術后化療的Ⅱ期結腸癌患者血清Smad4的表達及臨床意義

劉巖青 盛吉章 孫鳳莉

術后化療的Ⅱ期結腸癌患者血清Smad4的表達及臨床意義

劉巖青 盛吉章 孫鳳莉

目的 研究Ⅱ期結腸癌患者術后行輔助化療前后血清Smad4表達水平及臨床意義。方.110例Ⅱ期結腸癌術后輔助化療的患者, 根據有無復發情況分為復發組(37例)和未復發組(73例)；應用酶聯免疫吸附劑測定法(ELISA)對其輔助化療前后血清Smad4水平進行檢測。分析血清Smad4水平與患者無病生存時間的關系。結果 未復發組化療后血清Smad4水平與化療前相比明顯升高, 差異有統計學意義(P＜0.05)；復發組化療前血清Smad4顯著低于未復發組, 兩組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。患者血清Smad4水平與患者無病生存期呈正相關(I=-2.03, P＜0.05)。結論 血清Smad4水平變化可作為評測Ⅱ期結腸癌患者術后輔助化療療效及預后的重要分子生物學指標。

血清Smad4；結腸癌 ；化療；酶聯免疫吸附劑測定法

結腸癌是常見的消化系統惡性腫瘤, 其易復發和轉移的特性嚴重威脅著人類的健康和生命［1］。Ⅱ期結腸癌最為多見, 手術治療是其公認的治療手段, 而輔助化療也越來越普遍, 但是輔助化療的效果卻存在爭議。因此, 尋找能早期預測化療療效的分子生物學指標非常重要。Smad4基因是轉化生長因子-β(TGF-β) 信號通路的重要級聯分子, 在信號轉導、調節靶基因的轉錄過程中發揮著重要的作用［2］。作者之前的研究表明Smad4在結腸癌的發生發展中起著非常重要的作用, 參與了腫瘤新生淋巴管的生成, 促進了腫瘤的轉移［3］。本研究進一步探討血清Smad4水平變化在Ⅱ期結腸癌患者術后化療中的臨床意義。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取滄州市中心醫.2013年5月～2015年8月經病理和臨床指標診斷為Ⅱ期結腸癌患者110例, 平均年齡(68±10)歲, 平均隨訪時間為60個月。其中未復發者(未復發組)73例, 復發者(復發組)37例。所有患者均行結腸癌根治術, 術后行靜脈化療, 化療方案：四氫葉酸200 mg/m2, 5-氟尿嘧啶425 mg/m2連續5 d.28 d為1個周期, 共化療6周期。所有患者術前均未接受化療、放療及免疫治療等抗腫瘤治療。兩組患者一般資料比較, 差異無統計學意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 血清Smad4的檢測方法

1.2.1 建立標準曲線 利用棋盤滴定法確定抗原、抗體最適工作濃度。采用間接ELlSA法檢測不同濃度標準品的吸光度值, 以濃度為橫坐標, 以吸光度為縱坐標, 建立標準曲線。

1.2.2 血清Smad4檢測 早晨空腹抽取靜脈血3 m.25℃條件下靜置1 h.10000 r/min高速離心10 min, 取上清血漿1 ml,加入1.5 ml試管中, 置入-65℃冰箱保存。待所有血液樣品處理完之后統一采用ELISA檢測Smad4蛋白濃度, 實驗嚴格按照Smad4蛋白(ELISA)試劑盒說明書操作。

1.3 隨訪 所有患者均采用電話隨訪、門診復查和住院等相結合的隨訪方式。

1.4 統計學方法 采用Curve Expert1.30曲線軟件繪制標準曲線。采用SPSS20.0統計學軟件進行數據統計分析。計量資料以均數±標準差(±s)表示, 采用t檢驗；計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者化療前血清Smad4水平變化比較 復發組化療前血清Smad4水平為(36.5±8.7)pg/ml, 而未復發組中化療前血清Smad4水平為(75.4±12.7)pg/ml, 兩者相比差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1, 圖1。

2.2 兩組患者化療前后血清Smad4水平變化比較 復發組術化療后Smad4水平為(40.2±11.5)pg/ml, 與化療前Smad4水平相比差異無統計學意義(P＞0.05)。而未復發組化療后Smad4水平為(99.3±21.5)pg/ml, 顯著高于于化療前水平, 差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1, 圖2。

表1 兩組化療前血清中Smad4蛋白的表達情況比較(±s, n)

表1 兩組化療前血清中Smad4蛋白的表達情況比較(±s, n)

