妊娠期糖尿病患者和正常孕婦在不同孕周中血清及新生兒臍血中視黃醇結合蛋白4的含量變化*

孫霞 韓淑娟 紀向虹 王茜

視黃醇結合蛋白4（Retinol binding protein，RBP4）是2005年首先由美國學者Yang等[1]最新發現的由肝臟、脂肪細胞分泌的與肥胖有關的脂肪細胞因子（adipokine），RBP4是一種血漿視黃醇結合蛋白，是全反式視黃醇即維生素A的運載蛋白，其主要功能是進行維生素A的細胞內轉運代謝。在轉運過程中，視黃醇結合蛋白與視黃醇、甲狀腺素運載蛋白形成三聚體，將視黃醇運送至體內特定的靶組織和器官，發揮其主要作用，臨床已用血清RBP4水平變化來早期診斷肝腎疾病。近年來已有研究表明，RBP4與胰島素抵抗的發生關系密切，但RBP4水平在GDM孕婦血清中的變化有不同結論[2]。能否通過控制RBP4水平來干預GDM發展，以提供新的研究方向。本研究選擇2013年1-12月在本院產科產檢的孕婦100例，檢測視黃醇結合蛋白4在妊娠期糖尿病患者和正常孕婦的不同孕周的血清及新生兒臍血中的含量變化，了解RBP4與GDM的關系，現具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年1-12月在本院產科產檢的妊娠期糖尿病孕婦50例作為試驗組，正常孕婦50例作為對照組。所選孕婦均無妊娠期高血壓、冠心病、肝腎功能損害、感染等合并癥，并且年齡、體質指數、采血孕周等一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

表1 兩組一般資料比較（x-±s）

1.2 妊娠期糖尿病診斷標準 參照IADPSG2010診斷方法及標準，在妊娠24~28周首先檢查FPG，FPG≥5.1 mmol/L，可診斷。4.4 mmol/L≤FPG<5.1 mmol/L，則行OGTT：空腹測血糖1次，然后5 min內口服75 g糖，服糖后l、2 h分別測血糖，血糖判定標準為5.1、10.0、8.5 mmol/L，如血糖有1項達到或超過正常值可診斷為GDM，3項均正常為NGT。

1.3 方法

1.3.1 標本采集 于孕31~33周（Ⅰ）、37~41周（Ⅱ）采取孕婦空腹肘靜脈血，產后即刻采取足月新生兒臍血（Ⅲ），孕婦采血前3 天正常飲食與作息，每天碳水化合物攝入量在150 g以上。采血前晚要求禁食12 h，晨起8點抽取空腹靜脈血，靜置2 h使充分凝固，以1000 r/min離心10 min，取上清液（血清）分裝，-80 ℃冰箱保存備用。但應避免反復凍融，-80 ℃不應超過1個月，標本溶血會影響結果，因此溶血標本不應進行此項檢測。所有血樣統一編號保存，各項指標均統一標準。

1.3.2 實驗方法 采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）測定血清RBP4水平，ELISA試劑盒購自美國DR公司，批內差異<57%。實驗開始前，各試劑均平衡至室溫，嚴格按照說明書將標準品倍比稀釋。分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔內加樣品稀釋液100 μL，其他孔分別加標準品或待測樣品100 μL，注意將樣品加于酶標板底部，不觸及孔壁，輕輕搖動混勻，避免氣泡，用酶標板覆膜，37 ℃溫育2 h。棄去液體，甩干，每孔加臨用前配制的檢測溶液A工作液100 μL（生物素化抗體溶液），酶標板覆膜，37 ℃溫育1 h。棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1~2 min，甩干。每孔加臨用前配制的檢測溶液B工作液100 μL（HRP酶結合物溶液），酶標板覆膜，37 ℃溫育1 h。棄去孔內液體，甩干，洗板5次。每孔加底物溶液90 μL，酶標板覆膜，37 ℃避光顯色，當標準孔的前3~4孔有明顯的梯度藍色，后3~4孔梯度不明顯時終止。以與底物液的加入順序相同的順序加終止液50 μL終止反應，藍色立轉黃色。提前設定好酶標儀（美國BIORAD iMark型全自動酶標儀），在450 nm波長測量，直接讀出檢測樣本的濃度值。

1.4 統計學處理 所得數據采用SPSS 18.0進行統計學分析，各指標均服從近似正態分布，計量資料以（±s）表示，方差齊比較采用t檢驗，方差不齊比較采用t’檢驗，多個樣本均數比較采用方差分析，RBP4與其他臨床指標指標間的關系判定分別進行直線相關分析，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清RBP4水平比較 兩組血清RBP4比較，差異有統計學意義（F=1680.85，P<0.001）；不同采血時段血清RBP4比較，差異有統計學意義（F=7285.51，P<0.001）；兩組血清RBP4的差值在不同采血時段逐漸增加，比較差異有統計學意義（F=1381.70，P<0.001），見表 2~3。

