正交試驗法優選姜黃飲片切制工藝*

楊海玲 ，許丹妮 ，吳尤嬌，黃華艷，徐 信

(1.廣西中醫藥大學，廣西 南寧 530001； 2.廣西民族師范學院，廣西 崇左 532200）

姜黃為姜科植物姜黃 Curcuma longa L.的干燥根莖，具有破血通經、行氣止痛的功效，用于治療心腹痞滿脹痛、婦女血癖經閉等證[1]。姜黃炮制方法在歷代醫藥專著、《中國藥典》及各省炮制規范均有記載，但均未規定具體的切制工藝參數，且炮制工藝不統一[2]。姜黃中主含揮發油和姜黃素[3]，其中姜黃素可抗氧化、抗炎、抗腫瘤[4]，揮發油則可抗菌、抗病毒等[5]。因此，本試驗中采用正交試驗設計法優選姜黃飲片最佳切制工藝，以期為姜黃飲片炮制規范化研究及質量標準的制訂提供科學依據。

1 儀器與試藥

LC－1100AT型高效液相色譜分析儀（安捷倫公司，紫外檢測器）。姜黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110823～200603）；甲醇、乙腈均為色譜純；純凈水等；姜黃購于廣西玉林藥材市場，經廣西中醫學院韋松基教授鑒定為姜科植物姜黃 Curcuma longa L.的干燥根莖。

2 方法與結果

2.1 樣品制備

將姜黃藥材凈選除雜后，等量稱取9份樣品，每份120 g，略泡30 min，按 L9（34）正交試驗表工藝進行燜潤、切片，放入烘箱中進行干燥。飲片編號為1～9。

2.2 姜黃素及揮發油含量測定

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Shimadzu VP－ODS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)；流動相:乙腈－0.1% 冰醋酸溶液(48 ∶52)；流速 1.0 mL /min；紫外檢測波長:430 nm；柱溫35℃。擬訂色譜條件下，姜黃素分離較好，相鄰峰間分離度均大于1.5，理論板數按姜黃素峰計算應不低于10 000。色譜圖見圖1。

2.2.2 溶液制備

精密稱取姜黃素對照品0.003 0 g，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，即得對照品溶液。分別精密稱取各樣品粉末（80 目）0.2 g，精密加入甲醇 25 mL ，稱重，回流提取 30 min，放冷，補足減失的質量，過濾，取濾液適量，離心冷藏備用，即得供試品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.2.3 線性關系考察

分別精密吸取姜黃素對照品溶液 2，4，6，8，10 μL，按擬訂色譜條件測定，以峰面積(Y）對姜黃素對照品進樣量(X，μg)進行線性回歸，得回歸方程 Y＝13 261.583 3 X＋62.3，r＝0.999 8(n＝5)。結果表明，姜黃素進樣量在 0.24 ～ 1.20 μg 范圍內與峰面積線性關系良好。

2.2.4 含量測定

取上述供試品溶液分別進樣10 μL，按2.2.1項下條件測定姜黃素含量。分別稱取姜黃各樣品粉末25 g（24目），置2 000 mL的圓底燒瓶中，加入 800 mL的蒸餾水和數粒沸石，按 2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅩD揮發油測定法測定揮發油。結果見表 1。

表1 不同樣品中姜黃素與揮發油含量測定結果(n＝3)

2.3 正交試驗

正交表選擇及因素水平設計：根據預試驗結果，燜潤時間(A)、切片厚度(B)、干燥溫度(C)為姜黃切制的主要影響因素，干燥時間(D)為次要因素，每個因素取3個水平，選用 L9（34）正交試驗表進行試驗設計，見表2。

表2 姜黃飲片切制正交試驗因素水平

表3 姜黃飲片切制工藝正交試驗設計及結果

表4 方差分析結果

方差分析：結果見表4。姜黃切制工藝的影響因素為C(干燥溫度)＞A（燜潤時間）＞B（切片厚度）＞D（干燥時間），且干燥溫度與燜潤時間對揮發油與姜黃素含量有顯著性影響。根據直觀分析及生產實際情況，取重要因素較高的組合，得到較佳工藝條件為 A1B2C2D1，即燜潤 8 h，厚度 2 mm，35 ℃ 烘 7 h。

2.4 驗證試驗

按優選的切制工藝制備2份樣品，按含量測定項下方法進行測定。結果見表5。2份樣品中姜黃素與揮發油的含量均較高，與正交試驗結果吻合，說明本試驗最佳切制工藝可行。

表5 姜黃飲片切制工藝驗證試驗結果(n＝3)

3 討論

本試驗中對姜黃的切制工藝進行優選，確立最佳工藝為燜潤8 h，厚度2 mm，35℃烘7 h。姜黃傳統的炮制方法大多采用泡法處理軟化藥材，由于長時間的浸泡在水中，容易出現嚴重的“下色”現象，易造成藥物中的成分流失于水中，造成質量下降。本研究中進行了改進，使其在適量水中略泡較短時間約（30 min），再用先前泡藥材時剩余水及適量清水用潤法進行軟化，使藥材慢慢的吸收水分，這樣既符合“少泡多潤”的水處理原則，又減少了有效成分的損失。由表1可見，姜黃素與揮發油的含量均較《中國藥典》的規定高，可佐證。由驗證試驗結果可見，本工藝簡便、穩定、可行，可為進一步研究姜黃的質量標準提供科學依據。因此，該方法可進一步在生產中推廣，既可大大地提高生產效率，又可保證飲片質量保證臨床療效。

姜黃是藥食兩用的植物資源，同時也是主含芳香揮發性成分的藥材。由本試驗結果可見，影響姜黃切制工藝的主要因素有干燥溫度及燜潤時間，對其主要成分揮發油與姜黃素含量的影響最顯著。分析原因可能是飲片切片過薄，表面積增大，干燥時溫度過高及時間過長均容易造成揮發油、姜黃素等揮發性成分散失；反之切片太厚，則有效成分又不易煎出。因此在切制加工時，一方面應注意在切制前應將姜黃按個頭大小分檔進行燜潤，以保證燜潤程度的均勻性，同時依“少泡多潤”原則以減少有效成分的損失；另一方面應注意切片厚度及干燥溫度與時間對其有效成分的影響。

本試驗證明，切制的厚度、干燥溫度和時間影響其中的姜黃素與揮發油含量。規范姜黃切片工藝，控制切片厚度、干燥溫度時間等工藝參數，可以提高飲片質量。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010:247.

[2]楊海玲，覃 葆，徐 信，等.姜黃炮制歷史沿革研究[J].廣西中醫學院學報，2012:15（1）：59－60.

[3]劉康蓮，聶開敏，楊再波，等.姜黃揮發油的提取工藝及抗氧化活性研究[J].安徽農業科學，2008，36（20）：8 643－8 644.

[4]趙 鵬，蔡 輝.姜黃素抗血管新生作用研究進展[J].醫學臨床研究，2011，28（7）：1 407－1 409.

[5]劉紅星，陳福北，黃初升.廣西姜黃揮發油兩種提取方法的比較研究[J].廣西植物，2007，27（5）：796－800.