P<0.05）；Muc15蛋白相對表達量、mRNA相對表達量在臨床分期為0～Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期的卵巢癌組織中比較差異有統計學意義（P<0.05）；Muc15蛋白相對表達量、mRNA相對表達量在有淋巴結轉移組和無淋巴轉移組的卵巢癌組織中比較差異有統計學意義（P<0.05）；Muc15蛋白相對表達量、mRNA相對表達量在不同年齡和腫瘤直徑卵巢癌組織中比較差異無統計學意義（P＞0.05）。結論Muc15基因在卵巢癌組織中的表達量升高，其高表達水平可能與卵巢癌的發生有關。

Muc15基因；卵巢癌；W estern blot；RT-PCR

黏蛋白是一類由黏膜組織產生的糖蛋白，具有多種生物學功能[1]。從結構和功能上分為分泌型和跨膜型兩型，Muc15是跨膜型黏蛋白中的一種[2]。近年來對Muc15的研究逐漸成為熱點[3-6]，有學者發現，Muc15在食管癌、直腸癌、乳腺癌等多種腫瘤組織中出現高表達，但是Muc15在卵巢癌中的表達還未見報道，本實驗擬通過檢測Muc15在卵巢癌中的表達，探討其與卵巢癌臨床病理因素的關系，以期有助于卵巢癌發病機制及診斷治療的后續研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集本院2012年9月～2014年3月手術切除卵巢癌新鮮組織標本65例，年齡43～68歲，中位年齡56.4歲；組織學分期Ⅰ期16例、Ⅱ期21例、Ⅲ期28例；有淋巴轉移者39例，無淋巴轉移者26例。另同時收集卵巢良性腫瘤30例及正常卵巢組織65例，所有患者術前均未接受過放療和化療及等其他治療，均經病理證實。

1.2 方法

1.2.1 卵巢組織Muc15 Wes ter n b l o t檢測①蛋白提取：從液氮中取適量組織標本于勻漿器中，按照蛋白提取試劑盒的說明提取蛋白，BCA法測定其蛋白濃度。②電泳：取蛋白60μg及等量上樣緩沖液95℃5min后冷卻上樣，進行電泳。③轉膜及封閉：經10% SDS-PAGE凝膠電泳后轉移至硝酸纖維素膜上，加封閉液及一抗（1︰500稀釋）4℃過夜，TBST洗滌4次，10 min/次，將膜與HRP標記的二抗（1︰5000稀釋）室溫孵育2 h，TBST洗滌4次，10 min/次。④蛋白檢測：將顯影液加到膜上，曝光顯影，用Band Scan圖像分析系統進行分析。

1.2.2 卵巢組織Muc15 RNA提取及RT-PCR①總RNA的提取：嚴格按照RNA提取試劑盒的操作步驟提取總RNA。②cDNA的制備：二步法PCR試劑盒逆轉錄cDNA。③RT-PCR方法：擴增Muc15mRNA，反應結束后，取5μl產物進行電泳，用圖像分析軟件進行灰度掃描，Muc15與內參的PCR灰度值之比為mRNA水平的相對表達量。

1.3 統計學處理

采用SPSS 17.0統計軟件對數據進行分析和處理，計量資料以±s表示，采用t檢驗或方差分析，計數資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組Muc15基因的蛋白及mRNA相對表達量的比較

Muc15在正常卵巢組織、良性卵巢組織中的蛋白相對表達量明顯低于卵巢癌，差異有統計學意義（t=3.152、2.106，P<0.05）；Muc15mRNA在卵巢癌組織中的相對表達量高于良性卵巢腫瘤組織和正常卵巢組織，差異有統計學意義（t=2.230、2.146，P<0.05）（圖1、表1）。

圖1 Muc15基因Western blot的表達情況

表1 各組Muc15基因的蛋白及mRNA相對表達量的比較（±s）

表1 各組Muc15基因的蛋白及mRNA相對表達量的比較（±s）

組別n Muc15的蛋白相對表達量Muc15mRNA相對表達量正常卵巢組織良性卵巢腫瘤組織癌組織P值65 30 65 0.195±0.035 0.351±0.027 0.769±0.030＜0.05 0.236±0.023 0.363±0.021 0.786±0.027＜0.05

2.2 不同臨床病理因素卵巢癌組織中M uc15蛋白及mRNA相對表達量的比較

Muc15蛋白及mRNA相對表達量在臨床分期0～Ⅱ期中明顯高于Ⅲ～Ⅳ期，差異有統計學意義（P<0.05）；有淋巴結轉移組與無淋巴轉移組的Muc15蛋白及mRNA相對表達量比較差異有統計學意義（P<0.05）；不同年齡、腫瘤直徑卵巢癌組織中Muc15蛋白及mRNA相對表達量比較差異無統計學意義（P＞0.05）（表2）。

