XAV939抑制人肝癌HepG2細(xì)胞血管生成擬態(tài)的形成

湯曉穎，龐林賓，宋立文，王洪林*

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 肝膽外科，重慶400016;2.德州市人民醫(yī)院普外科，山東 德州253000;3.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬大學(xué)城醫(yī)院 肝膽外科，重慶401331)

肝癌是常見惡性腫瘤之一，臨床發(fā)現(xiàn)多處于晚期，治療效果不理想，影響其治療效果的因素較多，其中腫瘤的血管生成擬態(tài)起到重要作用。腫瘤的血管生成擬態(tài)可影響腫瘤的轉(zhuǎn)移，是近年研究的熱點(diǎn)。XAV939是一種小分子選擇性抑制劑，較特異的抑制Wnt/β-catenin信號通路[1]。本研究應(yīng)用XAV939 作用于人肝癌HepG2細(xì)胞，探討Wnt/β-catenin信號通路在人肝癌HepG2細(xì)胞血管生成擬態(tài)形成中的作用及可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

人肝癌HepG2細(xì)胞系(中科院上海細(xì)胞所)，XAV939(Sigma 公司)，CCK8 試劑盒(上海七海復(fù)泰生物科技有限公司)，RT-PCR 試劑盒(TaKaRa 公司)，β-catenin、ZEB1 及MMP-7 單抗(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及分組:HepG2細(xì)胞用含10%胎牛血清的RPMI1640，置于37℃、5% CO2、飽和濕度細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，用0.25% 胰蛋白酶(含0.02%EDTA)消化傳代，取對數(shù)期細(xì)胞進(jìn)行實驗。實驗分為對照組和實驗組(0.5 和1 μmol/L XAV939 分別處理HepG2細(xì)胞48 h)。

1.2.2 CCK8 檢測XAV939對HepG2細(xì)胞生長的影響及實驗組藥物濃度選擇:將HepG2細(xì)胞用培養(yǎng)液配成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔(90 μL)接種于3塊96孔板，每塊分為實驗組、細(xì)胞對照組和試劑對照組，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h后，實驗組分別加入10 μL 終濃度分別為0.5、1、5、10 和50 μmol/L的XAV939，其余組加等體積RPMI1640 培養(yǎng)液，每組3個復(fù)孔。每塊96孔板分別培養(yǎng)24、48 和72 h后，每孔更換新培養(yǎng)基100 μL，再加入CCK8 10 μL，繼續(xù)培養(yǎng)1 h，酶標(biāo)儀450 nm 波長下檢測各孔A值，實驗重復(fù)3次。

1.2.3 體外成管實驗[2]:將Matrigel 基質(zhì)膠用RPMI1640 1∶3 稀釋后以200 μL/孔鋪到24孔板底，紫外燈下過夜，然后置于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育30 min備用。……