紅旱蓮不同部位槲皮素和蘆丁的含量測定

李繼睿

（湖南化工職業技術學院，湖南株洲 412004）

學術研究

紅旱蓮不同部位槲皮素和蘆丁的含量測定

李繼睿

（湖南化工職業技術學院，湖南株洲 412004）

建立了紅旱蓮中槲皮素和蘆丁的高效液相色譜法。采用C18（5μm，4.6 mm×250 mm）柱、以CH3OH∶H2O∶CH3COOH（50∶40∶2）為流動相、254 nm為檢測波長、流速為1.0 mL·min－1、在柱溫30℃時對紅旱蓮不同部位槲皮素和蘆丁的含量進行檢測。結果表明：槲皮素的線性范圍為0.14～1.20μg，相關系數r＝0.9989，平均回收率為95.1%，RSD＝1.3%；蘆丁的線性范圍為0.16～0.88μg，相關系數r＝0.998 2，平均回收率為98.7%，RSD＝1.6%。該方法簡便、準確，適合于對紅旱蓮中槲皮素和蘆丁兩種有效成分的檢測。

高效液相色譜法；紅旱蓮；槲皮素；蘆丁

紅旱蓮（Hypericum ascyron L.）為藤黃科、金絲桃屬多年生草本，高達1 m。莖直立，具4棱。葉卵狀披針形，長5—9 cm，寬約2 cm，先端漸尖，基部抱莖，兩面都有黑色小斑點。聚傘花序頂生；花金黃色，直徑約2.8 cm，萼片、花瓣各5，宿存；雄蕊5束；花柱5，中部以上5裂。蒴果圓錐形，長約2 cm，5室。種子細小，多數。花期6—7月，果期8—9月。其花葉秀麗，雄蕊細如金絲，可群植或從植用于觀賞，全草入藥，有平肝、止血、敗毒、消腫的作用。全草含蛋白質4.6%、胡蘿卜素0.735 mg%、核黃素0.024mg%、尼克酸0.12mg%，含槲皮素、山柰酚、金絲桃甙、異槲皮甙、蕓香甙。全草含揮發油約0.8%，油中主含α-丁香烯（α-caryophyllene）等。槲皮素和蘆丁的含量測定方法有薄層色譜掃描法、高效液相色譜法等[1-4]。本法選擇室溫下在甲醇中超聲提取后[5，6]，再測定槲皮素和蘆丁的含量來控制本品質量，方法簡便、準確。

1 儀器與試劑

高效液相色譜儀：美國戴安公司P680分析型液相色譜儀，包括Summit HPLC UVD檢測器，Chromeleon色譜工作站，CTD-6A色譜柱恒溫箱；島津UV-2550紫外可見分光光度計；試劑：水為超純水；甲醇為色譜純；其余均為分析純；對照品：槲皮素對照品，蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所）；樣品：采自湖南邵陽。

2 實驗條件

2.1 色譜條件

色譜柱：C18（5μm，4.6 mm×250mm），流動相：甲醇－水－乙酸（50∶50∶2），流速：1.0 mL·min－1，檢測波長：254 nm，柱溫：30℃。按以上條件分析，得槲皮素對照品、蘆丁對照品與樣品色譜圖如下：

圖1 槲皮素對照品色譜圖

圖2 蘆丁對照品色譜圖

圖3 紅旱蓮根色譜圖

3 實驗方法

3.1 樣品溶液的制備

取紅旱蓮藥材適量，研細，精密稱取1.000 0 g，加甲醇20.00 ml超聲提取2 h，0.46μm聚丙乙烯濾膜過濾，加甲醇定容至25.00ml，作為供試品溶液。供試品溶液的濃度為4.00×104μg·mL－1。

圖5 紅旱蓮葉色譜圖

3.2 對照品溶液的制備

精密稱取槲皮素和蘆丁對照品適量，加甲醇制成60.00μg·mL－1的槲皮素和45.0μg·mL－1的蘆丁混合溶液，作為對照品溶液。

3.3 樣品測定方法

準確吸取供試品溶液及對照品溶液各5μl，注入高效液相色譜儀，按2.1色譜條件，依法測定。

3.4 線性關系的考察

分別取對照品甲醇溶液4.00、8.00、12.00、16.00、20.00μl，按上述色譜條件測定，以峰面積為縱坐標，分別以槲皮素和蘆丁進樣量（μg）為橫坐標，繪制標準曲線，分別得回歸方程為：

測定表明槲皮素在0.14－1.20μg范圍內，蘆丁在0.16－0.88μg范圍內均具有良好的線性關系。

3.5 精密度試驗

分別精密吸取對照品溶液5μL，重復進樣5次，得槲皮素峰面積積分值的相對標準偏差RSD＝0.85%。蘆丁峰面積積分值的相對標準偏差RSD＝0.92%。

3.6 穩定性試驗

精密吸取供試品溶液5μl，按3.3法測定，結果表明供試品在3 h內有良好的穩定性。

3.7 回收率試驗

取已知含量樣品加入對照品適量，依法測定，結果平均回收率：槲皮素為95.1%，RSD＝1.3%（n＝5）；蘆丁為98.7%，RSD＝1.6%。

3.8 樣品測定

分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各5 μL，按2.1色譜條件測定，以外標一點法計算樣品中槲皮素和蘆丁的含量，不同部位樣品的測定結果見表1。

