副豬嗜血桿菌hhdA克隆、抗原表位預(yù)測(cè)和表達(dá)
2015-05-15 05:59:40曾文斌劉悅欣聶小偉黃冬艷
曾文斌，劉悅欣，謝 巧，聶小偉，黃冬艷，王 萍*
(1.江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，江西 南昌 330045;2.江西省家畜血防站，江西 南昌 330046)
副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis，HPS)可引起豬的格氏病，臨床上以多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎、肺炎為特征［1］。該菌已成為國(guó)內(nèi)外引起保育仔豬死亡的一個(gè)重要因素，且死亡率呈顯著上升趨勢(shì)。目前，已有關(guān)于副豬嗜血桿菌毒力因子的報(bào)道［2-5］，但對(duì)編碼神經(jīng)氨酸苷酶基因的了解還很少，對(duì)副豬嗜血桿菌外膜蛋白所引起的致病性研究還處于鑒定階段，利用毒力因子來(lái)區(qū)分致病菌株和非致病菌株還存在缺陷［6-7］。毒力因子是構(gòu)成細(xì)菌毒力的物質(zhì)基礎(chǔ)，在其病原菌的致病過(guò)程中發(fā)揮主要作用，因此對(duì)毒力因子生物學(xué)特性的研究是探索病原菌致病機(jī)理的首要任務(wù)［8］。為了進(jìn)一步明確致病菌株和非致病性菌株的差異性，Meike等研究發(fā)現(xiàn)在HPS致病菌株基因組內(nèi)有hhdA基因存在于大多數(shù)致病菌株中，而非致病菌株中為陰性［9］。因此，筆者對(duì)臨床發(fā)病豬中所分離的HPS菌株進(jìn)行hhdA基因的克隆，應(yīng)用生物信息學(xué)軟件對(duì)hhdA基因及其編碼的蛋白質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)及功能的分析，構(gòu)建pET-32a(+)-hhdA原核表達(dá)載體，誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白，將為進(jìn)一步制備hhdA單克隆抗體提供免疫原并為研究hhdA分子生物學(xué)功能提供重組蛋白奠定基礎(chǔ)。
1 材料與方法
1.1 載體和菌株
載體pMD18-T購(gòu)自大連寶生物公司;感受態(tài)細(xì)胞Top10、BL21(DE3)菌株均購(gòu)自天根生化科技(北京)有限公司;pET-32a(+)以及副豬嗜血桿菌均由本實(shí)驗(yàn)室保存。
