異氟烷減輕人心肌細胞缺氧/復氧損傷的研究

梁 冰，方 潔

(河南中醫學院 第一附屬醫院 麻醉科，河南 鄭州450000)

非致命性心梗導致的心臟功能受損是臨床治療中一個最大的難題，其病理學機制主要是缺血/再灌注(IR)造成的心肌損傷。IR 可通過誘導心肌細胞凋亡而致細胞死亡[1]。缺氧誘導因子1(hypoxia-inducible factor 1，HIF-1)是臨界氧敏感性轉錄調控的關鍵因子，被認為是IR 誘導細胞凋亡過程中的關鍵調控因子，可有效保護IR 對心肌細胞的損傷[2]。異氟烷是臨床中最常應用的全身麻醉藥。體內外研究均報道異氟烷預處理對心肌IR 損傷具有保護作用[3]。異氟烷可通過上調HIF-1α的表達，發揮對缺血性腦損傷[4]和血管IR 損傷[5]的保護作用，但異氟烷是否通過HIF-1α 通路發揮對心肌細胞的保護作用，目前鮮見報道。本實驗以缺氧/復氧(AR)人心肌細胞作為IR 損傷心肌的體外模型，研究異氟烷對心肌細胞AR 損傷和HIF-1α表達的影響。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

人心肌細胞系HCM(ATCC);DMEM 培養基(Gibco 公司);胎牛血清FBS(Hyclone 公司);CCK-8試劑盒、BCA蛋白濃度測定試劑盒(碧云天生物技術研究所);LDH活性檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所);Annexin V-FITC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒(南京凱基生物科技發展有限公司);RNA 提取試劑盒與lipofectamine RNAiMAX 轉染試劑(Invitrogen公司);反轉錄試劑盒(Takara 公司);HIF-1α siRNA和非特異性siRNA(Qiagen 公司);兔抗HIF-1α 和兔抗β-actin 抗體(Santa Cruz 公司);辣根過氧化物標記的羊抗兔二抗(Cell Signaling 公司)。

1.2 缺氧/復氧心肌細胞模型的建立

參照Liu 等[6]的方法制備缺氧培養液。缺氧處理前先將細胞培養液換為缺氧培養液，并將細胞置于含5% CO2和95% N2的無氧培養箱中培養3 h，然后將細胞培養液換為復氧培養液，并將細胞置于37℃、5% O2和95%空氣的培養箱中培養3 h。……