血清蛋白電泳的原理方法及臨床意義

摘要：血清蛋白電泳是臨床蛋白檢測最常用的一項檢測項目，目前多采用自動化電泳分析系統進行快速檢測，血漿蛋白異常可表現為水腫、貧血、蛋白尿、骨關節障礙、易感染性、血沉增速等。對營養障礙、腎病綜合征、慢性肝病、骨髓瘤、急性和慢性炎癥、自身免疫性疾病、結締組織病、淋巴增殖性疾病的診斷和評價有重要意義。

關鍵詞：血清蛋白電泳；方法；臨床意義

【中圖分類號】R4 【文獻標識碼】A 【文章編號】1672-8602（2015）03-0006-02

血清蛋白電泳是臨床蛋白檢測最常用的一項檢測項目，目前多采用自動化電泳分析系統進行快速檢測，使用醋酸纖維素薄膜片或瓊脂糖凝膠片，電泳能產生5條或6條區帶，即前白蛋白、白蛋白、α1、α2、β和γ球蛋白。由于醋酸纖維素薄膜電泳可達到全自動化程度，且價格便宜，所以在國內臨床更為常用。

1 血清蛋白電泳（SPEP）原理

血清是數種蛋白質的混合液，都有它特有的等電點。蛋白質在等電點時呈電中性狀態，它的分子所帶正負電荷量相等[1]。如將蛋白質置于比其等電點較高的緩沖液中，它們都游離成帶負電荷的質點，在電場中均會向正極泳動。

2 血清蛋白電泳（SPEP）

2.1 測定方法 乙酸纖維素膜法或瓊脂糖凝膠膜法。應同時測定總蛋白（化學法）計算絕對值，血液稀釋或濃縮時絕對值相應變化，相對值不變。

2.2 標本準備 靜脈血3ml，不抗凝或用紅帽真空管、黃帽真空管或橘帽真空管采血3ml或5ml，或同血清總蛋白測定共用一份標本。

2.3 操作 打開電源。將點樣器置于平整實驗桌表面，孔號位于加樣孔上方按序排列，每孔加10μl樣品，把點樣器放于濕盒內，齒梳向上放置，讓樣品于齒梳中擴散5min，開電泳蓋，并升起電極和點樣支架。.菜單上選擇【protein】電泳程序。取出含緩沖液的海綿條帶，并將條帶塑料襯墊物的背緊貼電極掛置。取出凝膠，用1張薄濾紙輕輕地吸去凝膠表面多余的液體，然后快速移去濾紙。加120～200μl蒸溜水或去離子水于電泳儀的平臺框面的下1/3處。將凝膠片底邊緊靠框架底邊，凝膠片背對框架。彎曲凝膠片將其置于電泳框面上，確定凝膠背面的氣泡被完全趕走。放下2個支架。這時，含緩沖液的條帶沒有接觸凝膠。不要強迫支架完全下降。從濕盒中取出點樣器。去除齒梳下的保護支架。7和15個樣品分析的點樣器置于支架6號位。30個樣品分析的點樣器則可分別置于3號和9號。蓋上電泳蓋。按鍵盤左側【start】鍵開始。打開電泳蓋，取出點樣板并丟棄，升起2個支架，移去緩沖條帶并丟棄。取出已烘干的膠片作進一步處理。用濕紙巾擦拭電極。打開凝膠支架，將膠片面向操作者置于支架上，確定膠片被完好地固定于支架上。將支架置于染色空間。選擇【protein】染色程序并按右側鍵盤【start】鍵開始。在染色、脫色和烘干過程中，染色空間始終被鎖定。取出凝膠支架，打開支架并取出烘干的膠片。用光密度儀在570nm處或黃色濾光片進行掃描。