表2 不同臨床病理因素卵巢癌組織中Muc15蛋白及mRNA相對表達量的比較（±s）

表2 不同臨床病理因素卵巢癌組織中Muc15蛋白及mRNA相對表達量的比較（±s）

臨床病理因素n Muc15的蛋白相對表達量Muc15 mRNA相對表達量年齡（歲）≥60＜60 P值腫瘤直徑（cm）≥5＜5 P值臨床分期0～ⅡⅢ～ⅣP值淋巴結轉移34 31 0.746±0.038 0.752±0.042＞0.05 0.796±0.026 0.748±0.031＞0.05 42 23 0.768±0.040 0.739±0.029＞0.05 0.782±0.028 0.770±0.036＞0.05 32 33 0.759±0.041 0.535±0.037 <0.05 0.789±0.032 0.525±0.021 <0.05有無P值51 14 0.769±0.034 0.510±0.035 <0.05 0.791±0.027 0.436±0.022 <0.05

3 討論

黏蛋白家族的成員以其獨特的結構保護黏膜免受外界有害物質的侵犯，同時參與上皮細胞的更新和分化，細胞間的信號轉導和腫瘤細胞的侵襲和轉移[7]。Muc15作為黏蛋白家族的一員，具有共同的結構，自Pallesen等在2002年發現以來，其已被證實在結食管癌、直腸癌、乳腺癌、前列腺癌等多種腫瘤組織中高表達，并且促進腫瘤的侵襲和轉移[8-9]。

本實驗通過Western blot、RT-PCR的方法檢測Muc15在正常卵巢組織、良性卵巢腫瘤組織及卵巢癌組織中的表達，發現在正常卵巢組織、良性卵巢腫瘤組織中Muc15表達水平比較差異無統計學意義；但在卵巢癌組織中Muc15的表達明顯增高，提示Muc15基因促進卵巢癌的發生、發展，Muc15基因的激活可能導致卵巢癌的發生，這與相關研究結果相似[10]。Huang等[11-13]在結直腸癌中的研究表明，結直腸癌中Muc15 mRNA的表達及免疫組化陽性率明顯高于正常結直腸組織；同時Muc15基因的過度高表達可激活ERK-MAPK通道，從而增加結腸癌細胞的致癌能力。Shyu等[12，14-15]研究發現，Muc15在人類胎盤組織中呈高表達，從而抑制滋養細胞沿體外入侵。

本研究發現，不同臨床分期的卵巢癌組織標本中Muc15的表達水平有差異；有淋巴結轉移的癌組織標本表達水平明顯高于無淋巴結轉移的癌組織標本，說明Muc15基因不僅參與卵巢癌的發生，而且與卵巢癌的發展有一定關系。

綜上所述，Muc15在卵巢癌組織中的表達升高，其高表達可能與卵巢癌的發生、發展有關，但是Muc15在卵巢癌組織中的作用機制，還需進一步的后續研究。

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Expression of M uc15 gene in ovarian cancer tissue and its relationship w ith clinical pathological factor

YANG Guo-dong ZHAO Le▲
The First Affiliated Hospital of Henna University of Science and Technology,Luoyang 471003,China

Objective To investigate the status of Muc15 expression in human ovarian cancer and its association with the carcinogenesis and development of ovarian cancer.M ethods The expression of Muc15 protein and mRNA in sixty five ovarian normal tissues,thirty benign ovarian cancer tissues and sixty five ovarian cancer tissues in our hospital from September 2012 to March 2014 were evaluated by using Western blot,RT-PCR,and then the expression difference among three groupswas analyzed.Results There were significant difference in the expression of Muc15 protein and mRNA among ovarian cancer tissues,ovarian normal tissues and benign ovarian cancer tissues(P<0.05).Therewere significant difference in the expression of Muc15 protein and mRNA between clinical stage 0-ⅡandⅢ-Ⅳof ovarian cancer(P<0.05).There were significant difference in the expression of Muc15 protein and mRNA between lymph node metastasis and without lymph nodemetastasis of ovarian cancer(P<0.05).There were no significant difference in the expression of Muc15 protein and mRNA at different age and different tumor size of ovarian cancer(P＞0.05).Conclusion The expression of Muc15 is higher in ovarian cancer tissue compared to normal ovarian tissue and benign ovarian cancer tissue,whichmay contribute to carcinogenesis and development of ovarian cancer.

Muc15 gene;Ovarian cancer;Western blot;RT-PCR

R737.31

A

1674-4721（2015）04（c）-0063-03

2015-02-05本文編輯：李亞聰）

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趙樂，女，碩士，醫師，主要研究方向：腫瘤病理