miR-708-5p通過抑制TMEM88表達(dá)促進(jìn)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移*

黎佼，劉寧寧，胡明，曾波航，董珺，△，劉世明

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院1廣州心血管疾病研究所，2心內(nèi)科，3腫瘤科，廣東 廣州 510260)

miR-708-5p通過抑制TMEM88表達(dá)促進(jìn)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移*

黎佼1，2，劉寧寧1，胡明2，曾波航3，董珺1，3△，劉世明1，2

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院1廣州心血管疾病研究所，2心內(nèi)科，3腫瘤科，廣東 廣州 510260)

目的:研究年齡相關(guān)microRNA－708－5p(miR－708－5p)對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs)遷移能力的調(diào)控作用。方法:通過microRNA芯片和real－time PCR檢測(cè)供體年齡對(duì)hMSCs中miR－708－5p表達(dá)的影響;通過轉(zhuǎn)染miR－708－5p模擬物或抑制物，過表達(dá)或抑制miR－708－5p表達(dá);通過細(xì)胞劃痕及Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)hMSCs遷移能力。通過siRNA研究miR－708－5p靶基因跨膜蛋白88(TMEM88)對(duì)hMSCs中β鏈球蛋白(β－catenin)及hMSCs遷移功能的影響。結(jié)果:隨供體年齡增加，hMSCs中miR－708－5p的表達(dá)下降。過表達(dá)miR－708－5p可促進(jìn)hMSCs遷移。相反，抑制miR－708－5p的表達(dá)可減少hMSCs遷移。隨供體年齡增加，TMEM88表達(dá)增加，而β－catenin表達(dá)下降，直接抑制TMEM88的表達(dá)可促進(jìn)β－catenin表達(dá)，促進(jìn)hMSCs遷移。同時(shí)抑制miR－708－5p和TMEM88，使miR－708－5p失去對(duì)hMSCs的調(diào)控作用。結(jié)論:miR－708－5p可通過抑制TMEM88表達(dá)，上調(diào)β－catenin，從而活化Wnt/β－catenin信號(hào)通路，促進(jìn)hMSCs遷移。

人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞;MicroRNA－708－5p;年齡;細(xì)胞遷移

通過microRNA芯片及實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，我們證實(shí)microRNA的表達(dá)隨人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(human mesenchymal stem cells，hMSCs)供體年齡的增加而發(fā)生改變。并且，這些microRNA被進(jìn)一步證實(shí)可調(diào)控hMSCs功能［1］。例如隨著年齡增加，表達(dá)下降的microRNA－10a－5p(miR－10a－5p)和miR－486－5p可分別抑制Krüppel樣因子4(Krüppel－like factor 4，KLF4)促進(jìn)hMSCs分化或抑制沉默信息調(diào)節(jié)因子1(silence information regulator 1，SIRT1)促進(jìn)hMSCs衰老［1］。而隨年齡增加，表達(dá)升高的miR－378a－5p和miR－196a，可分別抑制結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor，CTGF)，促進(jìn)hMSCs凋亡或抑制同源框B7(homeobox B7，HOXB7)抑制hMSCs增殖［2－3］。最新研究證實(shí)，miR－708－5p在非小細(xì)胞肺癌患者組織中表達(dá)升高，并與患者生存時(shí)間呈負(fù)相關(guān)。進(jìn)一步的細(xì)胞學(xué)研究證實(shí)，miR－708－5p可促進(jìn)肺癌細(xì)胞增殖和遷移。而我們的前期研究證實(shí)，隨hMSCs供體年齡增加，miR－708－5p的表達(dá)與細(xì)胞遷移能力均下降［4］。基于miR－708－5p可能促進(jìn)細(xì)胞遷移，本研究探討了miR－708－5p對(duì)hMSCs遷移能力的調(diào)控作用及分子機(jī)制。

材料和方法

1 材料

1.1 人骨髓的提取通過廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，與患者簽訂知情同意書后，在心臟瓣膜病患者手術(shù)過程中吸取人骨髓5 mL。17～30歲志愿者定義為年青(young，Y)組，65～80歲志愿者定義為年老(old，O)組，排除腫瘤、乙肝、HIV感染等因素。

