離子色譜法測定厄貝沙坦膠囊中疊氮化物的殘留量

林偉豪 ，李 東 ，吳嬋娟

（1.廣東省深圳市坪山新區人民醫院藥劑科，廣東 深圳 518118； 2.暨南大學第二臨床醫學院·深圳市人民醫院臨床藥學研究室，廣東 深圳 518020）

疊氮化鈉又稱疊氮鈉，可經呼吸道消化道和皮膚迅速吸收，屬于劇毒物質，與氰化物類似。體外研究表明，其主要抑制細胞色素氧化酶和其他酶，并能使體內氧合血紅蛋白形成受阻，具有黏膜刺激、降壓、中樞神經損害及強致突變作用。疊氮化鈉是厄貝沙坦合成工藝最后一步中使用的物料[1]，使用量比較大，在精制過程中可能無法完全除去而殘留。因疊氮化物毒性較大，美國藥典（USP35－NF30）、歐洲藥典（EP8.0）均對厄貝沙坦中疊氮化物的限度作了嚴格的規定，規定不得超過10 ppm。厄貝沙坦用于高血壓的治療，在醫院應用量大[2]。筆者采用離子色譜法對厄貝沙坦中疊氮化物的殘留量進行測定，以達到控制厄貝沙坦膠囊中疊氮化物殘留量的目的。

1 儀器與試藥

Diones ICS 2000離子色譜儀（美國戴安公司），包括 AS40 Automated Sampler自動進樣器、電導檢測器、在線淋洗液發生器（美國戴安公司）。疊氮化鈉對照品（美國 Aldrich，含量99.5%，水分0.14%）；厄貝沙坦膠囊（珠海潤都民彤制藥有限公司，規格為每粒 0.15 g，批號為 20090601，20090602，20090603）；去離子水（Milli－Q超純水發生器）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：保護柱為 IonPac AG11－HC 柱（50 mm ×4 mm），分析柱為IonPac AS11－HC離子交換色譜柱（250 mm×4 mm）；淋洗液：KOH溶液（內置淋洗液發生器），梯度洗脫，見表1；柱溫：30℃；進樣量：25 μL。

表1 梯度洗脫條件

2.2 溶液配制

精密稱取疊氮化鈉對照品適量，加水溶解并定量稀釋制成每1 mL中含疊氮化物1 μg的溶液，作為對照品溶液。取厄貝沙坦膠囊（4粒）內容物研細，精密稱取相當于厄貝沙坦 0.5 g的內容物，置容量瓶中，加水5 mL，用力振搖使厄貝沙坦分散均勻，超聲15 min，0.45 μm的微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液及去離子水各25 μL，按擬訂色譜條件進樣，色譜圖見圖1。在疊氮化物對照品色譜峰處，供試品溶液與溶劑中其他成分對疊氮化物峰無干擾。

圖1 離子色譜圖

線性關系考察：分別精密稱取疊氮化物對照品 0.008 47，0.010 91，0.012 14 g，置 100 mL 容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液A，B，C。精密量取對照品貯備液A 1 mL置100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，即得質量濃度為0.842 μg /mL 的線性對照品溶液；精密量取對照品貯備液 B 2，1，1 mL，分別置 10，100，200 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得質量濃度分別為 2.168，1.084，0.542 μg /mL 的線性對照品溶液；精密量取對照品貯備液 C 5，1 mL，分別置 50，100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得質量濃度分別為1.508，1.206 μg/mL的線性對照品溶液。分別精密量取上述線性對照品溶液25 μL注入離子色譜儀，記錄色譜圖。以疊氮化物峰面積為（Y）對質量濃度（X）進行線性回歸，得回歸方程 Y＝11.175 X＋0.036 7， r＝0.999 6（n＝6）。結果表明，疊氮化物質量濃度在0.542 ～2.168 μg/mL 與峰面積呈良好的線性關系。

加樣回收試驗：精密稱取厄貝沙坦(批號20090601)內容物9份，分別精密加入高、中、低3個水平濃度疊氮化鈉對照品溶液5 mL，按供試品測定方法測定含量，計算回收率。結果見表2。

表2 疊氮化物加樣回收試驗結果（n＝9）

精密度試驗：按2.2項下操作配制對照品溶液6份，連續進樣6次，記錄色譜圖。結果疊氮化物峰面積的 RSD為1.0%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取2.2項下的同一供試品溶液，別在放置0，2，4，6，8，10，12 h時進樣檢測。結果疊氮化物峰面積的 RSD 為1.2%（n＝7），表明供試品溶液在 12 h內穩定。

檢測限及定量限試驗：取2.2項下的對照品溶液，加去離子水逐級稀釋，分別精密量取25 μL注入離子色譜儀，記錄色譜圖。結果表明，疊氮化物的檢測限為 0.1 μg /mL（2.5 ng），定量限為0.5 μg /mL（12.5 ng）。2.4 樣品含量測定

取 3 批樣品（批號為 20090601，20090602，20090603），按外標法以峰面積計算厄貝沙坦膠囊中疊氮化物的殘留量。結果均未檢出疊氮化物。

3 討論

文獻[3－5]采用Dionex IonPac AS18分析柱來測定疊氮化物。本方法采用 IonPac AS11－HC，且采用了不同濃度的 OH－，對疊氮化物測定方法作了補充，證明可以通過不同類型的離子色譜柱及淋洗液濃度測定疊氮化物的殘留量；且按照本方法測得的檢測線/定量限低于上述方法，能準確地對疊氮化物進行痕量分析。

本方法中采用戴安公司商品化的在線淋洗液自動發生器[6]，其優點是只用水和鼠標控制就能精確而在線地產生無污染（CO2）的所需濃度的淋洗液，并得到非常好的色譜重現性。另外，本方法所用淋洗液（25 μL，18 mmol/L）濃度低于美國藥典（USP35－NF30）與歐洲藥典（EP8.0）的規定（20 μL，100 mmol/L），在檢測過程中大大降低了背景噪音，基線更平穩，提高了檢測的靈敏度。

歐美藥典均對厄貝沙坦中疊氮化物的限度均作了嚴格規定，不大于 10 ppm，按本方法測得的定量限為 0.5 mg /L（12.5 ng），遠低于限度濃度，能夠準確定量。經過方法學驗證，本方法專屬性強，線性良好，回收率、重復性、溶液穩定性均良好，靈敏度高，前處理及操作簡單，可測定厄貝沙坦膠囊中疊氮化物殘留量。

參考文獻：

[1]岑均達，馬 霞.厄貝沙坦的合成[J].中國醫藥工業雜志，2007，38（3）：239.

[2]余德松，祝 紅，胡國仕.2010年至2012年醫院口服抗高血壓藥利用分析[J].中國藥業，2014，23（3）：61－63.

[3]姚超英.離子色譜法測定沙坦類藥物中的疊氮酸根[J].浙江大學學報：理學版，2008，35（3）：305－310.

[4]李美君，姚先珍，汪秀林，等.離子色譜法測定厄貝沙坦中疊氮化物[J].中國醫藥導報，2012，9（32）：118－119.

[5]黃巧巧，何佳佳，鐘乃飛，等.柱切換離子色譜法測定厄貝沙坦中的疊氮根離子[J].藥物分析雜志，2013，33（8）：1 431－1 434.

[6]牟世芳，劉克納，丁曉靜.離子色譜方法及應用[M].北京：化學工業出版社，2010：57.