高效液相色譜法測定鹽酸度洛西汀腸溶膠囊中α－萘酚雜質含量

周宏艷 ，羅 斌 ，王 菁

（1.浙江眾益制藥股份有限公司，浙江 麗水 323000； 2.溫州醫科大學，浙江 溫州 325000；3.山東省臨沂市平邑縣食品藥品監督管理局，山東 臨沂 273300）

鹽酸度洛西?。╠uloxetine hydrochloride）是美國Eli Lilly公司研究開發的新型口服抗抑郁癥藥[1－2]，具有獨特的作用機制和藥理特性，對5－羥色胺（5－HT）和去甲腎上腺素（NE）具有雙重再攝取抑制作用[3]，在發揮抗抑郁作用的同時，還能改善抑郁癥繼發的軀體癥狀，減輕軀體疼痛癥狀[4－5]。該藥對抑郁癥、糖尿病周圍神經病變所致的疼痛以及壓力性尿失禁[6]等均有一定的療效。但鹽酸度洛西汀中所含雜質α－萘酚具有生理毒性，吞咽或經皮吸收都能引起中毒，對腎臟可引起出血性腎炎，誤服后可出現嘔吐、腹瀉、腹痛、痙攣、貧血、虛脫等癥狀。因此，有必要對鹽酸度洛西汀腸溶膠囊中所含特定雜質α－萘酚進行限度控制。本試驗中建立了高效液相色譜(HPLC)法測定鹽酸度洛西汀腸溶膠囊中α－萘酚雜質的含量，該方法專屬性強、耐用、準確，能有效控制產品質量。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀，包括VWD檢測器、G1311C自動調配泵、G1329B標準自動進樣器、G1316A可調柱溫恒溫箱、Agilent色譜化學工作站等；BT25S型電子分析天平（賽多利斯科學儀器有限公司）；KQ－500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。鹽酸度洛西汀對照品（批號為Y0001453），鹽酸度洛西汀系統適用性對照品（批號為Y0001454），均來自歐洲藥品質量管理局；α－萘酚對照品（批號為 43.04.09.01，英國政府化學實驗室標準集團）；鹽酸度洛西汀腸溶膠囊（批號為 120801～120803，A公司市售品）；鹽酸度洛西汀腸溶膠囊對照品（商品名欣百達，批號為 A858915D，美國 Eli Lilly公司）；乙腈（色譜級，美國Tedia有限公司），正丙醇（色譜級，國藥集團化學試劑有限公司）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：Agilent C8柱(150 mm × 4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈－正丙醇－緩沖液（配制2.9 g/L磷酸溶液，用氫氧化鈉溶液調節 pH至2.5，取該溶液1L，加入 10.3 g一水己烷磺酸鈉，搖勻，使完全溶解，13 ∶17 ∶70）；流速：1.0 mL /min，檢測波長：230 nm；柱溫：40℃；進樣量：10 μL。在擬訂色譜條件下，度洛西汀與雜質 F的分離度為2.32，拖尾因子為1.14，雜質C與α－萘酚的分離度為2.79，度洛西汀理論板數為8 214，表明系統適用性良好。色譜圖見圖1A。

2.2 溶液制備

精密稱取鹽酸度洛西汀對照品適量，用乙腈－水（25∶75）配制成0.2 μg/mL鹽酸度洛西汀溶液，作為對照品溶液。取本品細粉適量（約相當于度洛西汀 10 mg），精密稱定，置50 mL容量瓶中，加上述溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續濾液作為供試品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：取制劑工藝所用輔料適量，用乙腈－水（25∶75）稀釋至一定濃度；取鹽酸度洛西汀系統適用性對照品適量，用上述溶劑配制成0.2 g/L的溶液；取α－萘酚對照品適量，用上述溶劑配制成 0.4 μg/mL的溶液。取配制溶液各 10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1B和圖1C。結果表明，輔料不干擾α－萘酚的測定，且與其他雜質峰分離效果良好。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：取 α－萘酚對照品適量（約16 mg），置20 mL容量瓶中，加乙腈－水（25∶75）溶解并稀釋至刻度、搖勻；精密量取1 mL，置100 mL容量瓶中，用上述溶劑稀釋至刻度、搖勻。分別精密量取該溶液 2，5，10，15，20 mL，置 200 mL 容量瓶中，用上述溶劑稀釋至刻度、搖勻，制成系列溶液。在上述色譜條件下，精密量取以上溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并以α－萘酚進樣量（W）為橫坐標、峰面積（A）為縱坐標進行線性回歸，回歸方程為 A＝14 593.34 W＋0.116 6，r＝0.997 6（n＝5）。結果表明，α－萘酚進樣量在 8×10－4～8×10－3μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