1.2 主要試劑及儀器胎牛血清和Opti－MEM培養(yǎng)基(Gibco);Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑、Lipofectamine RNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑(Invitrogen);SYBR Green熒光定量試劑盒和RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Toyobo);淋巴細(xì)胞分離液(MPBIO);Transwell板(Corning);熒光定量PCR儀(ABI)。

2 方法

2.1 hMSCs的提取及鑒定人骨髓疊加于等體積淋巴細(xì)胞分離液上層，2 000 r/min離心20 min，吸取單個(gè)核細(xì)胞層，無血清IMDM懸浮后，以1 000 r/min離心。按2×109/m2密度培養(yǎng)48 h后換液，貼壁細(xì)胞每3 d換液，細(xì)胞融合度達(dá)80%以上時(shí)，胰酶消化傳代，第3代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)研究并通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面特異性抗原表達(dá)(本課題使用的hMSCs表達(dá)CD29、CD44和CD166，而不表達(dá)CD31、CD34和CD45)［1］。

2.2 MicroRNA基因芯片檢測(cè)及real－time PCR檢測(cè)分別選取年青組(17歲，20歲，25歲)及年老組(78歲，80歲，75歲)hMSCs送于北京博奧生物有限公司進(jìn)行Affymetrixr Gene Chip 2.0 miRNA芯片檢測(cè)。用1 μg總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。通過real－time PCR檢測(cè)miR－708－5p、TMEM88和β－catenin的表達(dá)。分別選取U6及GAPDH作為內(nèi)參照。各基因引物見表1。

表1 引物序列Table 1.The sequences of the primers

2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR－708－5p模擬物、抑制物、si－TMEM88及其相應(yīng)的陰性對(duì)照均由上海吉瑪公司合成，具體序列見表2。hMSCs培養(yǎng)于24孔板，無血清培養(yǎng)過夜后，更換為新鮮無血清及抗生素培養(yǎng)基(500 μL/孔)。將小分子RNA稀釋于100 μL Opti－ MEM培養(yǎng)基中，加入1 μL Lipofectamine RNAiMAX，輕柔混勻后室溫放置15 min;將RNAiMAX與miRNA/siRNA的稀釋液加入24孔板的各孔細(xì)胞中，培養(yǎng)48 h后按實(shí)驗(yàn)需要處理細(xì)胞。

表2 MicroRNA與siRNA序列Table 2.The sequences of microRNA and siRNA

2.4細(xì)胞劃痕及Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力細(xì)胞于已標(biāo)記參考線的6孔板中培養(yǎng)24 h后(3×108/m2密度培養(yǎng))，槍頭劃痕，PBS洗除脫落細(xì)胞，1%血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，分別于0 h和24 h取樣拍照。不同預(yù)處理組細(xì)胞接種于Transwell小室濾膜上方以0.5%血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，下室加入20%血清培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h后，多聚甲醛固定1 min，結(jié)晶紫染色。顯微鏡下觀察分析染色陽(yáng)性細(xì)胞(每實(shí)驗(yàn)組做3個(gè)復(fù)孔，每孔隨機(jī)選取6個(gè)區(qū)域，ImageJ軟件分析)。

2.5 Western blotting檢測(cè)蛋白表達(dá)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞處理完畢后，4℃裂解收取蛋白液。總蛋白經(jīng)SDSPAGE分離后，轉(zhuǎn)移到NC膜。用5%BSA封閉1 h后分別加入TMEM88抗體(1∶200)及β－catenin抗體(1∶400)，4℃過夜，TBST洗3次，ECL法顯色，凝膠成像系統(tǒng)掃描并分析結(jié)果。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件，兩組間的差異采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間的差異采用單因素方差分析(One－way ANOVA)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1 miR-708-5p隨供體年齡增加而表達(dá)下降

通過miRNA基因芯片檢測(cè)，我們發(fā)現(xiàn)miR－708－5p隨供體年齡的增加而表達(dá)下降，見圖1A。通過real－time PCR檢測(cè)，我們進(jìn)一步證實(shí)發(fā)現(xiàn)，O組hMSCs中miR－708－5p表達(dá)量為Y組3%，見圖1B。

