紫外線分光光度法測定新疆紅花中總黃酮含量

邢曉軻，黃 斐

(許昌職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 許昌 461000)

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紫外線分光光度法測定新疆紅花中總黃酮含量

邢曉軻，黃 斐

(許昌職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 許昌 461000)

利用紫外線分光光度法測定新疆紅花的總黃酮含量，通過實驗得到：新疆B地紅花當(dāng)中總黃酮含量為1.76%，新疆C地紅花當(dāng)中總黃酮含量為1.22%。新疆A地紅花總黃酮含量為1.08%。實驗結(jié)果表明新疆B地的黃酮含量最高。

新疆紅花；總黃酮含量；紫外線分光光度法

紅花(Carthamus tinctorius)為菊科植物，一年生草本植物干燥的管狀花，是祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的活血化瘀的良藥，也是世界衛(wèi)生組織鼓勵使用的藥食兼用的天然色素之一，現(xiàn)已用于醫(yī)藥、食品、保健品，人工染料等行業(yè)。當(dāng)前，在紅花栽培面積上，印度居于首位，美國、墨西哥以及中國次之[1]。目前，紅花的主要栽培品種為油用品種，在國內(nèi)外得到了廣泛的栽培[2]。油用紅花是優(yōu)質(zhì)油脂的來源之一，主要用于食品加工以及烹調(diào)等。除此以外，紅花的花絨能夠提取出天然色素,紅花天然色素能夠作為食品添加劑、人工染料以及保健品和美容產(chǎn)品等[3]。當(dāng)前我國栽培紅花已經(jīng)有2000年，我國紅花栽培上除了用于提煉油脂以及人工色素以外，更重要的是作為中藥材入藥。在2005版的藥典中對紅花的功能進(jìn)行了這樣的描述：活血、散瘀。用于痛經(jīng)、經(jīng)閉、瘡瘍腫痛、跌撲損傷。現(xiàn)代臨床和藥理作用表明紅花具有對心血管方面的藥理作用，并廣泛應(yīng)用于臨床[4]。

黃酮是紅花中中藥的藥用成分之一[5]。對紅花總黃酮含量進(jìn)行測定在很大程度上能夠?qū)t花質(zhì)量狀況進(jìn)行判定。當(dāng)前測定紅花黃酮類含量的方法主要有這樣幾種：分光光度法、庫侖滴定法、HPCE法以及HPLC法。紫外線分光光度計法測定紅花中總黃酮的含量操作簡單，穩(wěn)定性與重復(fù)性較高，是一個很好的方法[6]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗材料

新疆紅花(1號)采自新疆A地；新疆紅花(2號)采自新疆B地；新疆紅花(3號)采自新疆C地。

1.1.2 儀器

Shimadzu UV-2401紫外-可見分光光度計；X-5顯微熔點測定儀北京泰克儀器有限公司生產(chǎn)；2F-C型三用紫外分析儀上海康樂光電儀器有限公司生產(chǎn)；電熱恒溫水浴鍋北京市永光明醫(yī)療儀器廠生產(chǎn)；EYBLA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上海愛朗儀器有限公司生產(chǎn)；SHZ-D9(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)；電子分析天平AR1140；托盤天平。

蘆丁對照品(中國生物制品鑒定所)；

石油醚、無水乙醇、亞硝酸鈉、NaOH以及硝酸鋁均為分析純。水為蒸餾水。

1.2 方法

1.2.1 對照品和供試品溶液制備

1)對照品溶液制備

精密稱取蘆丁對照品5.00 mg，置50ml容量瓶中，用60%乙醇溶液溶解定容，配成濃度為 0.1mg/ml的對照品溶液。

2)供試品溶液制備

從 3個紅花樣品中各取 1 g，粉碎(40目)，得紅花粗粉。在250 ml圓底燒瓶中加入經(jīng)稱量的 1.00g的紅花粉末 ，并標(biāo)號 1，2，3。向裝有紅花樣品的圓底燒瓶中加入60%乙醇溶液，加至瓶頸處。對溶液進(jìn)行充分搖動，隨后進(jìn)行超聲分離，時間為30min。超聲分離處理后放在室溫下進(jìn)行冷卻處理。待溶液冷卻后用60%乙醇溶液定容到 100 ml的容量瓶當(dāng)中，靜置備用。

