Skp2 表達對食管癌術后復發及預后的影響

費春明 葉勁軍 周國仁 何飛 張小東 曾勇

Skp2 表達對食管癌術后復發及預后的影響

費春明 葉勁軍 周國仁 何飛 張小東 曾勇

目的 研究Skp2表達對食管癌術后復發及預后的影響。 方法 對74例食管癌手術切除患者的病理標本進行Skp2免疫組化染色,并收集術后完整臨床資料及隨訪資料,進行統計學分析。應用Cox比例風險模型對可能影響食管癌預后的因素進行分析,用Log-rank檢驗分析Skp2對總生存期(OS)、無腫瘤生存期(DFS)、局部無復發生存期(LRFS)及遠處無復發生存期(DMFS)的影響。 結果 食管癌組織中Skp2的陽性表達率為47.3%。Skp2表達陰性患者的3年及5年生存率顯著高于Skp2表達陽性患者,差異有統計學意義(P<0.01)。在食管癌組織中Skp2的表達與腫瘤的大小、淋巴結轉移、浸潤深度、TNM分期有關(P均<0.01)。Skp2高表達食管癌患者術后OS、DSF、DMSF及LRFS顯著低于Skp2低表達患者(P<0.05)。Cox多因素回歸分析表明, TNM分期、腫瘤浸潤深度、有無淋巴結轉移、Skp2表達是食管癌患者生存的獨立預測因素。 結論 Skp2過表達是食管癌術后預后不良的重要因素。

食管癌; Skp2; 食管癌切除術; 免疫組化染色

我國是食管癌(esophageal cancer)高發地區,其發病人數占世界發病人口的1/2以上。臨床對食管癌治療的主要手段是手術,即使對患者實施有效的手術治療,單純手術治療后5年生存率<25%;而術后復發率高達34%～79%[1-2]。Skp2是Skp2/SCF(Skp1-Cullin1-F-box)復合體的識別亞單位。與多種細胞周期相關蛋白如p27、p21等泛素化降解有關,其表達異常增高會導致細胞過度增殖。目前發現Skp2在多種腫瘤中出現過表達現象,并與腫瘤細胞異常增殖及不良預后有關[3]。本研究探討Skp2對食管癌切除術后復發及預后的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取南京醫科大學附屬南京市六合區人民醫院病理科2004年1月至2009年12月均未行化療、放療、免疫治療的食管癌患者手術標本74例,所有標本均為病理科存檔蠟塊。所有患者均有完整的病歷資料、隨訪資料,隨訪時間為60月。其中男46例,女28例。年齡47～78 歲,平均61.3±5.7歲。納入標準:(1)病理均為鱗癌;(2)均為根治性切除。腫瘤部位根據美國癌癥聯合會(AJCC)2009分段標準:胸上段14例,胸中段35例,胸下段25例。臨床病理分期按食管癌國際TNM分期標準第7版(UICC, 2009版):臨床分期0～Ⅰ 期22例,Ⅱ期26例,Ⅲ期26例。組織學分化程度:高分化鱗癌19例,中分化鱗癌26例,低分化鱗癌29例。

1.2 試劑 即用型兔抗人Skp2 p45(H-435):sc-7164多克隆抗體,購自美國Santa Cruz Biotechnology公司。通用型二抗、DAB試劑購自北京中杉生物技術有限公司。

1.3 方法 手術標本均經4%中性甲醛溶液固定,常規石蠟包埋。切片厚0.4 μm,常規HE染色,光鏡下行細胞形態學觀察,以確定病理診斷及分組。免疫組化染色采用二步法En vision系統,檢測食管癌組織中的Skp2表達情況,按試劑盒說明操作。以TBS 代替一抗、二抗作陰性對照。

1.4 結果判定 Skp2蛋白免疫組化染色結果以細胞核出現淺黃色至深棕色顆粒為陽性反應。結果按陽性細胞百分比進行判斷,參照Naoki法[4]。陽性細胞百分比≤10%,無棕黃色或與背景著色一致為(-);陽性細胞百分比10%～20%為(±),陽性細胞百分比21%～80%為(+),陽性細胞百分比>80%為(++)。以(-)和(±)為陰性,(+)和(++)定義為陽性。

