甲氨蝶呤片對正常大鼠血液生化指標的影響*

熱比姑麗·伊斯拉木，尤力都孜·買買提，買合素提·卡德爾，伊力亞爾·斯瑪依，斯拉甫·艾白

（1.新疆醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院藥理教研室，新疆 烏魯木齊 830054； 2.新疆維吾爾醫(yī)方劑學實驗室，新疆烏魯木齊 830049； 3.新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所，新疆 烏魯木齊 830049）

銀屑病又名牛皮癬，是一種常見且易復發(fā)的慢性炎癥性皮膚病。甲氨蝶呤［1-2］為葉酸鹽類似物，自20世紀50年代始被用于治療惡性腫瘤，同時也成為治療免疫性疾病的廣譜藥物，包括類風濕關節(jié)炎和銀屑病。本研究中探討了甲氨蝶呤片對正常大鼠一般狀況、體重、臟器系數(shù)及血液生化指標的影響，便于該藥在試驗研究中合理使用。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與動物

儀器設備：7100型全自動生化分析儀（日立公司）；TGL-5-A型低速大容量離心機（上海安亭科學儀器廠）；BS110S型電子精密天平（北京賽多利斯天平有限公司）。

藥品與試劑：甲氨蝶呤片（上海信宜藥廠有限公司，國藥準字H31020644，批號為 20130403）；羧甲基纖維素鈉（CMC-Na，天津市光復精細化工研究所，批號為 20100409）；戊巴比妥鈉（Pentpbarbital Sodium Salt，Sigma 公司，批號為 20130115）。丙氨酸氨基轉移酶（ALT，批號為140113030），天門冬氨酸氨基轉移酶（AST，批 號 為 140213028），堿 性 磷 酸 酶 （ALP，批 號 為140313015），磷酸肌酸激酶（CK，批號為 142513011），總膽紅素（TBIL，批號為 140613025），總蛋白（TP，批號為 140813019），白蛋白（ALB，批號為 140913022），葡萄糖（GLU，批號為 141513033），尿素氮（BUN，批號為 141313032），肌酐（Cr，批號為 141013021），總 膽 固 醇 （TC，批 號 為 141613026），三 酰 甘 油 （TG，批 號 為141713021），以上試劑均由深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產。

試驗動物：健康 SD 大鼠，50只，雌（♀）、雄（♂）各半，SPF級，體重180～220 g，由新疆醫(yī)科大學實驗動物中心提供，質量合格證號XJMUSYDW2013000047，試驗動物生產許可證號SCXK（新）2011-0004。試驗動物使用許可證號 SYXK（新）2011-0006，新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所藥物安全性評價中心SPF級動物房提供。

1.2 試驗方法

將50只大鼠適應性飼養(yǎng)5 d，檢疫合格后，取40只大鼠，雌、雄各半，按體重隨機分為兩組，即溶劑對照組（A組）、甲氨蝶呤組（B組，給藥劑量為1.05 mg／kg，根據(jù)成人臨床擬用藥量、筆者前期已做的小鼠藥效學試驗用藥劑量，折算并確定大鼠劑量），各20只，雌、雄各半。A組給予 0.5%CMC-Na灌胃，B組給予甲氨蝶呤灌胃，均以每100 g體重1 mL體積給藥，每天1次，連續(xù)65 d。連續(xù)觀察大鼠的一般狀況，每周稱1次體重。第66天，用0.5%戊巴比妥鈉麻醉，腹主動脈采血，處死大鼠。用BS110S型電子精密天平稱大鼠腦、肝、心臟、肺臟、胸腺、脾臟、腎臟、腎上腺、睪丸、附睪、子宮、卵巢的質量，計算臟器系數(shù)。用TGL-5-A型低速大容量離心機離心血清，用7100型全自動生化分析儀，檢測大鼠血液生化指標。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結果

2.1 體重

與A組比較，第5周開始，B組個別大鼠出現(xiàn)輕微腹瀉。兩組大鼠體重變化比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。詳見表1。