檢測限與定量限試驗：取α－萘酚適量，用乙腈－水（25∶75）配制成適宜質量濃度，分別精密量取10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并逐步稀釋測定，使信噪比約為10∶1時作為定量限，信噪比約為3∶1時作為檢測限。結果表明，本法的定量限為2 ng，檢測限為 0.2 ng。

重復性試驗：精密稱取α－萘酚對照品及混合輔料6份，每份約20 mg，用乙腈－水（25∶75）配制成每1 mL溶液中含 α－萘酚為0.4 μg/mL的供試品溶液。取 α－萘酚對照品，用上述溶劑并稀釋制成質量濃度為 0.4 μg/mL 的溶液。取上述溶液各 10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果6份樣品含量的 RSD為0.64% （n＝6），表明方法重復性良好。

中間精密度試驗：按擬訂方法配制供試品及對照品溶液，不同人員在另一色譜儀器上進樣測定，每臺儀器每人各測定6份，合并計算12份樣品含量數據。結果含量的 RSD為0.48%（n＝12），表明方法的中間精密度均較好。

回收試驗：分別取 α－萘酚對照品約 16，20，24 mg各 3份，精密稱定后置100 mL量瓶中，按處方量加入空白輔料，加乙腈－水（25∶75）溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取該溶液2 mL，置10 mL容量瓶中，加上述溶劑稀釋至刻度，搖勻；精密量取該溶液1 mL，置100 mL容量瓶中，加上述溶劑稀釋至刻度，搖勻過濾即得供試品溶液。按擬訂色譜條件進樣，記錄色譜圖。結果見表1。

表1 α－萘酚回收試驗結果(n＝9)

耐用性試驗：將色譜條件中的參數作適度變化，如采用不同色譜柱、調節不同柱溫、不同流速及供試品不同過濾次數等，考察對測定結果的影響情況。在擬訂色譜條件下，由圖1可見，度洛西汀與雜質F的分離度均大于2，度洛西汀的拖尾因子均小于1.5，雜質C與α－萘酚的分離度均大于2，度洛西汀理論板數均大于5 000，測定結果基本一致，可見方法的耐用性良好。

2.4 樣品有關物質檢查

取對照品溶液10 μL注入液相色譜儀，對照品溶液中度洛西汀峰信噪比應不小于20∶1；再精密量取供試品溶液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖至度洛西汀主峰保留時間的2倍，α－萘酚含量用峰面積乘校正因子計算，其他雜質含量按面積歸一化法計算。結果3批樣品及市售欣百達（批號為 A858915D）中α－萘酚均小于0.2%，總雜質均小于0.6%。結果見表2。

表2 鹽酸度洛西汀腸溶膠囊有關物質測定結果

3 討論

文獻[7－11]報道了HPLC法測定鹽酸度洛西汀腸溶片或腸溶膠囊中鹽酸度洛西汀含量及有關物質，但均未考察鹽酸度洛西汀中特定雜質α－萘酚的含量。由于α－萘酚為特殊毒性雜質，建議對鹽酸度洛西汀腸溶膠囊中所含特定雜質α－萘酚進行限度控制。抑郁癥給許多患者和家庭帶來嚴重危害，鹽酸度洛西汀腸溶膠囊具有較好的治療效果。建議鹽酸度洛西汀腸溶膠囊質量標準盡快對α－萘酚雜質進行控制，保證長期用藥的安全性。

參考美國藥典36.0（USP36）鹽酸度洛西汀檢測方法，建立了測定鹽酸度洛西汀腸溶膠囊中α－萘酚雜質的含量的HPLC法，方法學考察表明，該法專屬性強、耐用、準確，能有效檢測出α－萘酚的含量。

有關物質檢查結果顯示，該法能有效檢測出鹽酸度洛西汀腸溶膠囊中α－萘酚及總雜質的含量，可效控制產品質量。

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