HSG通過Wnt/β-catenin通路抑制COPD大鼠氣道成纖維細胞增殖

葛正行，李 霄，周 洵，李 波，婁 強

(1.貴陽中醫學院附屬第二醫院 呼吸內科，貴州 貴陽550001;2.貴陽中醫學院 研究生院，貴州 貴陽550002)

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是一種以持續氣流受限為特征的肺部疾病，氣道重建是COPD的關鍵，其本質是小氣道的慢性炎癥及纖維化[1]，而成纖維細胞過度激活發揮了極大的作用。因此尋找調控氣道重建的關鍵基因并進行干預是尋求慢阻肺新療法的突破點。本課題組前期證實，當HSG 基因轉染到COPD大鼠氣道成纖維細胞能抑制其增殖[2]。但調控相關基因及細胞因子的網絡通路尚未完全闡明。Wnt/β-catenin通路是目前公認的調節慢阻肺氣道重建的重要信號傳導通路之一[3]。本實驗擬探索HSG 在COPD 氣道重建中與Wnt/β-catenin信號傳導通路的關系，及其調控氣道重建的機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物:SPF級雄性SD大鼠[SCXK(渝2012-0005)重慶騰鑫生物技術有限公司SPF級]，體質量(120±20 g)，鼠齡6周。

1.1.2 試劑:脂多糖(LPS)(Sigma 公司);Gibco 胎牛血清(Life Technologies 公司);Trizol 試劑(Invitrogen 公司);RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit(Thermo Scientific 公司);Universal SYBR Green Supermix 2×Utaq PCR Master(BIO-RAD 公司);Anti-Mitofusin 2 抗體、Anti-beta Catenin 抗體、Anti-GSK3β抗體、Anti-Lamin B1 抗體、Anti-GAPDH 抗體(Abcam公司)。

1.2 方法

1.2.1 COPD大鼠模型建立及鑒定:將大鼠分為對照組及COPD模型組。造模方法參見文獻[4]。造模結束后隨機處死對照組大鼠10只及模型組大鼠20只，切取左肺組織用4%多聚甲醛固定，石蠟切片，HE染色。采用圖像分析系統進行圖像分析，以WAt/Pbm 評價肺組織小氣道重構增厚情況，測定方法參見文獻[5]。

1.2.2 大鼠氣道成纖維細胞培養及鑒定:按照文獻[6]分離大鼠小氣道進行成纖維細胞原代培養，3～5代細胞用于后續研究。成纖維細胞的鑒定參見文獻[2]。

1.2.3 Real ime PCR檢測成纖維細胞HSG 和βcatenin表達:Trizol 法提取細胞總RNA 并采用紫外分光光度計測定純度及濃度。……