cyclinD1蛋白和Rb蛋白表達狀況與乳腺癌發生發展的關系

周 春 (攀枝花學院醫學院外科教研室，四川 攀枝花 617000)

乳腺癌的發生、發展是一個多步驟、多階段、多途徑、多因子的復雜漸進過程。研究表明，細胞周期素(cyclin)D1基因編碼的cyclinD1蛋白與抑癌基因Rb編碼的Rb蛋白同在細胞周期關鍵調控點，對于G1→S轉換有重要作用，其致使細胞增殖周期失調，進而形成腫瘤〔1〕。本研究運用免疫組織化學染色方法(S-P法)檢測正常乳腺及乳腺癌組織中的cyclinD1蛋白和Rb蛋白的表達與乳腺癌生物學行為的關系，探討其在乳腺癌發生、發展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2003～2011年攀枝花學院附屬醫院普外科乳腺癌手術切除乳腺癌組織標本120例和乳腺癌旁良性乳腺組織58例，所有標本按照常規取材，采用10%甲醛固定和石蠟切片，常規蘇木素-伊紅(HE)及免疫組織化學染色。按照Elston和Ellis改良方法，對120例乳腺癌進行Bloom-Richardsen's組織學分級〔2，3〕:Ⅰ + Ⅱ級 75 例，Ⅲ級 45 例;而病理分級參照第6版AJCC分期〔4〕:Ⅰ+Ⅱ級88例，Ⅲ級32例。

1.2 儀器與方法 使用即用型兔抗人cyclinD1和即用型鼠抗人Rb單克隆抗體對所有標本進行S-P法檢測，顯色劑采用來自美國Maxin公司的DAB顯色劑。操作方法按試劑盒說明書進行，以已知的陽性乳腺癌標本作陽性對照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判定 陽性表達主要定位于細胞核，以各種抗體在細胞核或胞質內出現棕黃色顆粒為陽性信號。每張切片隨機觀察3個高倍視野(×400)，陽性細胞數＜5%為陰性表達(-)，其他視為陽性表達(+)。記錄并分析乳腺癌中腋淋巴結轉移情況。

1.4 統計學分析 采用SPSS18.0軟件進行χ2檢驗。

2 結果

2.1 cyclinD1蛋白和Rb蛋白表達狀況 cyclinD1蛋白在乳腺癌中呈較高陽性表達，陽性染色大部分定位于細胞核，其陽性表達率〔75.8%(91/120)〕顯著高于良性乳腺組織〔32.8%(19/58)〕(χ2=30.731，P ＜0.001);而 Rb蛋白在乳腺癌中的陽性表達率〔35.0%(42/120)〕明顯低于良性乳腺組織〔75.9%(44/58)〕(χ2=26.145，P ＜0.001)。

2.2 乳腺癌中cyclinD1蛋白和Rb蛋白陽性表達與臨床病理特征關系 乳腺癌中cyclinD1蛋白和Rb蛋白陽性表達與其組織學分級、病理分級有關(P＜0.05)，而與其他臨床病理指標差異無統計學意義(P＞0.05)。組織學分級越高，cyclinD1蛋白陽性表達越高，而Rb蛋白陽性表達越低;病理分級越高，cyclinD1蛋白和Rb蛋白陽性表達均越低(P＜0.05)，見表1。

2.3 乳腺癌中cyclinD1蛋白與Rb蛋白表達之間的關系 Rb蛋白表達陽性組的cyclinD1蛋白陽性表達率〔88.1%(37/42)〕顯著高于Rb蛋白表達陰性組〔69.2%(54/78)〕(χ2=40.695，P＜0.001)。

表1 乳腺癌中cyclinD1蛋白和Rb蛋白陽性表達與臨床病理特征關系(n)

3 討論

細胞周期調節紊亂是腫瘤發生的重要環節之一，根據研究報道，cyclinD1基因位于11q13，乳腺癌中存在擴增、重排及異位，其編碼的蛋白作為細胞周期調節蛋白在G1期發揮重要正性調控作用，其異常表達有可能引起細胞增殖異常而產生腫瘤〔5〕。Rb抑癌基因編碼的Rb蛋白存在于細胞周期G1→S期調控點，是其中心成分，作用位點在cyclinD1-cdk4下游〔6〕。研究發現，Rb抑癌基因及其蛋白表達的異常除了與視網膜母細胞瘤密切相關外，與其他腫瘤關系也密切。

本研究結果與文獻報道一致〔7，8〕，提示cyclinD1蛋白的過表達和Rb蛋白的失表達是乳腺癌發生、發展的重要因素，是腫瘤發生的一個早期事件。因此，cyclinD1蛋白和Rb蛋白可視為乳腺癌的重要標志物。本研究顯示cyclinD1蛋白的過表達和Rb蛋白的失表達提示乳腺癌的惡性程度，國外研究顯示，乳腺癌中Rb蛋白的陽性表達下調為17% ～46%。Dublin等〔9〕的研究也顯示，Rb蛋白的失表達率在組織學Ⅲ級中有增高趨勢。這進一步說明了這兩者是乳腺癌發生、發展的重要標志。另外，本研究表明cyclinD1過表達在乳腺癌中發揮作用較多依賴于Rb蛋白的存在，間接證實了“cyclinD1、p16、cdk4及Rb”這一調節途徑的存在。

1 Wang MT，Chen G，An SJ，et al.Prognostic significance of cyclinD1 amplification and the co-alteration of cyclinD1/pRb/ppRb in patients with esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Dis Esophagus，2012;25(7):664-70.

2 蔡 媛，翁壽田，車瀟良，等.乳腺癌組織學類型及分級對預測新輔助化療療效的價值〔J〕.現代腫瘤醫學，2013;21(1):78-80.

3 李振洲，劉 倩，羅長銳，等.乳腺癌超聲特征與組織學分級及Ki-67表達的相關性研究〔J〕.國際醫藥衛生導報，2012;18(9):1211-4.

4 何 健，王杰軍，錢建新，等.第6版和第7版UICC-AJCCTNM分期系統預測食管癌根治性切除術后生存情況的比較:基于400例食管癌患者的臨床分析〔J〕.腫瘤，2013;33(2):164-70.

5 Jiang Q，Zhang H，Zhang P.ShRNA-mediated gene silencing of MTA1 influenced on protein expression of ER alpha，MMP-9，CyclinD1 and invasiveness，proliferation in breast cancer cell lines MDA-MB-231 and MCF-7 in vitro〔J〕.J Exp Clin Cancer Res，2011;30(1):60.

6 馬智勇，芮紅兵.D114對K562細胞增殖的影響及Rb蛋白在Notch活化的K562細胞中的表達〔J〕.中國老年學雜志，2012;32(9):1896-7.

7 李洪利，何艷姣，喬 超，等.乳腺癌β-catenin cyclinD1的表達及意義〔J〕.山西醫藥雜志，2011;40(6):558-60.

8 趙云霞，龔曉萌，崔芳芹，等.乳腺癌中PTEN、Rb、C-myc的異常表達及其臨床意義〔J〕.中國老年學雜志，2012;32(12):2531-3.

9 Dublin EA，Patel NK，Gillett CE，et al.Retinoblastoma and p16 proteins in mammary carcinoma:their relationship to cyclin D1 and histopathological parameters〔J〕.Int JCancer，1998;79(1):71-5.