HPLC法測定蘋果酸阿莫曲坦含量的研究

周唯蘭等

摘要：[目的]建立一種高效液相色譜法，測定蘋果酸阿莫曲坦片的含量。[方法]采用高效液相色譜法（HPLC），色譜柱為Agilent Zobax SB C8 column （250×4.6 mm，5 μm ）；以緩沖液（取0.5 g辛烷磺酸鈉與5 ml磷酸溶液，加水至1 000 ml，用5 mol/L氫氧化鈉調節pH至3.0）-乙腈作為流動相，等度洗脫，流速1.0 ml/min，柱溫30 ℃，檢測波長230 nm，進樣量10 μl。[結果]蘋果酸阿莫曲坦的濃度在17.49～209.88 μg/ml范圍內線性關系良好（Y=27.534X+9.693，r=0.999 9），高、中、低 3 種濃度的平均回收率（n=3）為99.23% （RSD=0.95%）；中間精密度RSD=0.98%（n=6），重復性和耐用性良好。[結論]該方法簡便、靈敏、準確，可作為蘋果酸阿莫曲坦片含量的檢驗方法。

關鍵詞： 蘋果酸阿莫曲坦；含量測定；HPLC

中圖分類號：S854.5+3 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2015）08-007-02

蘋果酸阿莫曲坦片由西班牙Almirall Prodesfarma公司原研，Almirall與Johnson & Johnson和Abbott等公司合作開發，于2000年9月首次在西班牙上市，2001年在美國、丹麥、芬蘭、德國、新西蘭等國家上市。適應癥為有偏頭痛病史的患者有或無先兆的偏頭痛發作的急性治療，耐受性好，不良反應輕微且短暫。該藥物有望成為曲坦類藥物的后起之秀，有著較廣闊的市場前景[1]。為了臨床安全和合理用藥，筆者建立了HPLC法測定蘋果酸阿莫曲坦含量，對其質量進行控制，方法可靠，結果準確。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 1100高效液相色譜儀（美國安捷倫，VWD紫外檢測器）；BP61型Sartorius電子分析天平（上海精科儀器廠）；蘋果酸阿莫曲坦對照品（批號：FOJ054，USP）；蘋果酸阿莫曲坦片（自制：14110101，14110601，14110901）；乙腈為色譜純；水為重蒸餾水，其余試劑為分析純。

1.2 色譜條件 色譜柱：Agilent Zobax SB C8色譜柱（250×4.6 mm，5 μm ）；流速1.0 ml/min，柱溫30 ℃，檢測波長230 nm，柱溫30 ℃，進樣量10 μl。以緩沖液（取0.5 g辛烷磺酸鈉與5 ml磷酸溶液，加水至1 000 ml，用5 mol/L氫氧化鈉調節pH至3.0）-乙腈（70∶30）作為流動相，按等度進行洗脫。

1.3 測定方法 取本品適量（約相當于蘋果酸阿莫曲坦17.5 mg），精密稱定，置50 ml棕色量瓶中，加流動相溶液溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 ml，置10 ml棕色量瓶中，用流動相溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取蘋果酸阿莫曲坦對照品，精密稱定，加流動相溶液溶解，并定量稀釋制成約含蘋果酸阿莫曲坦70 μg/ml的溶液，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。

2 結果與分析

2.1 系統適應性試驗 取本品粉末，精密稱定，加流動相溶液溶解，并定量稀釋制成約含蘋果酸阿莫曲坦70 μg/ml的溶液，作為系統適用性試驗溶液。精密量取系統適用性試驗溶液10 μl，注入高效液相色譜儀，連續進樣6次，記錄色譜圖，峰面積和保留時間的RSD應小于2.0%，結果表明本品色譜條件下連續進樣重復性良好。

2.2 空白干擾專屬性試驗 取混合均勻的空白輔料適量（約相當于蘋果酸阿莫曲坦17.5 mg），精密稱定，置250 ml量瓶中，加流動相溶液適量，超聲使主藥溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為空白輔料溶液。精密量取10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果表明，輔料在與供試品主峰保留時間相同處無色譜峰出現，不干擾本品的含量的測定。

2.3 線性與范圍 取蘋果酸阿莫曲坦對照品約17.5 mg，精密稱定，置50 ml棕色量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液；精密量取貯備液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 ml，分別置于10 ml棕色量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取上述溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標進行線性回歸，

回歸方程為Y=27.534X+9.693（r=0.999 9）。蘋果酸阿莫曲坦濃度在17.49～209.88 μg/ml范圍內，呈良好的線性關系。

2.4 重復性試驗 取蘋果酸阿莫曲坦樣品，精密稱定，加流動相溶液溶解，并且定量稀釋制成約含蘋果酸阿莫曲坦70 μg/ml的溶液，平行配制6份樣品進行含量測定，考察該方法的重復性。研究表明，平行試驗6份樣品的含量測定結果RSD小于2%，方法重復性良好，適合含量測定。

2.5 中間精密度試驗 取本品，按上述方法，分別于不同時間、不同實驗員、不同儀器試驗按照上述測定方法測定，平行配制6份樣品進行含量測定，將6次的測定結果與重復性試驗結果做統計分析。由表1可知，2次測定結果基本一致，無明顯不同，表明方法的精密度良好。

2.6 回收率試驗 取蘋果酸阿莫曲坦對照品約17.5 mg，精密稱定，置50 ml棕色量瓶中，加流動相溶液溶解，并且稀釋至刻度，搖勻；精密量取2 ml，置10 ml棕色量瓶中，用流動相溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。分別稱取蘋果酸阿莫曲坦原料約280、350、420 mg，各3份，按20片處方配比，分別加適量輔料壓片，各取1片按照含量測定項下檢查法制備供試品溶液。精密量取上述溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。由表2可知，回收率良好。

2.7 溶液穩定性試驗 取供試品溶液，于棕色量瓶中室溫放置10 h，分別在0、1、2、4、6、8和10 h精密量取10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，考察含量的變化。研究表明，含量測定溶液于棕色量瓶中室溫放置10 h，峰面積無明顯變化，可知該溶液穩定良好。

2.8 耐用性試驗 通過將色譜條件的流動相初始比例、pH、流速、柱溫及色譜柱更換進行微小的變動，考察該色譜條件的耐用性。由表3可知，對色譜條件進行微小變動，各變異條件下對本品含量檢測無明顯影響，可知該方法耐用性良好。

2.9 樣品測定 按照“1.3”項下測定方法測定蘋果酸阿莫曲坦片14110101、14110601、14110901批的含量結果分別為99.23%、99.96%、100.23%。

3 討論

目前國內尚無蘋果酸阿莫曲坦含量測定的相關報道，筆者建立了一種采用HPLC法測定蘋果酸阿莫曲坦含量的方法，其準備度高，方便快捷，能有效控制蘋果酸阿莫曲坦的質量。

參考文獻

[1] 王鵬，高永鑫，廖福廣.抗偏頭痛新藥阿莫曲坦[J].中國新藥雜志，2006（2）：152-154.