三種豬瘟抗體檢測方法比較試驗研究

摘 要：為了選擇一種方便、準確、經濟的豬瘟檢測方法，本文通過對豬瘟正向間接血凝法、Dot-ELISA法和免疫金標試紙檢測法進行比較試驗，其結果依次是：陽性率為90 %、86.7 %和80 %，三者試驗結果基本相同，經方差分析，差異不顯著（P>0.05），檢 測 實驗結果可靠。豬瘟抗體金標試紙檢測法具有結果直觀、操作方便、反映時間短等優勢，非常適合我市小型養豬場和散養戶，可以及時檢測豬瘟免疫狀況，制定適合本場（戶）的個性化免疫程序，預防豬瘟的發生。

關鍵詞：豬瘟；抗體；檢測方法

武威市是一個農業城市，近幾年畜牧業發展比較迅速，截至到2013年，全市生豬飼養量達230.21萬頭、出欄量達121.19萬頭，但由于傳統養殖方式的影響，我市主要以小型養殖場和散養戶為主。豬瘟的控制主要依靠疫苗免疫預防，合理的免疫程序應建立在正確的免疫檢測基礎上。豬瘟疫苗免疫效果的好壞直接影響到我市養豬業的經濟效益和養豬業的健康持續發展。為了養殖場（戶）隨時掌握豬瘟抗體水平，制定適合本場（戶）的個性化免疫程序，使抗體效價始終保持在有效水平以上，筆者進行了三種豬瘟抗體檢測方法對比試驗，選擇一種經濟實用、準確方便的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 試劑

⑴ 豬瘟正向間接血凝抗原試劑盒，包括（豬瘟正向血凝抗原（批號100929）和標準陽、陰性血清，由中國農科院蘭州獸醫研究所提供。

⑵ 豬瘟Dot-ELISA診斷試劑盒，中國農科院哈爾濱獸醫研究所提供。

⑶ 豬瘟抗體免疫會標試紙條。廈門市格林沃動物生物技術開發有限公司提供（試劑批號：20080618）。

1.2 血清樣品

在武威市某屠宰場隨機選擇10頭育肥豬，耳靜脈采集血清（編號A0-A9）1.5 mL～2 mL/頭；在武威市隨機選擇10頭產前2周母豬，耳靜脈采集血清（編號B0-B9）1.5 mL～2 mL/頭；隨機選擇10頭40日齡左右的仔豬，前腔靜脈采集血清（編號C0-C9）1.5 mL～2 mL/頭。

1.3 方法

1.3.1 正向間接血凝試驗

豬瘟診斷技術規程（NY/SY156—2000）規定進行操作。

1.3.2 Dot-ELISA法和免疫金標試紙檢測法

按照試驗說明操作。

1.4 試驗結果的統計分析

1.4.1 試驗數據表達方法

為了數據統計分析方便，規定文中提到的豬瘟間接血凝滴度用以2為底的對數log2表示，如豬瘟抗體滴度為l∶64，用log2表示，簡寫為6；Dot-ELISA滴度以1∶80為基數，設定為4，即1∶160表示為6；金標試紙條陽性用“+”表示。

1.4.2 陽性判定標準

間接血凝滴度≥4、Dot-ELISA滴度≥4、金標試紙條出現紅色檢測線，均表示結果為陽性。

2 結果

2.1 三種豬瘟抗體檢測方法比較試驗結果見表1

3 結果分析

（1）結果表明，間接血凝法、Dot-ELISA法和金標試紙條法的結果基本相同，其陽性率依次為90 %、86.7 %和80 %。金標試紙條法與間接血凝法相比，陽性率比較低，可能是因為金標試紙條是新開發的一種全新豬瘟抗體檢測方法，檢測時所用試劑（試劑批號：20080618）投入市場不久，在質量穩定性方面可能還存在一些問題。但間接血凝法與Dot-ELISA法相比，結果不一致的占3.3 %；與金標試紙條法相比，結果不一致占10 %。Dot-ELISA法與金標試紙條法相比，結果不一致的占6.7 %。經方差分析，三者之間差異均不顯著。

（2）從操作方面，免疫金標試紙條操作最為簡便，不需要儀器設備，樣品也不必進行預處理，可直接檢測豬全血或血清，減少了試驗過程中的人為誤差，反應時間短，可隨時隨地進行檢測。間接血凝實驗及Dot-ELISA實驗均需專門的試劑及具有一定經驗的專業實驗操作人員，所需時間均在3 h～4 h以上。間接血凝實驗結果可以到第2天再來觀察（室溫下或37 ℃靜置1.5 h～2 h，這個時間可以延長），實際操作時間可以較為靈活。Dot-ELISA實驗操作最為繁瑣.主要是快診膜不易做記號，易碎，不易剪，而且手不能碰及，否則會影響實驗結果。

（3）從經濟方面，Dot-ELISA試劑盒由于試劑一開瓶就必須全部用完，一盒可檢測50頭份左右，若只檢測10頭份也得全部用完試劑，造成很大浪費。間接血凝實驗可以根據檢測數量的多少來使用檢測試劑，較為節約。金標試紙條因為是一份血清用一張試紙條，所以不存在浪費問題。

4 結論

綜上所述，豬瘟抗體金標試紙檢測法具有結果直觀、操作方便、反映時間短等優勢，非常適合我市的小型養豬場和散養戶。可以隨時掌握近期豬場抗體水平，制定適合本場的免疫程序，以防豬瘟疫情發生，為我市畜牧業健康發展起到了重要的保障作用。□□

參考文獻：（3篇，略）