海馬等8種海洋中藥體外抗氧化活性的比較

林芳花等

摘要[目的]比較研究海馬等8種海洋中藥體外抗氧化活性。[方法]測定高錳酸鉀還原所需的氧化時間；采用光照核黃素產生超氧陰離子，并測定清除率；采用普魯士藍法測定總還原力。[結果] 氧化時間從短到長順序：海馬<海龍<海藻<龜甲膠<海螵蛸<龜甲<牡蠣<瓦楞子，其中海馬氧化時間21.2 s，與Vc相比無顯著差異（P>0.05）。超氧陰離子清除率大小順序：海螵蛸>龜甲膠>海龍>海馬>海藻>龜甲>牡蠣>瓦楞子，其中海螵蛸清除率42.21%，與Vc相比無顯著差異（P>0.05）。總還原力強弱順序：龜甲膠>海龍>海馬>海藻>牡蠣>海螵蛸>龜甲>瓦楞子。[結論]海馬、海龍、海螵蛸、海藻、龜甲和龜甲膠的抗氧化活性較高，但效果均不及Vc，瓦楞子、牡蠣抗氧化活性較低，龜甲膠抗氧化活性高于龜甲。

關鍵詞海馬；海洋藥物；抗氧化活性

中圖分類號S986.2文獻標識碼A文章編號0517-6611（2015）29-073-02

海洋中藥是指在中醫藥理論指導下用于防病治病和養生保健的物質，其來源包括生活于海水、海底泥灘或巖石、淺海沙灘的動物、植物及海洋中的礦物，也包括生活于海洋周圍的、以海洋生物為食的鳥類。《中藥大辭典》記載海洋中藥共134種，海洋中藥的研究、開發與應用滯后于陸地來源中藥。海洋生物生存環境特殊，具有陸地生物所沒有的化學成分，種類繁多、資源豐富，可再生性強，發展潛力巨大，近年來其研究熱點集中在海洋活性產物的研究與開發、海洋微生物的研究與開發、海洋生物基因工程技術等方面。健康長壽是人類幸福的永恒主題，而抗氧化延緩衰老是現代生物科學研究領域熱點之一[2-4]，目前有關海洋中藥抗氧化活性的研究報道較少。基于此，筆者研究并比較了8種常用海洋中藥的體外抗氧化活性，以初步評價其活性。

1材料與方法

1.1藥材

海馬等8種中藥于2014年10月購自廣東省惠州市惠城區北京同仁堂藥店，經惠州學院生命科學系林芳花副教授檢定，符合2010年版《中國藥典》質量要求，粉碎，過4號篩，備用。

1.2儀器

FA1104N電子天平（上海精天電子儀器有限公司，精度0.1 mg）、PH050型電熱恒溫干燥箱（上海實驗儀器廠）、HH4數顯恒溫水浴鍋（常州澳華儀器有限公司）、KH3200DB型數控超聲波清洗器（昆山禾創超聲儀器有限公司）、HSX250恒溫恒濕箱（上海申賢恒溫設備廠）、UV2450紫外-可見分光光度計（日本島津公司）、SPX300BG型光照培養箱（上海博訊實業有限公司）。

1.3試藥

維生素C（Vc）、無水乙醇、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、氮藍四唑（NBT）、核黃素、蛋氨酸、三氯乙酸、氯化鐵、鐵氰化鉀、高錳酸鉀、濃硫酸、鹽酸等均為分析純。

1.4試驗方法

1.4.1對照品溶液的制備。

取Vc 0.05 g，精密稱定后置于50 ml量瓶中，加水至刻度，使其溶解并搖勻，備用。

1.4.2樣品溶液的制備。

取藥材粉末各5 g，精密稱定后置于100 ml錐形瓶中，加入50%乙醇50 ml，靜置30 min，超聲處理（功率500 W，頻率40 kHz，50 ℃）30 min，過濾后將濾液置于50 ml量瓶中，加水至刻度后搖勻，備用。

1.4.3氧化時間的測定。

參照2010年版《中國藥典》方法并經適當改進，測定氧化時間。精密量取續濾液10 ml，置于具塞錐形瓶中，立即加入20%硫酸溶液2 ml，振蕩1 min，立即加入0.02 mol/L高錳酸鉀溶液0.05 ml，開始計時，直至溶液中紫紅色完全消退時停止。