Figure 1.Alternation of miR－708－5p and migration in hMSCs.A:miR－708－5p expression in hMSCs of young(Y)and old(O) groups was determined by microarray analysis;B:miR－708－5p expression in Y and O hMSCs was determined by real－time PCR;C:the mRNA expression of TMEM88 and β－catenin in Y and O hMSCs;D:the protein expression of TMEM88 and β－catenin in Y and O hMSCs;E:representive images of wound closure in Y and O hMSCs(×50);F:quantitative analysis of wound closure in Y and O hMSCs;G:representative images of Y and O hMSCs crossed from transwell(×100);H: quantitative analysis of Y and O hMSCs crossed from Transwell.Mean±SD.n=3.*P＜0.05 vs Y.圖1 供體年齡對(duì)hMSCs遷移能力及miR-708-5p表達(dá)的影響

2 TMEM88及β-catenin表達(dá)隨供體年齡增加而發(fā)生改變

通過real－time PCR檢測(cè)，我們發(fā)現(xiàn)隨供體年齡的增加，TMEM88 mRNA和蛋白表達(dá)升高(O組mRNA表達(dá)量為Y組的5.67倍);β－catenin mRNA和蛋白表達(dá)下降(O組mRNA表達(dá)量為Y組的44%)，見圖1C、1D。

3 hMSCs遷移能力隨供體年齡增加而下降

劃痕實(shí)驗(yàn)中，培養(yǎng)24 h后O組hMSCs向損傷區(qū)域遷移的細(xì)胞數(shù)明顯少于Y組(O組為Y組的73%)，見圖1E、1F。Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)表明，O組hMSCs穿膜細(xì)胞數(shù)較Y組明顯減少(O組為Y組的43%)，見圖1G、1H。

4 miR-708-5p促進(jìn)hMSCs遷移

轉(zhuǎn)染miR－708－5p模擬物，可在hMSCs中過表達(dá)miR－708－5p(為對(duì)照組的8.38倍)。相反，轉(zhuǎn)染miR－708－5p抑制物，可抑制miR－708－5p的表達(dá)(為對(duì)照組的29%)，見圖4A。過表達(dá)miR－708－5p后，通過細(xì)胞劃痕及Transwell檢測(cè)，我們發(fā)現(xiàn)hMSCs遷移能力增加(劃痕實(shí)驗(yàn)細(xì)胞遷移數(shù)為對(duì)照組的1.18倍;穿膜細(xì)胞數(shù)為對(duì)照組的1.75倍)。相反，抑制miR－708－5p表達(dá)后，hMSCs遷移能力下降(劃痕實(shí)驗(yàn)細(xì)胞遷移數(shù)為對(duì)照組的88%;穿膜細(xì)胞數(shù)為對(duì)照組的55%)，見圖2、3。

Figure 2.The effect of miR－708－5p and TMEM88s on hMSCs migration was determined by scratch wound healing assay.A:representative images of wound closure in hMSCs transfected respectively by miR－708－5p mimic(M)，miR－708－5p inhibitor(I)，si－TMEM88(S)，or miR－708－5p inhibitor and si－TMEM88(I+S)(×50);B:quantitative analysis of wound closure in hMSCs.C1～3:the indicate controls.Mean±SD.n=3.*P＜0.05 vs C1;▲P＜0.05 vs C2.圖2 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-708-5p及TMEM88對(duì)hMSCs遷移能力的調(diào)控作用

Figure 3.The effect of miR－708－5p and TMEM88 on hMSC migration was determined by Transwell migration assay.A:representative images of transwell test in hMSCs transfected respectively by miR－708－5p mimic(M)，miR－708－5p inhibitor(I)，si－TMEM88(S)，or miR－708－5p inhibitor and si－TMEM88(I+S)(×100);B:quantitative analysis of hMSCs crossed from Transwell.C1～3:the indicate controls.Mean±SD.n=3.*P＜0.05 vs C1;▲P＜0.05 vs C2.圖3 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-708-5p及TMEM88對(duì)hMSCs遷移能力的調(diào)控作用

