廣藿香葉揮發油抗炎作用機制實驗研究

齊珊珊 胡麗萍

廣藿香葉揮發油抗炎作用機制實驗研究

齊珊珊 胡麗萍

目的 對廣藿香葉揮發油抗炎機制進行實驗研究。方法 通過研究廣藿香葉揮發油對角叉菜膠致大鼠足腫炎癥模型組織和血清中前列腺素E2(PGE2)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量的影響, 探討廣藿香葉抗炎作用機理。結果 廣藿香葉揮發油能明顯降低大鼠角叉菜膠性炎癥模型組織和血清中的PGE2和MDA的含量, 能降低角叉菜膠致大鼠足腫炎癥模型血清中NO的含量。結論 廣藿香葉揮發油抗炎作用機制與抑制炎癥組織PGE2合成、減少炎癥組織中MDA堆積, 降低NO含量有關。

廣藿香葉揮發油；抗炎；前列腺素E2；丙二醛；一氧化碳

廣藿香為唇形科刺蕊草屬植物, 味辛、性微溫, 是我國重要常用中藥之一, 含有揮發油、黃酮、生物堿等化學成分,其中主要成分為揮發油。葉中揮發油的相對含量是各類藥用部位中最高的［1］, 研究報道廣藿香全草揮發油有明顯的抗炎、抗菌、抗過敏等作用［2-5］。本文對廣藿香葉揮發油的抗炎作用機制進行了研究。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 昆明種小鼠, Wistar大鼠, 由沈陽醫學院實驗動物中心提供, 實驗動物合格證號：SCXK(遼)2004-0018。

1.1.2 實驗藥品及制備 實驗用廣藿香購自海南萬寧廣藿香GAP生產基地, 批號：20060918。把廣藿香葉粉碎成粗粉,加入10倍量的蒸餾水浸泡30 min后按《中國藥典》一部附錄方法提取揮發油, 回流時間為4 h, 充分靜置后分離揮發油,出油率為4%。臨用時每4 ml揮發油加入1 ml吐溫-80混勻,用蒸餾水配制為相應濃度的廣藿香揮發油乳劑。醋酸潑尼松：天津藥業焦作有限公司, 批號：07070211。瓶裝：5 mg/片。

1.1.3 試劑 吐溫-80：天津市科密歐化學試劑有限公司,批號：20070406；營養瓊脂：上海伊華醫學科技有限公司,批號：20021011；氫氧化鉀：沈陽正信高科技研究所試劑部,批號：20040605；甲醇：山東禹王實業有限公司禹城化工廠,批號：20071026；丙二醛試劑盒：南京建成生物工程研究所,批號：20080919；一氧化氮試劑盒:南京建成生物工程研究所,批號：20080919。

1.1.4 儀器 BS223S型電子天平：北京賽多利斯儀器有限公司；MLS-3780型高壓蒸汽滅菌器：成都泰盟科技有限公司生產；T6新世紀型紫外分光光度計：北京普析通用儀器有限責任公司。

1.2 方法

1.2.1 廣藿香葉揮發油對大鼠角叉菜膠性炎癥組織PGE2含量的影響［6-8］取130～150 g雄性大鼠50只, 按體重隨機分五組, 空白對照組、廣藿香葉揮發油高劑量組(0.56 ml/kg)、中劑量組(0.28 ml/kg)、低劑量組(0.14 ml/kg)、醋酸潑尼松組(20.00 mg/kg), 每組10只。灌胃給藥, 1次/d, 連續給藥7 d,空白對照組灌胃給予體積濃度為20%的吐溫-80蒸餾水溶液。末次給藥30 min后, 將1%角叉菜膠0.1 ml注入每只鼠的左后足掌心皮下致炎4 h后, 處死大鼠, 立即自踝關節上0.5 cm處剪下炎性腫脹足, 致炎足剝皮, 剪碎置于5 ml生理鹽水中浸泡1 h, 取上清液0.3 ml, 并加入0.5 mol/L KOH 2 ml,然后在50℃水浴中異構化20 min, 加入甲醇5ml后, 用紫外分光光度計測定前列腺素E2的含量(波長278 nm)。

1.2.2 廣藿香葉揮發油對大鼠角叉菜膠性炎癥血清中PGE2含量的影響［9］取130～150 g 雄性大鼠50只, 按體重隨機分五組, 分組及給藥劑量、時間同“1.2.1”。模型對照組灌服等容積蒸餾水。末次給藥30 min后, 將1%角叉菜膠0.1 ml注入每只鼠的左后足掌心皮下致炎4 h后, 摘眼球取血, 靜置3000 r/min離心10 min得血清, 取血清0.3 ml, 并加入0.5 mol/L KOH 2 ml, 然后在50℃水浴中異構化20 min, 加入甲醇5 ml后,用紫外分光光度計測定前列腺素E2的含量(波長278 nm)。

1.2.3 廣藿香葉揮發油對大鼠角叉菜膠性炎癥血清中MDA含量的影響 取130～150 g 雄性大鼠50只, 按體重隨機分五組, 分組、給藥劑量、時間同“1.2.1”。末次給藥30 min后,將1%角叉菜膠0.1 ml注入每只鼠的左后足掌心皮下致炎4 h后, 摘眼球取血, 靜置后3000 r/min離心10 min得血清, 按試劑盒說明測定MDA含量。