1.2.2 線性關(guān)系考察

精密移取蘆丁對照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml分別置于10ml比色管中，加60%乙醇稀釋至5.0ml。將5ml60%的乙醇溶液作為空白，并向其中加入0.3 ml5%NaNO3。對混合液進(jìn)行充分搖勻，隨后進(jìn)行靜置處理6分鐘。靜置處理結(jié)束后向其中加入0.3 ml的10%硝酸鋁溶液。對混合液進(jìn)行充分搖勻，最后進(jìn)行靜置處理6分鐘。靜置結(jié)束后向混合液中加入4ml的4%NaOH溶液。將混合液充分搖勻，隨后靜置處理12分鐘。靜置結(jié)束后，將波長設(shè)定為510 nm，對蘆丁對照組進(jìn)行吸光度的測定。利用Excel表對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行處理得到蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)如表1所示。

如圖1所示，橫坐標(biāo)為蘆丁濃度，縱坐標(biāo)為吸光度值A(chǔ)。回歸方程y = 12.16x - 0.0138, R2= 0.9977。

試驗結(jié)果表明，在0.01-0.05mg/ml范圍內(nèi)，蘆丁線性關(guān)系良好。

表1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

1.2.3 精密度試驗

以蘆丁作為對照組。加入60%的乙醇，并進(jìn)行稀釋。稀釋到5.0ml。向稀釋后的蘆丁乙醇混合液當(dāng)中加5%的NaNO2溶液0.3 ml。將混合液充分搖勻。隨后進(jìn)行靜置處理6 分鐘。靜置結(jié)束后加入10%的AlNO3溶液0.3 ml。將混合液進(jìn)行充分的搖勻，隨后靜置處理6 分鐘。靜置結(jié)束后加入4%的NaOH溶液4.0 ml以及60%的乙醇溶液0.4 ml。將混合液進(jìn)行充分搖勻，隨后靜置處理12分鐘。將波長設(shè)定為510 nm，對對照組溶液的吸光度進(jìn)行測定。

對對照組溶液進(jìn)行6次重復(fù)測定。對6次的測定結(jié)果進(jìn)行相對標(biāo)準(zhǔn)偏差的計算。

計算結(jié)果為：RSD=0.2%。從表2實驗數(shù)據(jù)中可以看到，本實驗具有良好的精密度。

表2 精密度試驗結(jié)果

1.2.4 穩(wěn)定性試驗

通過對來源于海暉藥店的紅花材料進(jìn)行處理，得到其紅花提取液。對紅花提取液進(jìn)行重復(fù)性測試。根據(jù)上文的方法進(jìn)行測定。即在紫外線吸收波長最大處對其吸光度進(jìn)行測定。選取海暉紅花樣品2ml,每隔10min測一次。從表3中可以看到，在波長為510nm時，對紅花提取液當(dāng)中總黃酮含量進(jìn)行測定,試驗數(shù)據(jù)表明吸光度具有一定的穩(wěn)定性。試驗結(jié)果表明該試驗具有良好的重復(fù)性。

表3 穩(wěn)定性實驗結(jié)果

1.2.5 重復(fù)性試驗

通過對來源于人民同泰藥店的紅花材料進(jìn)行處理，得到其紅花提取液。對紅花提取液進(jìn)行重復(fù)性測試。根據(jù)上文的方法進(jìn)行測定。即在紫外線吸收波長最大處對其吸光度進(jìn)行測定。從表4中可以看到，在波長為510nm時，對紅花提取液當(dāng)中總黃酮含量進(jìn)行測定,試驗數(shù)據(jù)表明吸光度具有一定的穩(wěn)定性。試驗結(jié)果表明該試驗具有良好的重復(fù)性。

表4 穩(wěn)定性實驗結(jié)果

1.2.6 回收率試驗

供樣液為總黃酮提取物溶液,分別取供樣液 110ml 、115ml 、2ml 、215ml 、3ml分置與比色管當(dāng)中。加入蘆丁對照液110ml。充分混合均勻。如表5進(jìn)行回收率實驗設(shè)計，按照1.2.4所述的方法進(jìn)行測定。