5 miR-708-5p通過抑制TMEM88表達(dá)促進(jìn)hMSCs遷移

通過real－time PCR檢測(cè)，我們發(fā)現(xiàn)在hMSCs中過表達(dá)miR－708－5p時(shí)，TMEM88 mRNA和蛋白表達(dá)下降(mRNA表達(dá)為對(duì)照組35%)，而在hMSCs中抑制miR－708－5p表達(dá)時(shí)，TMEM88 mRNA和蛋白表達(dá)升高(mRNA表達(dá)為對(duì)照組的2.83倍)，通過si－TMEM88，我們可在hMSCs中直接抑制TMEM88 mRNA及蛋白的表達(dá)(mRNA表達(dá)為對(duì)照組的27%)，見圖4B、D。直接抑制TMEM88的表達(dá)后，hMSCs遷移能力增加(劃痕實(shí)驗(yàn)細(xì)胞遷移數(shù)為對(duì)照組的1.20倍;穿膜細(xì)胞數(shù)為對(duì)照組的1.72倍)。而在hMSCs中同時(shí)抑制miR－708－5p及TMEM88表達(dá)后，使抑制miR－708－5p所引起的hMSCs遷移能力下降作用消失，見圖2、3。

6 miR-708-5p抑制TMEM88促進(jìn)β-catenin表達(dá)

我們發(fā)現(xiàn)在hMSCs中過表達(dá)miR－708－5p，或者直接抑制其靶基因TMEM88表達(dá)時(shí)，可促進(jìn)β－catenin mRNA和蛋白表達(dá)(mRNA表達(dá)分別為對(duì)照組的4.20倍和2.53倍)，見圖4C、D。

Figure 4.The effect of miR－708－5p and TMEM88 on hMSC migration.A:up－regulated miR－708－5p expression in hMSCs by miR－708－5p mimic(M)and down－regulated miR－708－5p expression by miR－708－5p inhibitor(I);B，C:the mRNA expression of TMEM88 and β－catenin in hMSCs transfected respectively by miR－708－5p mimic，miR－708－5p inhibitor，si－TMEM88(S) or miR－708－5p inhibitor and si－TMEM88(I+S);D:the protein expression of TMEM88 and β－catenin in hMSCs transfected respectively by miR－708－5p mimic，miR－708－5p inhibitor，or si－TMEM88.C1～3:the indicate controls.Mean±SD.n=3.*P＜0.05 vs C1;▲P＜0.05 vs C2.圖4 miR-708-5p及TMEM88對(duì)hMSCs遷移能力的調(diào)控作用

討論

在前期研究中我們證實(shí)，隨供體年齡增加，干細(xì)胞的增殖能力、分化能力下降、細(xì)胞衰老增加、microRNA表達(dá)發(fā)生改變［5］。本研究進(jìn)一步闡述了，隨年齡差異表達(dá)miR－708－5p對(duì)hMSCs遷移能力的調(diào)控作用及其機(jī)制。我們證實(shí)miR－708－5p通過抑制TMEM88表達(dá)，上調(diào)β－catenin，促進(jìn)hMSCs遷移。

多項(xiàng)研究證實(shí)，干細(xì)胞可以通過不同分子途徑，遷移至受損組織或者炎癥組織中發(fā)揮治療作用［6］。而隨供體年齡增加，干細(xì)胞遷移能力下降，例如Collins－Hooper等［7］證實(shí)年老組來源的人骨骼肌干細(xì)胞比年青組來源細(xì)胞，遷移速度下降一半。在小鼠和人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)中的研究更是進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞遷移能力、抗炎癥能力下降是引起年老組MSCs治療功能下降的主要原因［8］。

miR－708－5p作為新發(fā)現(xiàn)microRNA，被證實(shí)在細(xì)胞增殖、遷移、凋亡、腫瘤侵襲等過程中發(fā)揮調(diào)控作用。例如:研究發(fā)現(xiàn)miR－708－5p在腎癌組織中表達(dá)下降，并可通過抑制原癌基因BMI1和鋅指E盒結(jié)合同源盒蛋白2(zinc finger E－boxbinding homeobox protein 2，ZEB2)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡［9］。然而，由于細(xì)胞類型不同、調(diào)控機(jī)制不同等原因，miR－708－5p對(duì)細(xì)胞遷移能力的調(diào)控作用，還尚無定論。Ryu等［10］在乳腺癌中的研究發(fā)現(xiàn)，miR－708－5p可通過抑制細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的neuronatin蛋白，減少細(xì)胞內(nèi)鈣離子含量，從而減少細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal－regulated kinase，ERK)和點(diǎn)狀黏附激酶(focal adhesion kinase，F(xiàn)AK)活化，最終減少乳腺癌細(xì)胞遷移和乳腺癌轉(zhuǎn)移。而在非小細(xì)胞肺癌研究中，Jang等［4］證實(shí)miR－708－5p可促進(jìn)肺癌細(xì)胞增殖和遷移。同樣，我們的研究也證實(shí)miR－708－5p隨hMSCs供體年齡的增加而表達(dá)下降，miR－708－5p可促進(jìn)hMSCs遷移［4］。