1.2.4 廣藿香葉揮發油對大鼠角叉菜膠性炎癥血清中NO含量的影響 取130～150 g雄性大鼠50只, 按體重隨機分五組, 分組、給藥劑量、時間同“1.2.1”。末次給藥30 min后,將1%角叉菜膠0.1 ml注入每只鼠的左后足掌心皮下致炎4 h后, 摘眼球取血, 靜置后3000 r/min離心10 min得血清, 按試劑盒說明測定NO含量。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計學軟件對數據進行處理分析。計量資料以均數±標準差( x-±s)表示, 采用t檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 廣藿香葉揮發油對大鼠炎癥組織中PGE2含量的影響 廣藿香葉揮發油對大鼠角叉菜膠性炎癥組織PGE2生成有抑制作用, 高劑量組吸光度值與空白對照組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 廣藿香葉揮發油對大鼠炎癥血清中PGE2含量的影響 廣藿香葉揮發油對大鼠角叉菜膠性炎癥血清中PGE2生成有抑制作用, 高劑量組吸光度值與空白對照組比較差異有統計學意義(P＜0.05), 見表2。

2.3 廣藿香葉揮發油對大鼠炎癥血清中MDA含量的影響 廣藿香葉揮發油對大鼠角叉菜膠性炎癥血清中MDA生成有抑制作用, 高劑量組含量與空白對照組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。見表3。

2.4 廣藿香葉揮發油對大鼠炎癥血清中NO含量的影響 廣藿香葉揮發油能降低大鼠角叉菜膠炎癥血清中NO含量,其中高劑量組與空白對照組比較NO含量差異有顯著意義(P＜0.05)。見表4。

表1 廣藿香葉揮發油對大鼠炎癥組織中PGE2含量的影響

表1 廣藿香葉揮發油對大鼠炎癥組織中PGE2含量的影響

注：與空白對照組比較,aP＜0.05,bP＜0.01

組別劑量吸光度(OD)空白對照組0.116±0.058醋酸潑尼松組20.00 mg/kg 0.042±0.013b低劑量組0.14 ml/kg0.076±0.033中劑量組0.28 ml/kg0.097±0.047高劑量組0.56 ml/kg 0.059±0.024a

表2 廣藿香葉揮發油對大鼠炎癥血清中PGE2含量的影響

注：與空白對照組比較,aP＜0.05,bP＜0.01

組別劑量吸光度(OD)空白對照組0.452±0.051醋酸潑尼松組20.00 mg/kg 0.389±0.030b低劑量組0.14 ml/kg0.431±0.041中劑量組0.28 ml/kg0.408±0.068高劑量組0.56 ml/kg 0.404±0.030a

表3 廣藿香葉揮發油對大鼠炎癥血清中MDA含量的影響

注：與空白對照組比較,aP＜0.05

組別劑量含量(nmol/L)空白對照組3.90±0.69醋酸潑尼松組20.00 mg/kg2.97±0.82低劑量組0.14 ml/kg3.19±0.98中劑量組0.28 ml/kg3.16±0.95高劑量組0.56 ml/kg 3.01±0.93a

表4 廣藿香葉揮發油對大鼠炎癥血清中NO含量的影響

表4 廣藿香葉揮發油對大鼠炎癥血清中NO含量的影響

注：與空白對照組比較,aP＜0.05

組別劑量含量(μmol/L)空白對照組3.54±0.68醋酸潑尼松組20.00 mg/kg2.96±0.40低劑量組0.14 ml/kg3.32±1.03中劑量組0.28 ml/kg3.34±0.86高劑量組0.56 ml/kg 2.86±0.76a

3 討論

按炎癥介質的來源、性質、作用主要可以分為細胞釋放的炎性介質和體液中的炎性介質。其中細胞釋放的炎性介質包括：血管活性胺、花生四烯酸代謝產物(有前列腺素和白細胞三烯)、NO等。丙二醛是脂質過氧化產物, 與自由基的生成有密切關系, 自由基在炎癥的發展過程中起重要作用。在本實驗中采用角叉菜膠致炎, 激活了花生四烯酸的代謝通路, 產生炎癥過程中的自由基。故可通過對炎癥血清MDA含量的測定來研究藥物抑制MDA產生的程度, 從而探討藥物的抗炎作用機理。

廣藿香葉揮發油抗炎作用機制實驗結果顯示：廣藿香葉揮發油能降低炎癥組織和血清中前列腺素E2和NO的含量,推測廣藿香葉揮發油對炎癥的對抗作用是通過抑制了炎癥組織和血清中炎性介質的合成、釋放而實現的。實驗結果同時表明, 廣藿香葉揮發油能減少血液中脂質過氧化產物-丙二醛的堆積, 縮短炎癥過程。

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10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.02.182

2014-08-25］

253012 德州市立醫院(齊珊珊)；遼寧中醫藥大學(胡麗萍)

胡麗萍