表2 兩組血清視黃醇結合蛋白4水平比較（x-±s）μg/mL

表3 重復測量方差分析結果表

2.2 不同采血時段兩兩比較 隨著孕周的增加RBP4增加，不同時間段兩兩比較差異均有統計學意義（P<0.001）；試驗組RBP4增加的幅度大于對照組，比較差異均有統計學意義（P<0.001），見表4。

表4 不同采血時段兩兩比較結果表

2.3 試驗組血清RBP4水平與其他臨床指標的相關性分析 血清RBP4水平與FBG、FINS、HOMA-IR均呈明顯正相關（P<0.001），見表5。

表5 試驗組血清RBP4水平與其他臨床指標的直線相關性分析

3 討論

GDM是指妊娠期發現或首次發生的不同程度的糖代謝異常，GDM與多種母兒并發癥密切相關，GDM對母嬰的危害極大，易導致血管病變，而發生胎兒宮內窘迫、巨大兒、子癇、胎盤早剝、早產等并發癥。而GDM早期診斷與治療尤其重要，人們對它研究了多年，但迄今為止GDM的發病機制尚不清，有學者提出，GDM可能是多種因素起作用而引起的一種疾病，研究脂肪因子，可進一步探討GDM的發病機制，視黃醇結合蛋白4是2005年首先由美國學者Yang等[1]發現的由肝臟、脂肪細胞分泌的脂肪細胞因子（adipokine），RBP4位于染色體10q23-q24，由RBP4基因編碼，主要功能是進行維生素A的細胞內轉運代謝。RBP4屬于血漿視黃醇結合蛋白，RBP4與肥胖、糖尿病、肝病、心腦血管病等的發生、發展相關[3-5]。近年來，國內外許多學者對GDM婦女RBP4和血糖等指標進行了研究，已有研究證實，RBP4與胰島素抵抗關系密切[2]。Chan等[6]研究已發現，RBP4水平在妊娠期糖尿病孕婦血清中高于正常，任利容等[7]也認為GDM孕婦血清RBP4水平明顯升高，RBP4可能參與了GDM孕婦糖代謝紊亂，劉靜婧等[8]研究發現RBP4可能在T2DM發生發展中起作用。本研究顯示隨著妊娠的進展，血清RPB4水平呈上升趨勢，妊娠期糖尿病患者血清RPB4水平各時期均高于正常妊娠組，比較差異均有統計學意義（P<0.001），與上述研究結果一致。但也有學者得出相反結論，Inoue等[9]的研究發現RBP4水平在早孕、中孕、晚孕時無明顯差異；Krzyzanowska等[10]的研究結果表明孕29周時，RBP4水平在GDM患者血清中明顯低于健康孕婦，而血清RBP4和視黃醇的比值卻顯著高于健康孕婦，并且血清RBP4水平與孕婦的胰島素抵抗狀態呈正相關；Graham等[11]研究發現血清RBP4水平與胰島素抵抗存在顯著的正相關性，在GDM復雜的發病機制中，RBP4可能參與了孕婦血糖的調節，與GDM的發生發展有關。測量RBP4濃度會有助于預測婦女發展為妊娠糖尿病的風險[12]。但其具體的作用有待于進一步的研究，結合GDM其他脂肪細胞因子的改變，對揭示脂肪因子與GDM的關系有一定幫助。王馳等[13]認為RBP4推動了對妊娠糖尿病、胰島素抵抗的研究，并已成為現今最受人關注的脂肪因子之一。張博等[14]認為作為一種脂肪細胞因子，RBP4與胰島素抵抗之間的密切關系是研究的重點和難點，明確其具體機制，將為糖脂代謝等相關問題展開新的思路，孫蕾芳等[15]研究顯示妊娠期糖尿病孕婦皮下脂肪組織RBP4水平高表達及血清RBP4高水平，可能是妊娠期糖尿病孕婦發生胰島素抵抗的機制之一，這些將對GDM發病機制的明確、GDM治療及后期隨訪與代謝綜合征的防治具有重要指導意義。

綜上所述，RBP4是體內一種重要的轉運蛋白，主要起著結合、轉運視黃醇的作用，本研究顯示，RBP4水平在妊娠期孕婦血清中顯著高于對照組，隨著妊娠的進展RBP4逐漸升高，新生兒臍血中含量最高，血清RBP4水平，可能對妊娠期糖尿病的篩查、預測及評估預后有一定意義，同時為GDM的診斷與治療提供新的理論依據。

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