TMEM88在肺癌研究中，被證實(shí)為miR－708－5p的靶基因，而最近研究更是證實(shí)，TMEM88可抑制Wnt/β－catenin信號(hào)途徑活化［4］。例如，Lee等［11］證實(shí)TMEM88可以減弱HEK293細(xì)胞中Wnt/β－catenin信號(hào)途徑的活化;相反，敲除TMEM88可增加Wnt活性。在人胚胎干細(xì)胞研究中發(fā)現(xiàn)，TMEM88可抑制Wnt/β－catenin信號(hào)途徑活化，從而介導(dǎo)胚胎干細(xì)胞向心肌細(xì)胞發(fā)育［12］。Wnt/β－catenin信號(hào)通路被證實(shí)參與細(xì)胞遷移、細(xì)胞極化、神經(jīng)形成以及胚胎發(fā)育等重要生命環(huán)節(jié)的調(diào)控，其中β－catenin是該信號(hào)途徑的一個(gè)關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，可作為觀察Wnt/β－catenin信號(hào)通路激活與抑制的靶點(diǎn)［13］。β－catenin異?？蓪?dǎo)致靶基因表達(dá)、細(xì)胞黏附及遷移、個(gè)體發(fā)育等方面的異常，例如:通過慢病毒介導(dǎo)RNAi抑制小鼠MSCs中β－catenin的表達(dá)，可干擾Wnt/β－catenin信號(hào)通路，抑制MSCs增殖、遷移，促進(jìn)MSCs凋亡［13－14］。我們的研究發(fā)現(xiàn)，TMEM88隨hMSCs供體年齡的增加而表達(dá)升高，同時(shí)β－catenin表達(dá)相應(yīng)下降。miR－708－5p可能通過調(diào)控TMEM88及β－catenin表達(dá)，干擾Wnt/β－catenin信號(hào)通路，最終促進(jìn)hMSCs遷移。Wnt/β－catenin信號(hào)通路在hMSCs遷移中的調(diào)控機(jī)制，我們將在后續(xù)研究中進(jìn)一步探討。

我們的研究證實(shí):miR－708－5p隨hMSCs供體年齡的增加而表達(dá)下降;miR－708－5p可通過抑制其靶基因TMEM88的表達(dá)，上調(diào)β－catenin，促進(jìn)hMSCs遷移。本課題對(duì)miR－708－5p促進(jìn)hMSCs遷移及其機(jī)制的闡述，為年齡相關(guān)microRNAs及hMSCs的運(yùn)用提供了理論基礎(chǔ)及研究新方向。

［1］Li J，Dong J，Zhang ZH，et al.miR－10a restores human mesenchymal stem cell differentiation by repressing KLF4［J］.J Cell Physiol，2013，228(12):2324－2336.

［2］黎佼，董珺，張振輝，等.MicroRNA－196a通過HOXB7調(diào)控人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖功能［J］.中國(guó)病理生理雜志，2014，30(2):278－285.

［3］董珺，曾波航，劉寧寧，等.MicroRNA－378*通過抑制CTGF促進(jìn)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡［J］.中國(guó)病理生理雜志，2014，30(12):2238－2242.

［4］Jang JS，Jeon HS，Sun Z，et al.Increased miR－708 expression in NSCLC and its association with poor survival in lung adenocarcinoma from never smokers［J］.Clin Cancer Res，2012，18(13):3658－3667.

［5］黎佼，陳敏生，楊偉健，等.年輕骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可通過細(xì)胞融合改善年老骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞功能［J］.中國(guó)病理生理雜志，2010，26(5):976－981.