2 結果

2.1 Skp2蛋白在食管癌組織中的表達情況 Skp2蛋白染色陽性主要定位于食管癌腫瘤細胞核,高分化食管癌組織的Skp2傾向于表達陰性,低分化食管癌組織Skp2傾向于表達陽性(圖1)。Skp2蛋白免疫組化染色結果中陽性細胞百分比為26%～78.3%。Skp2蛋白在74例食管癌患者中陽性率為47.30%(35/74)。

注:A為高分化食管鱗癌Skp2表達,B為低分化食管鱗癌Skp2表達。圖1 Skp2在食管癌組織中的陽性表達

2.2 Skp2蛋白表達與食管癌患者臨床病理特征的關系 Skp2的陽性表達強度與腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移、臨床TNM分期、組織學分化程度有關。組織學分化程度越低,其陽性率越高(P<0.001);腫瘤浸潤深度越深,其陽性率越高(P<0.05);臨床TNM分期越晚,其陽性率越高(P<0.001);有淋巴結侵入和轉移的食管癌患者Skp2陽性率高于無淋巴結侵入和轉移者(P<0.001)。但Skp2蛋白的表達與食管癌患者的性別、年齡、腫瘤部位無關,見表1。

表1 Skp2蛋白表達與食管癌臨床病理特征的關系(n,%)

2.3 隨訪結果和生存狀況 74例食管癌患者的1年總生存率為91.8%,3年生存率為56.0%,5年生存率為37.8%。中位生存期為41.37月。至隨訪截止日期,死亡45例,生存24例。Skp2蛋白表達陰性患者的3年生存率為76.5%,5年生存率為63.3%;而Skp2蛋白表達陽性患者的3年生存率為23.6%,5年生存率為8.85%。

2.4 Skp2與生存期關系 采用Log-rank分析方法進行生存統計分析,結果顯示:Skp2陰性表達的病人總生存期(OS)(χ2=38.061,P<0.001)、無腫瘤生存期(DFS)(χ2=13.867,P<0.001),局部無復發生存期(LRFS)(χ2=9.487,P=0.002)及遠處無復發生存期(DMFS)(χ2=26.900,P<0.001)顯著高于Skp2陽性患者。

2.5 影響食管癌預后的因素分析 影響術后生存期的單因素分析表明:腫瘤的浸潤深度、組織學分化程度、淋巴結是否轉移、TNM分期、腫瘤組織中Skp2陽性表達是影響術后生存期的因素(表2)。進一步進行Cox多因素回歸分析發現:僅有組織學分化程度、淋巴結是否轉移、TNM分期、Skp2陽性表達與腫瘤患者的生存期有關。見表3。

表2 影響患者預后的單因素分析

表3 影響患者預后的多因素COX回歸分析

3 討論

手術是食管癌治療的主要手段, 但目前手術治療后5年生存率仍較低。食管癌的預后除了與TNM分期等臨床指標有關外,分子病理學研究顯示,多種基因和蛋白調控紊亂和表達異常如p27、HIF等均與食管癌的發生、增殖、浸潤和轉移密切相關,并且是影響預后的重要因素[5]。目前研究表明多種細胞周期相關蛋白與食管癌的增殖明顯相關,如p21、p27、cyclinD1[6-7]。因此,研究食管癌這些基因及蛋白與手術后的預后關系,有助于發現術后復發的高危人群,對改善食管癌患者的預后,提高生存率具有重要的臨床意義。

Skp2首先因其為S期Cdk2/Cyclin A相關蛋白被人們所發現[8]。Skp2是F-box家族成員,Skp2/SCF (Skp1-Cullin1-F-box) 復合體的識別亞單位,后者負責蛋白的泛素化連接并隨之被26S蛋白酶體降解。多種與細胞周期負性相關蛋白通過Skp2介導泛素化降解,包括:p21、p57、p27、p130等[8-9]。 因而,Skp2過表達促進細胞從G1期向S期轉化。在肺癌、頭頸部癌、乳腺癌、黏液纖維肉瘤[10]等多種腫瘤中Skp2均出現過表達現象。研究證明除了促進細胞增殖,Skp2過表達還與多種腫瘤的侵襲性表型如細胞遷移、浸潤、轉移有關[11-12]。近來研究表明Skp2還與腫瘤的放化療敏感性有關[13]。Skp2與ErbB家族誘導的Akt泛素化降解、有氧酵解、腫瘤發生有關。研究表明在多種腫瘤中,Skp2表達異常增高,并與腫瘤惡性程度及不良預后有關[14],Skp2是多種腫瘤不良預后的獨立因素[15]。