注：兩組比較, P＜0.05

組別例數Smad4(pg/ml)陽性陰性復發組3736.5±8.71621未復發組73 75.4±12.75023

表2 兩組化療后血清中Smad4蛋白的表達情況比較(±s, n)

表2 兩組化療后血清中Smad4蛋白的表達情況比較(±s, n)

注：兩組比較, P＜0.05

組別例數Smad4(pg/ml)陽性陰性復發組3740.2±11.52017未復發組7399.3±21.54528

圖1 復發組化療前Smad4血清蛋白表達水平明顯低于未復發組化療前Smad4的表達水平

圖2 未復發組患者化療前血清Smad4表達水平明顯低于化療后Smad4的表達水平

2.3 化療前血清Smad4與患者無病生存時間的關系 患者化療前血清Smad4的水平與其無病生存期呈正相關 (I=-2.03, P＜0.05)。患者化療前血清Smad4水平越高, 其無病生存時間越長；Smad4 陽性表達組的無病生存時間明顯的長于Smad4陰性表達組, 兩組差異有統計學意義(P＜0.05)。見圖3。

圖3 血清Smad4表達水平與Ⅱ期結腸癌患者術后化療患者無病生存期的關系

3 討論

結腸癌是最常見的惡性腫瘤之一, 嚴重威脅人類健康。多種治療手段, 如手術治療、化療和靶向治療, 使Ⅱ期結腸癌的治愈率已明顯提高, 但化療后仍有部分患者出現腫瘤的復發和轉移［4］。因此, 尋找能早期預測化療療效的分子生物學指標非常重要。目前, Ⅱ期結腸癌患者的最主要化療方案還是以5-氟尿嘧啶為基礎的化療。Smad蛋白被證實是TGF-β家族的下游信號蛋白, 在信號轉導、調節靶基因的轉錄過程中發揮著重要的作用［5］。Smad4蛋白是其重要的成員之一, 其位于人染色體18q21, 是首先在胰腺癌中發現的新型抑癌基因［6］, 其所編碼的Smad4蛋白是轉化生長因子-β(TGF-β)信號通路的重要級聯分子, 在信號轉導、調節靶基因的轉錄過程中發揮著重要的作用［7］。國外多項研究報道, 在胰腺癌、乳腺癌、結腸癌、食管癌中, Smad4基因的缺失與失活可以增加腫瘤細胞的侵襲與轉移能力, 從而導致腫瘤的轉移復發［8］。Papageorgis等［2］經體外實驗證實Smad4基因失活能與結腸癌細胞的化療耐藥有密切關系, Smad4可能在結腸癌的發生發展中發揮著重要的作用。因此,本研究選取110例Ⅱ期結腸癌術后行以5-氟尿嘧啶為基礎的輔助化療的患者, 對其化療前后的血清中Smad4水平進行檢測, 探討其在其化療中的意義及其與無病生存時間的關系。

研究結果發現, 復發組化療前血清中Smad4水平明顯的低于未復發組(P＜0.05)；復發組化療前后血清中Smad4水平變化不顯著；但是未復發組化療后血清中Smad4水平與化療前血清Smad4水平相比, 明顯升高(P＜0.05)；這說明在在結腸癌患者中Smad4發揮了抑制腫瘤復發轉移的作用, 這與之前的研究結果是一致的［9］；同時也說明血清中Smad4的水平可以預測Ⅱ期結腸癌術后對以5-氟尿嘧啶為基礎的輔助化療的療效和敏感性的預測, 高水平的Smad4的Ⅱ期結腸癌術后患者對以5-氟尿嘧啶為基礎的輔助化療有良好的療效, 復發轉移的幾率也明顯降低。作者進一步分析了血清中Smad4表達水平與Ⅱ期結腸癌化療后的無病生存期之間的關系, 結果表明, 血清中Smad4水平與結腸癌患者化療后的無病生存時間呈正相關, 化療前血清Smad4水平越高, 其無病生存時間越長, Smad4 陽性表達組的無病生存時間明顯的長于Smad4陰性表達組。

總之, 血清中Smad4的水平能預測Ⅱ期結腸癌患者術后對5-氟尿嘧啶為基礎的輔助化療的敏感性, 并與化療后患者的無病生存時間呈負相關, Smad4在結腸癌的發生發展中發揮著抑制因子的作用。但是, 因為本研究樣本量有限, 還待更大的臨床樣本來證實, 同時, 需要更多更深入的具體分子機制的研究。

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10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.36.113

2015-09-02］

061001 滄州市中心醫院腫瘤外二科(劉巖青孫鳳莉), 心內科(盛吉章)