表1 兩組大鼠體重變化比較（ ± s，g，n ＝10）

表1 兩組大鼠體重變化比較（ ± s，g，n ＝10）

時間第1周第2周第3周第4周第5周第6周第7周第8周第9周第10周雄性 雌性A組B組A組B組255.48 ± 8.78 292.40 ± 10.75 321.93 ± 15.82 386.75 ± 6.26 413.18 ± 10.05 438.82 ± 14.91 456.35 ± 17.57 476.47 ± 15.23 490.62 ± 20.35 513.92 ± 23.32 254.53 ± 17.95 278.67 ± 52.33 335.02 ± 52.31 377.07 ± 42.66 406.85 ± 42.02 438.53 ± 47.77 457.62 ± 53.17 462.68 ± 55.33 450.18 ± 50.57 440.85 ± 59.91 251.17 ± 5.15 258.63 ± 13.39 285.42 ± 41.15 280.03 ± 19.94 288.38 ± 21.03 296.05 ± 19.24 297.75 ± 26.48 303.30 ± 25.63 310.32 ± 20.86 313.05 ± 19.79 250.05 ± 12.35 258.60 ± 14.65 259.12 ± 36.05 287.33 ± 3.89 294.95 ± 13.56 300.02 ± 8.15 311.72 ± 10.82 314.12 ± 12.83 310.97 ± 17.41 306.67 ± 15.53

2.2 臟器系數(shù)

與A組比較，B組雄性大鼠心臟、肺臟、胸腺、腎臟系數(shù)升高（P＜0.05），雌性大鼠肝臟、脾臟、腎臟系數(shù)升高而胸腺、腦系數(shù)降低（P＜0.05）。藥物對其余臟器系數(shù)的影響不顯著（P＞0.05）。詳見表2。

2.3 血液生化指標

與A組比較，B組雄性大鼠血清TBIL升高、ALP降低（P＜0.05），雌性大鼠血清 TG 升高，AST，ALP，CK 降低（P＜0.01）。藥物對其余指標影響不顯著（P＞0.05）。詳見表 3。

表2 兩組大鼠臟器系數(shù)變化比較（ ± s，n＝10）

表2 兩組大鼠臟器系數(shù)變化比較（ ± s，n＝10）

注：與 A 組比較，*P ＜0.01，△P ＜0.05。表 3同。

臟器 雄性 雌性A組B組A組B組腦肝臟心臟肺臟胸腺脾臟腎臟腎上腺睪丸子宮附睪卵巢0.405 6 ±0.055 0 2.914 7 ±0.158 5 0.331 2 ±0.438 0 0.438 0 ±0.054 5 0.069 7 ±0.015 8 0.190 0 ±0.017 9 0.684 1 ±0.052 1 0.015 8 ±0.001 1 0.787 5 ±0.031 4 0.474 5 ± 0.080 9 3.420 5 ± 0.167 5 0.426 2 ± 0.094 8*0.586 7 ± 0.138 3*0.092 7 ± 0.008 8*0.756 3 ± 0.501 9*0.795 4 ± 0.173 8*0.019 8 ± 0.012 6 0.818 1 ± 0.114 6 0.716 1 ±0.015 3 2.927 3 ±0.215 3 0.380 9 ±0.035 7 0.525 4 ±0.069 7 0.161 0 ±0.028 8 0.280 9 ±0.032 3 0.687 6 ±0.053 5 0.032 0 ±0.008 1 0.627 3 ± 0.052 1*3.554 5 ± 0.600 7*0.400 4 ± 0.052 1 0.673 1 ± 0.160 6 0.068 5 ± 0.022 6△0.768 9 ± 0.367 5△0.729 0 ± 0.117 0 0.032 1 ± 0.007 6 0.259 5 ±0.055 60.229 1 ± 0.084 1 0.313 5 ±0.067 70.322 0 ± 0.066 5 0.061 1 ±0.016 50.053 2 ± 0.009 2