1.4.4超氧陰離子清除率的測定。

參照文獻[6]的方法并適當改進，測定超氧陰離子清除率。以0.105 mol/L pH 74的PBS緩沖液為溶劑，配制1.67×10-5 mol/L核黃素，0.01 mol/L蛋氨酸，9.2×10-5 mol/L NBT。分別吸取上述3種溶液各2 ml，加入樣品溶液1.0 ml，置于光照培養箱中光照30 min，以緩沖液為對照，于波長560 nm處測定吸光度，按照以下公式計算超氧陰離子清除率：

超氧陰離子清除率（%）=（A0-A樣）/ A0×100%（1）

式中，A0為對照溶液的吸光度，A樣為樣品溶液的吸光度。

1.4.5總還原力的測定。

參照文獻[6]的方法并經適當改進，測定總還原力。取樣品溶液0.1 ml，加入0.2 mol/L pH 6.6磷酸鹽緩沖液2.5 ml，加入1%鐵氰化鉀K3[Fe（CN）6]溶液5.0 ml，置于50 ℃水浴中反應20 min，迅速冷卻，加入10%三氯乙酸溶液2.5 ml，混勻，3 000 r/min離心10 min。取上清液2.5 ml，加入水2.5 ml，加入0.1%的氯化鐵溶液0.5 ml并混勻，室溫下放置10 min，于波長700 nm處測定吸光度。

1.4.6數據統計與分析。

試驗數據以平均值±標準差（±s）表示，多組間樣本均數的比較采用方差分析，試驗數據使用SPSS 10.0統計軟件進行統計與分析。

2結果與分析

2.1氧化時間

高錳酸鉀發生還原反應，Mn7+變為Mn2+，溶液由紫紅色變為無色，褪色時間越短，表明待測樣品抗氧化活性越強。由表1可知，氧化時間順序為海馬<海龍<海藻<龜甲膠<海螵蛸<龜甲<牡蠣<瓦楞子，其中海馬所需時間最短，與Vc相比無顯著差異（P>0.05），海龍、海藻和龜甲膠的氧化時間較短，但與Vc相比差異顯著（P<0.05），海螵蛸、龜甲、牡蠣和瓦楞子的氧化時間較長，與Vc相比差異極顯著（P<0.01）。

2.2超氧陰離子清除率

超氧陰離子將NBT還原為藍紫色物質，在波長560 nm處有最大吸收峰，采用光照核黃素的方法產生超氧陰離子，在抗氧化劑作用下超氧陰離子因為發生歧化反應而減少，對NBT的還原作用減弱，測定吸光度，計算清除率，可以間接反映待測樣品的抗氧化活性。由表1可知，超氧陰離子清除率大小順序為海螵蛸>龜甲膠>海龍>海馬>海藻>龜甲>牡蠣>瓦楞子，其中海螵蛸清除能力最強，與Vc相比無顯著差異（P>0.05），龜甲膠、海龍、海馬、海藻、龜甲的清除能力較強，但與Vc相比有顯著差異（P<005），牡蠣和瓦楞子的清除能力較弱，與Vc相比差異極顯著（P<0.01）。

2.3總還原力

鐵氰化鉀還原成亞鐵氰化鉀，與Fe3+反應生成普魯士藍，在波長700 nm處有最大吸收峰，吸光度越大表示待測樣品的還原力越強，即抗氧化活性越高。總還原力強弱順序為龜甲膠>海龍>海馬>海藻>牡蠣>海螵蛸>龜甲>瓦楞子，8種樣品總還原力均弱于Vc。

3討論

筆者通過測定氧化時間、超氧陰離子清除率和總還原力，對比海馬等8種常用海洋中藥的體外抗氧化活性，用不同作用機制來評價其抗氧化活性。結果表明，海馬、海龍、海螵蛸、海藻、龜甲、龜甲膠的氧化時間較短，超氧陰離子清除率較高，總還原力也較強，表明其抗氧化活性較高，但總體上均弱于Vc，而瓦楞子和牡蠣的抗氧化活性較低。

謝學明等研究了龜甲石油醚、乙酸乙酯和乙醇提取部位的體外抗氧化活性，結果發現乙醇部位的抗氧化活性最高。黃春花等發現海南產龜板的抗氧化活性高于湖北漢陽產龜板，但未明確龜甲抗氧化活性成分，而龜甲膠的抗氧化活性研究尚未見報道。該試驗中龜甲和龜甲膠在氧化時間、超氧陰離子清除率、總還原力3個評價指標都表現出較高的抗氧化活性，且龜甲膠的抗氧化活性高于龜甲，分析其原因可能是龜甲膠經煎煮、濃縮后，單位重量中所含抗氧化活性成分多于龜甲，由于試驗條件和時間所限，筆者未對龜甲和龜甲膠的抗氧化活性成分進行深入研究。

參考文獻

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