表1 紅旱蓮中槲皮素和蘆丁的含量測定結果

圖6 樣品與標準對照品光譜比較

4 討論

4.1 提取方法的選擇

為了得到槲皮素和蘆丁的提取液，本實驗分別采用甲醇、乙醇為溶劑超聲提取法，甲、乙醇混合溶劑加熱回流提取法進行了對比實驗。實驗表明，以甲醇為溶劑超聲提取2.5 h效果最佳，通過對原料渣的HPLC檢測，兩目標組分特征峰已消失，其它兩組均有少量目標組分殘存，而且由于蘆丁的水解導致兩組分含量發生了變化。

4.2 檢測波長的確定

用紫外可見分光光度計，在200－350 nm范圍內掃描槲皮素對照品得光譜圖，結果在254 nm、312 nm處有最大吸收，但在312 nm處槲皮素峰與其他雜質峰未能達到基線分離，在254 nm處可達到基線分離，同時蘆丁和樣品在254 nm處也能達到基線分離，故選擇254 nm為檢測波長，結果見圖2.1。

4.3 流動相及組分配比選擇

分別選擇甲醇－水－磷酸（0.5%）溶液按照（55∶45∶2）、（70∶30∶2）、（40∶60∶5）；甲醇－水－乙酸（55∶45∶2）、（50∶50∶2）為流動相；通過對比試驗，就峰形、分離度及柱后處理等三項指標進行了綜合考察，結果為：前者峰形和分離度都能滿足定量分析的要求，但柱后處理時間較長，對柱使用壽命有一定的影響。甲醇－水－乙酸（50∶50∶2）流動相體系不僅峰形和分離度都能滿足定量分析的要求，柱后處理方便易行，可有效提高柱使用壽命，而且分離效果好。故本實驗選用甲醇－水－乙酸（50∶50∶2）流動相體系。

5 結論

該方法檢測紅旱蓮中槲皮素、蘆丁簡便易行、準確、重現性好，適用于紅旱蓮作為藥用原料選擇時參考，同時，也適用于以此為原料的制劑業的質量控制。天然野生紅旱蓮葉中槲皮素含量最高（1.130%），花中蘆丁含量最高（25.18%）；紅旱蓮根中槲皮素、蘆丁含量較低（0.362%、5.24%）。

[1]賈曉斌，劉光敏，封亮，等.HPLC測定夏枯草中的蘆丁和槲皮素.華西藥學雜志，2010.25（1）：70－71.

[2]滕久理，歐遼毅，田江濤.高效液相色譜法同時測定田基黃藥材中槲皮素、蘆丁和異鼠李素的含量.中南藥學，2010.8（1）：41－44.

[3]鄒亮，王戰國，胡惠玲，等.苦蕎提取物中蘆丁和槲皮素的含量測定.中國實驗方劑學雜志，2010.16（17）：60－62.

[4]戴開金，羅奇志，侯連兵.HPLC法測定桑葉中蘆丁、綠原酸和槲皮素.南方醫科大學學報，2009.29（3）：579－580.

[5]周光姣，周亞球.正交設計法優選紅旱蓮總黃酮的提取工藝.甘肅中醫學院學報，2011.28（2）：41－44.

[6]劉焱，高智席，李麗，等.金櫻子中蘆丁和槲皮素不同提取方法的比較研究.安徽農業科學，2011.39（8）：4521－4522，4525.

Determination of Quercetinum and Rutin in Hypericum Ascyron L.

LI Ji-rui
（Hunan Chemical Vocational Technology College，Zhuzhou Hunan 412004，China）

A HPLC method for determination of quercetinum and rutin of Hypericum ascyron L.from different parts was developed by HPLC on C18（5μm，4.6 mm×250 mm）column at 30℃with CH3OH∶H2O∶CH3COOH（50∶40∶2）as the mobile phase.Detection wavelength was 254 nm.The flowing rate was 1.0 mL?min－1.The calibration curve of quercetinum was 0.14～1.20 g（r＝0.9989）.The average recovery of quercetinum was 95.1%（RSD＝1.3%）.The calibration curve of rutin was 0.16～0.88 g（r＝0.9982）.The average recovery of rutin was 98.70%（RSD＝1.6%）.The method was simple and accurate，which was applicable for the content determination of quercetinum and rutin in Hypericum ascyron L.

HPLC；hypericum ascyron L.；quercetinum；rutin

R284

B

1003-6490（2015）03-057-03

2015－03－08

李繼睿（1964.11—）男，漢族，湖南新邵人，湖南化工職業技術學院副教授，主要研究方向：應用化工和分析檢測技術。