不同途徑接種雞源鏈球菌對雛雞致病性差異

劉承軍

摘 ?要：通過9日齡海蘭雛雞不同途徑接種雞源鏈球菌，觀察雛雞感染鏈球菌后的臨床癥狀和病理變化，研究不同途徑接種雞源鏈球菌對雛鴨的致病性是否存在差異，以期為禽類鏈球菌病的臨床診斷和合理防控提供科學的理論依據。

關鍵詞：鏈球菌;致病力;差異

中圖分類號：S858.312.5+2 ? ? 文獻標識碼：B ? ? 文章編號：1673-1085（2015）07-0045-03

禽鏈球菌在自然界和飼養環境中普遍存在，是大部分禽類腸道正常菌叢的組成部分。因此，一般認為禽鏈球菌為非致病菌，其感染多為繼發性感染，未能引起禽類養殖者和獸醫工作者的關注與重視。然而，隨著禽類集約化養殖的發展，該病在我國部分地區發病率逐年提高，且造成嚴重的經濟損失。本試驗通過不同接種途徑，研究鏈球菌對雛雞致病性的差異，為更好防控該病提供理論依據。

1 ?材料與方法

1.1 ?試驗材料

1.1.1 ?設備 ?輪轉式切片機、一次性切片刀、電熱干燥箱、漂烘處理儀、電熱恒溫培養箱、潔凈工作臺CJ-1B、自動磨刀機、高清晰度彩色圖文分析系統、Nikon80i生物光學顯微鏡。

1.1.2 ?毒株 ?雞源鏈球菌，聊城市動物疫病預防控制中心病理實驗室分離鑒定并保存。

1.1.3 ?試驗動物及分組 ?一日齡海蘭雛雞24羽，飼喂肉用仔雞前期配合飼料自由采食飲水正常飼養9日后，經血液檢查無細菌感染后，隨機分為4組，每組6羽，分別為腹腔組、皮下組、顱內組、對照組。

1.2 ?試驗方法

1.2.1 ?細菌的復蘇和純化 ?供試菌株接種于TSA培養基上，37℃培養24h，挑取單個菌落接種于TSB液體培養基，純培養過夜。

1.2.2 ?培養特性和細菌形態學觀察 ?無菌挑取純化的菌液接種于TSA培養基上，37℃培養24h，觀察細菌生長情況及菌落形態，挑取單個菌落進行革蘭氏染色，光學顯微鏡下觀察細菌形態和染色特征。

1.2.3 ?感染菌液的制備和濃度測定 ?挑取TSA培養基上經純化的單個菌落，接種于15ml TSB液體培養基，搖勻純培養，37℃培養18h，利用活菌計數法計算制備菌液中活菌數為1.5×10CFU/ml。

1.2.4 ?動物試驗 ?四個試驗組分別為腹腔組、皮下組、顱內組、對照組，分別采用腹腔接種、皮下接種、顱內接種的接種方式，接種注射劑量為0.2ml/只，對照組不作實驗處理。

感染后每天觀察各組雞臨床癥狀，記錄發病和死亡時間及數量;定期采集血液標本進行細菌學檢查：死亡雞及時進行尸體剖檢，剖檢時觀察記錄各組織及臟器病變，取肝臟、脾臟、腦、心臟及心包膜、肺、腎臟、腔上囊、胸腺、十二指腸等組織器官，用中性福爾馬林固定。其他各試驗組未死亡雞和對照組繼續正常飼養，觀察記錄臨床癥狀，14d后全部宰殺、剖檢，剖檢時觀察記錄各組織及臟器病變，取肝臟、脾臟、腦、心臟及心包膜、肺、腎臟、腔上囊、胸腺、十二指腸等組織器官，用中性福爾馬林固定，并分組編號。

1.2.5 ?病原菌的分離與鑒定 ?解剖死亡病雞，取出病變的肝臟涂片，作革蘭氏染色。并接種于TSA血清平板上，37℃培養24h，觀察細菌生長情況及菌落形態，挑取單個菌落作革蘭氏染色，光學顯微鏡下觀察細菌形態和染色特征。

1.2.6 ?病理切片制作和病理組織學觀察 ?各組織器官用中性福爾馬林固定兩周后，按常規方法制作石蠟切片，進行常規H.E染色，光鏡下觀察記錄病理組織學變化。

2 ?結果

2.1 ?細菌學檢查結果 ?對臨床死亡雞的腦組織和心血進行細菌分離，分離菌在TSA血清板上長成表面濕潤、邊緣整齊、灰白色半透明的小菌落，直徑約1mm。革蘭氏染色為陽性球菌，單個、成對或成短鏈狀排列，與接種菌一致。

2.2 ?發病情況及臨床癥狀 ?頸部皮下組：雛雞接種后第2d開始出現臨床癥狀，精神不振，眼瞼腫脹，頭部羽毛蓬松，食欲下降，黃色稀糞，病程持續7d后精神有所好轉，但雛雞眼部分泌物逐漸增多，頸部皮毛較稀，生長緩慢，發病率100%（6/6），于接種后第3d死亡第一羽，死亡4羽。

腹腔組：雛雞接種后2d精神不振，頭部羽毛蓬松，眼瞼腫脹，喜臥惡動，排黃色稀糞，發病率100%（6/6），死亡2羽。第13d精神狀態有所好轉，第15d精神狀態和食欲正常，生長緩慢。

顱內組：接種當天死亡一羽，懷疑為接種顱內操作致死，其它接種3d精神不振，眼瞼腫脹，排黃綠稀糞，發病率100%（6/6），死亡3羽。

空白對照組： 6羽雛雞精神狀態和食欲正常，好動，羽毛光滑，生長速度較快。

2.3 ?發病情況統計表 ?見表1、表2、表3。

3 ?討論

不同接種途徑對雛雞致病性試驗，菌液濃度相對較高的，人工復制病變比較典型。這與鏈球菌在部分地區發病率較高相吻合，在實際雛雞養殖過程中應引起對禽鏈球菌病的重視。經頸部皮下接種感染雛雞的病變最為嚴重，死亡率最高。腹腔接種途徑人工復制病變也很明顯，但顱內接種途徑致病性最弱。頸部皮下接種表現出的高致病性，與這種接種途徑比較接近于雛雞的胸腺有關，胸腺在機體中作為免疫中樞器官，在雛雞早期個體免疫系統發育中起著重要作用，鏈球菌最先在胸腺附近大量增殖，嚴重降低了機體的免疫能力，加劇了病變的進程，從而造成頸部皮下組急性死亡，死亡率最高。腹腔接種途徑的致病性較高在于，直接接種腹腔內，突破皮膚和粘膜屏障，直接在腹腔臟器大量增殖，對脾臟、肝臟、腎臟致病力較強。腹腔組反應出，在養殖過程中注射不合格抗體或注射藥物操作不當是鏈球菌感染的重要途徑之一。顱內組作為接毒途徑致病力較弱，操作較困難，不適合作為人工復制鏈球菌感染雛雞實驗的最佳途徑，后續研究應避免使用這種接毒途徑。