本研究顯示,Skp2表達與食管癌腫瘤大小、病理分級、TNM分期、腫瘤的浸潤深度、淋巴結轉移等因素明顯相關,提示其與食管癌生物侵襲活性有關。74例食管癌患者的1年生存率為85%, 3年生存率為55%, 5年生存率為38%。患者的隨訪時間最短為5月,平均隨訪時間為41.37月。至隨訪截止日期, 死亡病例為45例,生存病例為24例。Skp2表達與食管癌術后生存期明顯相關,Skp2陰性患者的3年、5年生存期顯著高于Skp2陽性患者。我們通過對Skp2表達與患者OS、DSF、LRSF、DMFS進行Log-rank檢驗發現,Skp2表達與食管癌患者OS、DSF、LRSF、DMFS相關,其表達陽性患者的OS、DSF、DMSF及LRSF顯著低于陰性患者,提示Skp2在食管癌發生進展過程中可能發揮重要作用,這一作用可能與Skp2具有促進腫瘤細胞增殖和侵襲有關。

單因素分析表明:病理組織學分化程度、TNM分期、腫瘤的浸潤深度、淋巴結轉移以及食管癌組織中Skp2表達是影響患者術后生存的因素。多因素分析顯示,組織學分化程度、淋巴結轉移、TNM分期、Skp2表達陽性是影響腫瘤患者生存的獨立預后因素。我們的研究結果與Liang等[16]研究結果一致。因而我們認為Skp2是重要的食管癌手術治療預后不良因素,可以作為術后評估預后的重要指標。

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Effects of Skp2 overexpression on postoperative recurrence and prognosis in patients with esophageal cancer

FEIChun-ming,HEFei,ZHANGXiao-dong,ZENGYong.DepartmentofGastroenterology,theAffiliatedNanjingLuheDistrictPeople’sHospital,NanjingMedicalUniversity,Nanjing211500,China;YEJin-jun,ZHOUGuo-ren.DepartmentofRadiotherapy,AffiliatedJiangsuCancerHospital,NanjingMedicalUniversity,Nanjing210009,China

Objective To study the effects of Skp2 overexpression on the postoperative recurrence and prognosis of esophageal cancer. Methods The pathological specimens of 74 patients with surgical resection of esophageal cancer were used for Skp2 immunohistochemical staining. In addition, complete postoperative clinical information and follow-up data were collected for statistical analysis. The parameters that might influence the prognosis results of esophageal cancer were analyzed using the Cox proportional hazards model. The effects of Skp2 on overall survival (OS), disease-free survival (DFS), local recurrence-free survival (LRFS), and distant metastasis-free survival (DMFS) were analyzed using the Log-rank test. Results The positive Skp2 expression rate in esophageal cancer tissues was 47.3%. The 3-year and 5-year survival rate of the patients with negative Skp2 expression were significantly higher than those in patients with positive Skp2 expression. Skp2 expression was associated with lymph node metastasis, infiltration depth, and TNM staging of esophageal cancer (P<0.01).The results of the multivariate Cox regression analysis showed that TNM staging, tumor infiltration depth, lymph node metastasis, and Skp2 expression were independent predictors for the survival of esophageal cancer patients. The postoperative OS, DSF, DMSF, and LRFS rates of the patients with high levels of Skp2 expression were significantly worse than those with low levels of Skp2 expression. Conclusions Skp2 overexpression is an important factor of a poor postoperative prognosis of esophageal cancer.

esophageal cancer; Skp2; esophagectomy for esophageal cancer; immunohistochemical staining

南京市醫學科技發展項目(YKK11183)

211500江蘇省南京市，南京醫科大學附屬南京市六合區人民醫院消化科(費春明，何飛，張小東，曾勇)；210009江蘇省南京市，南京醫科大學附屬江蘇省腫瘤醫院放療科(葉勁軍，周國仁)

曾勇，Email：Zengyong@whhyyy.com

R 735.1

A

10.3969/j.issn.1003-9198.2015.11.020

2015-09-08)