表3 兩組大鼠血液生化指標變化比較（ ± s，n＝10）

表3 兩組大鼠血液生化指標變化比較（ ± s，n＝10）

雄性 雌性指標A組B組A組B組55.2 ± 10.19△21.0 ± 3.68 22.0 ± 7.82△107.3 ± 43.37△0.30 ± 0.13 5.43 ± 0.45 16.42 ± 7.65 4.78 ± 1.16 1.13 ± 0.24 0.58 ± 0.34△25.60 ± 6.83 13.91 ± 4.17 AST（U ／L）ALT（U ／L）ALP（U ／L）CK（U ／L）TBIL（μmol／L）GLU（mmol／L）Cr（μmol／L）BUN（mmol／L）TC（mmol／L）TG（mmol／L）TP（g／L）ALB（g／L）89.5 ±30.41 33.0 ±13.70 71.5 ±17.16 282.4 ±147.51 0.16 ±0.07 4.26 ±1.02 8.21 ±5.96 4.28 ±0.59 1.05 ±0.17 0.59 ±0.20 27.67 ±6.25 15.32 ±3.29 104.2 ± 44.24 35.2 ±11.17 26.4 ±9.53△244.4 ± 147.00 0.30 ±0.22*4.00 ±0.90 11.04 ± 6.49 5.71 ±1.38 1.01 ±0.19 0.60 ±0.27 26.33 ± 8.29 14.39 ± 4.94 99.8 ±37.26 18.4 ±2.63 48.6 ±24.61 523.1 ± 212.20 0.30 ±0.15 4.70 ±0.46 7.99 ±4.24 5.33 ±0.60 1.27 ±0.23 0.43 ±0.08 31.42 ± 6.89 17.79 ± 3.31

3 討論

甲氨蝶呤為葉酸還原酶抑制劑［1］，可阻止表皮細胞增殖時DNA合成，抑制細胞核的有絲分裂。甲氨蝶呤可抑制體內被激活的淋巴細胞增殖和減弱CD8細胞的功能并抑制中性粒細胞的趨化性。甲氨蝶呤是全身治療銀屑病的標準用藥，但其治療量和中毒量很接近，長期用藥會引起肝臟廣泛性纖維化和肝硬化，故在應用時需注意安全，嚴格選擇適應證，有肝腎功能異常、妊娠或哺乳、嚴重貧血、白細胞減少、活動性消化道潰瘍、活動性感染性疾病、酗酒、免疫缺陷及其他嚴重疾病時不宜使用，治療前和治療期間均應定期檢查肝腎功能及血、尿常規(guī)。

甲氨蝶呤片是目前我國銀屑病試驗研究中仍選用的陽性對照藥物［3-4］。筆者曾通過建立銀屑病模型，探討了維吾爾醫(yī)經(jīng)典方劑的抗小鼠銀屑病作用，發(fā)現(xiàn)甲氨蝶呤片療效較好，且對小鼠無明顯不良反應［5］。本試驗結果表明，甲氨蝶呤能引起個別大鼠腹瀉，且明顯無性別差異；對大鼠腎臟、肝臟、心臟、肺臟、胸腺、脾臟、腦系數(shù)有一定影響；同時，能使雄性大鼠血清TBIL升高、ALP降低，雌性大鼠血清TG升高而AST，ALP，CK降低。故初步認為，對于甲氨蝶呤片，大鼠比小鼠敏感，能刺激大鼠胃腸道引起腹瀉，提示此反應具有動物種屬差異；對大鼠肝功能有一定影響，引起上述血液生化指標發(fā)生變化，這些不良反應均與甲氨蝶呤片臨床報道相似［6-12］。對大鼠腎臟、心臟、肺臟、胸腺、脾臟、腦系數(shù)的影響，需通過該臟器的組織病理學檢查作進一步判斷。

綜上所述，選擇甲氨蝶呤片用于試驗研究，必須慎重選擇動物種屬、用藥劑量、用藥時間等，否則可能會蓄積藥物毒性，引起動物死亡，導致試驗失敗。

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