蘭索拉唑有關物質測定方法的比較研究

陳 苑，宋粉云

（1.廣東省中醫院，廣東 廣州 510120； 2.廣東藥學院藥科學院，廣東 廣州 510006）

蘭索拉唑是繼奧美拉唑后研發的第2個質子泵抑制劑，臨床主要用于胃潰瘍、十二指腸潰瘍、反流性食管炎等[1－3]，具有抑酸作用強而持久、癥狀消失快、潰瘍愈合率高、生物利用度高和起效快等優點，臨床已廣泛使用[4－5]。但蘭索拉唑及其制劑非常不穩定，在生產、貯存過程中都有可能會產生氧化物、磺酰化物等雜質[6－7]。2010 年版《中國藥典·第一增補本》（以下簡稱 ChP2010）[8]、35 版《美國藥典》（以下簡稱 USP35）、7.0 版《歐洲藥典》（以下簡稱EP7.0）均收載了蘭索拉唑的有關物質檢測方法，但檢測方法及控制限度各不相同，特別是ChP2010并未對已知雜質進行控制，而且控制的限度也遠低于歐美藥典。針對國內蘭索拉唑腸溶片的質量標準落后于歐美相關標準的情況，筆者對蘭索拉唑腸溶片的有關物質檢測方法重新進行了比較研究，并建立了更科學可靠的有關物質測定方法。現報道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀，Waters 2489型紫外檢測器，Waters 2996型PDA檢測器，EMPOWER工作站；賽多利斯電子分析天平；乙腈、三乙胺為色譜純，磷酸為分析純，水為超純水；蘭索拉唑對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100709－201103，含量為 99.7%）；蘭索拉唑 EP雜質 A對照品（批號為130328，含量為 96.5%），蘭索拉唑 EP雜質 B對照品（批號為130322，含量為 99.5%），蘭索拉唑 EP雜質 C對照品（批號為103577－40－8，含量為 97.9%），蘭索拉唑 EP雜質 D 對照品（批號為110503，含量為97.0%），蘭索拉唑EP雜質 E對照品（加拿大 MOLCAN公司，批號為 120619，含量為98.9%），蘭索拉唑 EP雜質 F對照品（批號為 130411，含量為 98.8%），均為加拿大MOLCAN公司產品；蘭索拉唑（A廠，批號為130901；B廠，批號為140101）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：Waters Symmetry Shield C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）及 Kromasil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：ChP2010 為甲醇－水－三乙胺－磷酸[500∶400∶5∶1.5，用磷酸溶液（1→10)調節 pH至 7.3]；USP35為以水為流動相 A，乙腈－水－三乙胺（160∶40∶1）用磷酸調節 pH至 7.0為流動相 B，進行線性梯度洗脫，見表 1；EP7.0 為三乙胺（三乙胺 1 mL，加水 60 mL，用磷酸調節 pH 至 6.2）－乙腈（60 ∶40）；檢測波長均為 285 nm。分別量取空白溶液、對照品溶液、供試品溶液，用同一根色譜柱對3種流動相進行比較，3種流動相系統適用性試驗色譜圖見圖1。

結果表明，采用ChP2010流動相時，對照品溶液雜質D和E、雜質B和F不能有效分離；采用USP流動相時，對照品溶液中雜質 A，B，C，D，E，F與蘭索拉唑峰之間的分離情況很好，且供試品溶液中其他單一雜質分離情況也很好；采用EP7.0流動相時，對照品溶液中雜質 A，B，C，D，E，F與蘭索拉唑峰也能有效分離，但供試品溶液中除已知雜質以外的大多數雜質峰均在主峰保留時間以前出峰，集中在溶劑峰附近，其他單一雜質分離情況不好。由于ChP2010的流動相系統不能滿足系統適用性的要求，故僅對USP35及EP7.0作了進一步對比。

2.2 溶液制備

ChP2010：以甲醇－0.1 mol/L 氫氧化鈉（4 ∶1）為溶劑，將蘭索拉唑制成質量濃度為2 g/L的溶液，得供試品溶液；將蘭索拉唑對照品及雜質 A，C，D，E，F 對照品制成質量濃度為 2 μg/mL，雜質 B對照品制成質量濃度為8 μg/mL的混合溶液，得對照品溶液。以甲醇－0.1 mol/L 氫氧化鈉（4 ∶1）作為空白溶液。