［6］Kang SK，Shin IS，Ko MS，et al.Journey of mesenchymal stem cells for homing:strategies to enhance efficacy and safety of stem cell therapy［J］.Stem Cells Int，2012， 2012:342968.

［7］Collins－Hooper H，Woolley TE，Dyson L，et al.Age－related changes in speed and mechanism of adult skeletal muscle stem cell migration［J］.Stem Cells，2012，30 (6):1182－1195.

［8］Bustos ML，Huleihel L，Kapetanaki MG，et al.Aging mesenchymal stem cells fail to protect because of impaired migration and antiinflammatory response［J］.Am J Respir Crit Care Med，2014，189(7):787－798.

［9］Saini S，Yamamura S，Majid S，et al.MicroRNA－708 induces apoptosis and suppresses tumorigenicity in renal cancer cells［J］.Cancer Res，2011，71(19):6208－6219.

［10］Ryu S，Mcdonnell K，Choi H，et al.Suppression of miRNA－708 by polycomb group promotes metastases by calcium－induced cell migration［J］.Cancer Cell，2013，23 (1):63－76.

［11］Lee HJ，F(xiàn)inkelstein D，Li X，et al.Identification of transmembrane protein 88(TMEM88)as a dishevelledbinding protein［J］.J Biol Chem，2010，285(53): 41549－41556.

［12］Palpant NJ，Pabon L，Rabinowitz JS，et al.Transmembrane protein 88:a Wnt regulatory protein that specifies cardiomyocyte development［J］.Development，2013，140 (18):3799－3808.

［13］Lim X，Tan SH，Koh WL，et al.Interfollicular epidermal stem cells self－renew via autocrine Wnt signaling［J］.Science，2013，342(6163):1226－1230.

［14］付成娟，李振宇，李德鵬，等.慢病毒介導(dǎo)RNAi干擾βcatenin對(duì)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)行為的影響［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2013，21(6):1546－1551.

miR-708-5p accelerates migration of human mesenchymal stem cells by repressing TMEM88 expression

LI Jiao1，2，LIU Ning－ning1，HU Ming2，ZENG Bo－h(huán)ang3，DONG Jun1，3，LIU Shiming1，2

(1Guangzhou Institute of Cardiovascular Disease，2Department of Cardiology，3Department of Oncology，The Second Affiliated Hospital，Guangzhou Medical University，Guangzhou 510260，China.E-mail:gzlijiao@163.com)

AIM:To investigate the effect of microRNA－708－5p(miR－708－5p)on the migration of human mesenchymal stem cells(hMSCs).METHODS:The expression of miR－708－5p was determined by miRNA arrays and real－time PCR.By transfection of miR－708－5p mimic or inhibitor，the up－regulation or down－regulation of miR－708－5p expression in hMSCs was evaluated.The cell scratch and Transwell tests were used to detect the migration capability of hMSCs.The effects of transmembrane protein 88(TMEM88)，a miR－708－5p target gene，on β－catenin expression and migration of hMSCs were detected.RESULTS:The expression of miR－708－5p was down－regulated in the old hMSCs compared with the young hMSCs.Up－regulation of miR－708－5p resulted in increasing migration of hMSCs.Conversely，down－regulation of miR－708－5p resulted in decreasing cell migration.The expression of TMEM88 was up－regulated in the old hMSCs compared with the young hMSCs，while the expression of β－catenin was down－regulated.Directly repression of TMEM88 expression increased the β－catenin expression and migration of hMSCs.The regulation of miR－708－5p on hMSCs was attenuated by inhibiting the expression of miR－708－5p and TMEM88 together.CONCLUSION:miR－708－5p increases β－catenin expression and Wnt/β－catenin activity by repressing TMEM88，thus enhancing the migration of hMSCs.

Human mesenchymal stem cells;MicroRNA－708－5p;Age;Cell migration

R363

A

10.3969/j.issn.1000－4718.2015.02.009

1000－4718(2015)02－239－06

2014－10－13

2014－11－11

國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金資助項(xiàng)目(No.81401156);廣州市醫(yī)藥衛(wèi)生科技項(xiàng)目(No.20141A011088)

△通訊作者Tel:020－34153522;E－mail:gzlijiao@163.com