ELISA法檢測HIV抗體弱陽性外部對照血清的制備及評估

曹紅亞 李姣

ELISA法檢測HIV抗體弱陽性外部對照血清的制備及評估

曹紅亞 李姣

目的 研究酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法檢測人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體弱陽性外部對照血清的制備方法及效果。方法 選取20例HIV患者, 另選取20例健康人員, 抽取所有受檢者血液,分別制成HIV陽性混合血漿與HIV陰性混合血漿。使用HIV陰性血漿稀釋HIV陽性的血漿, 并使用荷蘭生物梅里埃試劑進行檢驗, 檢驗次數為12次。同時對比不同稀釋度的 HIV 抗體弱陽性外部質控血漿的配制及 OD 值和HIV 弱陽性外部質控血漿12次的檢測結果進行對比分析。結果 結合數據的對比分析后發現, 經過1年使用后的自制弱陽性的外部質控血漿較好, 因為其具有良好的穩定性, 其變異系數(CV)＜20%。結論 在實驗室自制弱陽性的外部質控血漿, 這樣更適合, 且操作簡單方便, 還易于保存。ELISA法檢測HIV抗體弱陽性外部對照血清的制備較好, 值得臨床推廣和應用。

酶聯免疫吸附試驗；人類免疫缺陷病毒抗體；對照血清；制備；評估

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2012年1月～2013年5月就醫的20例HIV患者為研究對象。女8例, 男12例, 年齡23～68歲,平均年齡(37.5±9.5)歲。

1.2 方法 在實驗前, 準備相應的血漿、試劑和儀器。需要準備的血漿有兩種, 分別為HIV陽性的混合血漿, 另一種為HIV陰性混合血漿；需要準備的試劑為在保質期內的荷蘭生物梅里埃抗體酶聯免疫診斷試劑盒；需要準備的儀器有洗板機和酶標儀。

1.2.1 自制弱陽性外部對照血清 抽取20例健康人員的血液.20例健康人員的肝功能為正常、HCV為陰性, 并將HIV陰性血各2 ml混合, 同時進行滅菌。滅菌的時間為30 min,溫度需達到56℃, 并離心15 min.3000 r/min, 然后收集上層清液進行備用。而后, 將20例HIV陽性血(100 μl/例)混合,同時進行滅菌。滅菌的時間為30 min, 溫度需達到56℃, 并離心15 min.3000 r/min, 然后收集上層清液進行備用。最后,使用HIV陰性混合血與HIV陽性混合血進行稀釋, 并使用荷蘭生物梅里埃抗體酶聯免疫診斷試劑進行檢測, 檢測次數為12次, 并觀察OD、S/CO以及CUTOFF的值［1,2］。

1.2.2 質控圖 反復實驗稀釋度為1∶1200的弱陽性外部對照血清, 在其穩定后將36 ml的陰性混合血漿與30 μl的HIV陽性混合血漿進行均勻的混合, 做成稀釋度為1∶1200的弱陽性外部對照血清, 并進行保存。保存器皿使用尖底離心管, 每管保存劑量為70 μl, 保存溫度為-20℃。最后, 由不同的操作人員在不同的時間進行檢測, 并記錄其CUTOFF值［3-6］。

1.3 觀察指標 觀察稀釋度、OD、CUTOFF、A值、S/CO值以及CO值等。

2 結果

2.1 觀察指標數值 稀釋度、OD、CUTOFF等見表1, 表2。

表1 不同稀釋度的 HIV 抗體弱陽性外部質控血漿的配制及OD值

表2 HIV弱陽性外部質控血漿12次的檢測結果

2.2 穩定性 對于已經保存在-20℃內1年的外部對照血清使用一樣廠家, 但是不同批次的荷蘭生物梅里埃抗體酶聯免疫診斷試劑, 進行常規檢驗3～4次/月.1年共44次, CV為11.01%, 但是CV值僅有少于20%的在規定范圍內。

3 討論

在實驗室內自制HIV抗體弱陽性的外部對照血清的好處是不僅成本低, 而且還能夠降低由于運輸、環境以及儀器等問題帶來的誤差［7-9］。從HIV弱陽性外部質控血漿12次的檢測結果可知, 均值為2.96, 標準差為0.42。從上述研究表明, 自制的HIV抗體弱陽性的外部對照血清在1年后的CV＜20%, 能夠長期使用。其優勢是重復性好、穩定性強。在進行實驗過程中, 試劑盒的臨界值應是A值的2～3倍。在實驗過程中, 若是有一些微小的變化對于其結果沒有過大的影響, 例如抗體的滴度過高就沒有監控的作用；如果滴度過低,就會造成不易保存的現象［10］。對于已經保存在-20℃內1年的外部對照血清使用一樣廠家, 但是不同批次的荷蘭生物梅里埃抗體酶聯免疫診斷試劑進行檢驗結果為穩定。實驗室可以選擇一些國家較為認可的試劑進行長期的實驗, 這樣就可以減少經常配置質控品的問題［11］。在實驗室中, 必不可少的就是質控品的配置, 因此質控圖也是必須制作的。實施質量控制, 是為了保障檢驗的準確性［12］。

綜上所述, 在實驗室中配置適合本實驗室的弱陽性的外部對照血清的方式較為可行, 這樣的方法不僅簡單方便, 而且能夠降低成本。同時, 其在HIV的質量評價和質量控制中也應用良多。

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10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.36.023

2015-06-24］

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