表1 USP35中流動相梯度洗脫表

USP35：以甲醇－0.1 mol/L 氫氧化鈉（1 ∶3）為溶劑，將蘭索拉唑制成質量濃度為2 g/L的溶液，得供試品溶液；將蘭索拉唑對照品及雜質 A，C，D，E，F 對照品制成質量濃度為 2 μg/mL，雜質B對照品制成質量濃度為8 μg/mL的混合溶液，得對照品溶液。空白溶液同ChP2010。

EP7.0：以三乙胺溶液（取水 60 mL，加三乙胺1 mL，用磷酸調節 pH至 10.5）－乙腈（60∶40）為溶劑，將蘭索拉唑制成質量濃度為2 g/L的溶液，得供試品溶液；將蘭索拉唑對照品及雜質A，C，D，E，F 對照品制成質量濃度為 2 μg/mL，雜質 B 對照品制成質量濃度為8 μg/mL的混合溶液，得對照品溶液。以三乙胺（取水 60 mL，加三乙胺 1 mL，用磷酸調節 pH 至 10.5）－乙腈（60∶40）作為空白溶液。

2.3 方法學考察

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察、檢出限和定量限確定：精密量取2.2項下按USP35及EP7.0配制的對照品溶液，使用各自溶劑逐級稀釋，得到系列質量濃度的對照品溶液，分別采用2.1項下的USP35及EP7.0色譜條件進行測定。以進樣量 X（μg）對峰面積 Y作圖，繪制標準曲線，按信噪比(S/N＝3)計算檢出限(LOD)，10倍信噪比(S/N)計算定量限(LOQ)。結果見表2。可見，兩種方法的線性關系良好，USP35方法的靈敏度稍低于EP7.0方法。

表2 USP35和EP7.0方法的回歸方程、線性范圍、LOD和 LOQ比較(n＝7)

精密度試驗：精密量取按 USP35及 EP7.0配制的同一對照品溶液，分別采用USP35及EP7.0的色譜條件進行測定，連續進樣5次。結果兩種方法各色譜峰的保留時間波動均小于0.02 min，RSD 分別為 0.14% ～0.66%(n＝5)，0.05% ～0.40%(n＝5)，表明兩種方法儀器精密度良好。

重復性試驗：取同一批次的蘭索拉唑，照供試品溶液制備方法制備溶液，各6份，分別采用USP35及EP7.0的色譜條件進行測定。結果的 RSD＜2.0%(n＝6)，表明方法重復性好。

加樣回收試驗：稱取蘭索拉唑約0.25 g，精密稱定，共9份，分別置 10 mL容量瓶中；另精密稱取雜質 A，B，C，D，E，F對照品適量，加溶劑使溶解并稀釋使成每1 mL中約含雜質B 0.1 mg，雜質 A，C，D，E，F 各約 0.02 mg的對照品溶液。分別精密量取 0.8，1.0，1.2 mL各3份，分別置上述10 mL容量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液，精密量取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，并計算回收率。結果見表3。

表3 USP35和EP7.0方法加樣回收試驗結果（n＝3）

2.4 樣品含量測定

取蘭索拉唑，在擬訂色譜條件下按 ChP2010，USP35，EP7.0方法測定樣品的有關物質。結果見表4。

3 討論

對系統適用性試驗及樣品有關物質測定結果進行比較，可見ChP2010的流動相不能將雜質有效分離，而EP7.0的流動相雖能將雜質 A，B，C，D，E，F分開，但由于其他雜質的出峰時間均集中在主峰出峰之前，會干擾到已知雜質的檢出，檢出雜質數量明顯少于USP35的流動相檢出的雜質數量。

表4 樣品有關物質測定結果比較

本試驗結果顯示，使用USP35收載的溶劑時，雜質C及雜質E的回收率較低，分別為81%和76%；而使用EP7.0收載的溶劑時，雜質C及雜質E的回收率能達到98%～102%的要求，樣品中雜質的檢出率更高。ChP2010僅規定了單個雜質不得過0.5%，總雜質不得過2.0%，限度值遠低于歐美藥典；歐美藥典僅雜質B限度為 0.4%，其余雜質均控制限度為 0.1%，總雜質限度為0.6%。由破壞試驗可知，氧化破壞主要產生雜質 A，B，D，高溫破壞主要產生雜質C和E，僅雜質 F未檢出，故對雜質 A，B，C，D，E進行單獨控制是很有必要的。

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