表5 回收率實驗設(shè)計表格

1.2.7 新疆產(chǎn)紅花含量測定

取已制備好的3份樣品溶液測定，以60%乙醇為空白溶液，在510nm處測定。每個樣品進(jìn)行3次重復(fù)試驗。根據(jù)得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線對新疆產(chǎn)紅花當(dāng)中所含的總黃酮進(jìn)行測定。

2 結(jié)果與討論

表6 紅花總黃酮含量測定

表6中，紅花總黃酮含量的結(jié)果表明：新疆A地紅花總黃酮含量為1.08%,新疆B地紅花總黃酮含量為1.76%,新疆C地紅花總黃酮含量為1.22%。新疆三地中B地的紅花總黃酮含量較高。

本研究中實驗設(shè)計精密度良好，具有一定的穩(wěn)定性，實驗結(jié)果具有較高的可信度，為當(dāng)前測定新疆紅花總黃酮含量提供了簡便且可行的辦法。本文通過紫外分光光度法對新疆產(chǎn)紅花當(dāng)中的有效化學(xué)活性物質(zhì)總黃酮進(jìn)行了含量上的定量測定，對新疆紅花質(zhì)量做了評價，在紅花質(zhì)量評價上形成了一個簡要的研究方向，同時也為紅花質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的評定給出了一定的依據(jù)。此外，本文對新疆產(chǎn)紅花品質(zhì)情況做了具體的闡述，為新疆紅花產(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步壯大發(fā)展提供了方向。

3 結(jié)論

當(dāng)前我國栽培紅花已經(jīng)有2000年，我國紅花栽培上除了用于提煉油脂以及人工色素以外，更重要的是作為中藥材入藥[7]。紅花在市場上的價格較高，有不法分析為例獲得更高的利益不惜制假，以次充好，輕者利用低等級紅花冒充高等級紅花，重者造假制假。這些非法行為不僅為紅花市場帶來了一定的干擾，而且嚴(yán)重影響了新疆紅花的信譽度。通過切實有效簡單的方法測定紅花中有效成分含量以此判斷市場上紅花質(zhì)量定將成為紅花市場進(jìn)行質(zhì)量鑒定的重要手段。

[1] Obara H., J.Onodera. The structure of carthamin ,a component of safflower [J].ChemistryLetters,1979,(12).

[2]OnoderaJ.,H.Obara&M.Osone,etal.Thestructureofsaffomin-A,acomponentofsaffloweryellow[J].ChemistryLetters,1981,(16).

[3]OnoderaJ.,H.Obara&R.Hirose,etal.ThestructureofsaffominC,aconstituentofsafflower[J].ChemistryLetters, 1989,(9).

[4]MeselhyR．,S．Kadota&Y.Momose,etal.TwoNewQuinochalconeYellowPigmentsfromCarthamustinctoriusandCa2+AntagonisticActivityefTinctormine[J].Chemical&PharmaceuticalBulletin, 1993, (10).

[5]KimM.N.,F.L.Scao-Bogaert&M.Paris.FlavonoidsfromCarthamustinctoriusFlowers[J].PlantaMedica,1992,(3).

[6] 董順福，韓麗琴，趙文秀，等.中藥紅花總黃酮及微量元素含量的分析研究[J].光譜學(xué)與光譜分析，2008,(1).

[7] 陳雪英，李頁瑞，陳勇，等.近紅外光譜快速測定紅花逆流提取過程中羥基紅花黃色素A的含量[J].分析化學(xué)，2009，(10).

[編校：張芙蓉]

Determination of Total flavone Content in Xinjiang Safflower by Ultraviolet Spectrophotometry Method

XING Xiaoke, HUANG Fei

XuchangVocationalTechnicalCollege,XuchangHenan461000)

The paper determines the total content of flavonoids in Xinjiang safflower by UV-Vis. The test results run as follows: the total content of flavonoids in Xinjiang B safflower is1.76%.; the total content of flavonoids in Xinjiang C safflower is1.22%; the total content of flavonoids in Xinjiang A safflower is1.08%. Thus the conclusion can be made: the content of flavonoids in Xinjiang B is the highest.

Xinjiang safflower; the total content of flavonoids; UV-Vis

2015-07-15

邢曉軻(1980- )，女，河南禹州人，講師，研究方向為分析化學(xué)。

R284

A

1671-9654(2015)03-056-04