3 臨床意義

3.1 白蛋白 白蛋白僅由肝細胞制造，體內40%的白蛋白存在于體液中，其分布于組織內和組織液內。血管內外白蛋白經常交換而處于動態平衡中，正常人每天由肝細胞粗面內質網制造的白蛋白為120～200mg/kg，相當11～15g/d。肝合成白蛋白屬限速性，僅在體內過量白蛋白丟失或破壞情況下，合成速率才會增加。粗面內質網合成白蛋白，由肝細胞分泌入肝竇而入血。肝細胞損傷可發生白蛋白合成、細胞內運輸和釋放障礙，引起血中白蛋白減少[2]。肝臟也能分解白蛋白，肝損傷時分解代謝受影響較少，即使嚴重肝功能障礙分解代謝速率仍能保持相對恒定。故若蛋白質攝入和吸收正常、尿和其它方面無異常丟失，血清白蛋白降低應視為肝損傷合成減少所致。急性肝壞死時，肝臟合成白蛋白能力喪失或明顯降低，由于t1/2約為30天，故血清白蛋白降低常于1～2周后才能逐漸顯現出來。急性輕型肝炎患者白蛋白降低較少，最多為中度減少，但病程長的較重的肝炎白蛋白可明顯降低，且減少程度與疾病嚴重性成正比。故白蛋白濃度可做為判定肝炎嚴重程度的依據。所以急性肝炎時白蛋白持續下降或不恢復是病情惡化的指征。白蛋白減少是肝硬化的特征，在代謝良好者即使已出現高γ-球蛋白血癥，白蛋白減少也往往較輕；當肝硬化已失代償血清白蛋白則顯著減少。血清白蛋白濃度是肝硬化是否已失代償的指標。當肝硬化患者血清白蛋白減少到30g/L以下時，大多數出現或將出現腹水，此時給予患者合理內科治療，白蛋白回升，提示患者短期預后尚好；如不能回升，或進一步減至20g/L以下時，、則預后極險。有報告肝硬化患者白蛋白在45%以下時，其3年生存率不到45%以上者的半數。由此可見，測定血清白蛋白濃度，可作為慢性肝病患者預后的良好指標。

3.2 α1球蛋白 在肝臟炎癥性病變時，α1球蛋白增加，和白蛋白呈負相關，但在肝細胞破壞極為嚴重的肝壞死和肝硬化時則減少，與白蛋白呈正相關。在致命的肝功能衰竭時，α1球蛋白可降到很低水平。肝病時如al球蛋白增加提示病情較輕，α2球蛋白減少常標志病情重篤。因此，測定α1球蛋白對判斷肝炎患者的嚴重和預后有參考價值。此外，在肝癌時α1球蛋白顯著上升。

3.3 α2球蛋白：與α1球蛋白一樣也可以反映肝炎病變的嚴重程度。在病毒性肝炎初期（起病后1周以內），多數保持正常值，以后逐漸增加。在亞急性肝炎和急性肝壞死時常減少。有人認為在重癥肝炎時，如α2球蛋白減少至4g/L以下，提示患者將要或已經出現肝昏迷。急性血吸蟲病、肝膿腫等炎癥性疾患和肝癌時，α2球蛋白往往增加。α2球蛋白含脂蛋白，膽汁郁積時，特別是慢性病例，血脂質增加時，α2球蛋白升高。失代償期肝硬化時，α2球蛋白多半降低。

3.4 β球蛋白：β球蛋白也含有脂蛋白，故在膽汁郁積性肝病時多增高。且與α2球蛋白升高相平行，這有助于鑒別膽汁性和非膽汁性肝硬化。在肝細胞嚴重損害時，由于肝臟合成減少，β球蛋白降低，個別可降到6%以下，這對預后判斷可有幫助。重癥肝炎頻死期經治療轉為壞死后性肝硬化者，α1、β球蛋白的上升往往比白蛋白增加為快。

3.5 γ球蛋白 幾乎在所有肝膽疾患時都增高。急性血吸蟲病時γ球蛋白升高的陽性率為100%，系與網狀內皮系統反應有關。病毒性肝炎時γ球蛋白中度增高，在連續追蹤檢查中，如γ球蛋白趨向正常，常預示病情好轉，一般在2～3個月內可望恢復；如果γ球蛋白持續增高而無其他原因可解釋時，往往意味著病情轉歸不良，已轉為慢性肝炎和肝硬化。重癥肝炎時γ球蛋白可明顯升高，甚至可高達2.5g/L～30g/L。如γ球蛋白增至正常的2倍以上，轉氨酶在正常5倍以上，持續10周無改善者，幾可肯定為亞急性肝炎。如不治療，預后險惡[3]。慢性肝炎時，γ球蛋白的平均值隨病情而異。據報導，在慢性活動性肝炎平均為26.4g/L，慢性遷延性肝炎為21.4g/L，兩者之間有顯著性差異。肝硬化者γ球蛋白普遍增高，尤其在晚期或進行性失代償性肝硬化，γ球蛋白可極度增高。故血清γ球蛋白的增加除提示肝臟病患者病情沉重外，對病人的預后判斷尚有指導意義。

參考文獻

[1] 姜儻. 尿液蛋白與腎臟疾病[J].中化檢驗醫學雜志，2002，（05）：312-313.

[2] 毛元英，胡雪飛. 血清蛋白電泳對肝病的診斷價值[J].檢驗醫學與臨床，2009，（02）：116-117.

[3] 宋森濤，李峰，王若燕. 血清蛋白電泳、免疫球蛋白及其輕鏈測定對肝病患者的臨床意義[J].中國肝臟病雜志（電子版），2012，（04）：6-8.