免疫功能與食管鱗癌發生發展的關系研究

王光大 武中林 趙陽 劉亮 林妍

食管癌是較常見的惡性腫瘤，發病率及病死率高，威脅人們的生命健康［1］，目前就診的食管癌患者多為中晚期，喪失了最佳治療時期，早期診斷及治療對提高食管癌患者生存期及生活質量有重大意義。食管癌發生機制尚未闡明，有研究表明機體免疫功能與腫瘤的發生發展有一定關系［2－4］，本研究探討免疫功能與食管鱗癌發生發展關系，為該病的防治提供實驗基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集河北醫科大學第四醫院2008 年1 月至2009 年11 月80 例食管鱗狀細胞癌患者靜脈血，每例患者早晨空腹采靜脈血1 ml 肝素抗凝，標本離體6 h 內完成流式細胞術實驗。食管鱗狀細胞癌80例患者中男55 例，女25 例;年齡38 ～83 歲，平均年齡(58.38 ±6.70)歲，中位年齡58.5 歲。取80 例健康人志愿者作為對照組。結合CT 檢查對80 例食管鱗癌患者進行上中下段分組，上段4 例、中段55 例、下段21 例。2 組一般資料具有均衡性。

1.2 主要實驗儀器及試劑 Epics-XLⅡ型流式細胞儀，美國Beckman-Coulter 公司;CD4-FITC、CD8-PE、CD25-PE 抗體，美國Beckman-Coulter 公司。

1.3 流式細胞術方法檢測外周血CD4、CD8、CD25 細胞表達 取新鮮抗凝靜脈血400 μl，分別加入4 個試管中，每個試管100 μl，其中一試管中加入CD4-FITC及CD8-PE 抗體各20 μl，另一試管中加入CD4-FITC及CD25-PE 抗體各20 μl，剩余兩個試管中分別加入相對應的同型對照抗體。室溫下避光放置30 min，裂解紅細胞后上流式細胞儀檢測。

1.4 流式細胞儀檢測條件、參數及數據分析 采用美國Beckman Coulter 公司生產的Epics-XLⅡ型流式細胞儀，激發光源為15 mW 氬離子激光器，激發波長為488 nm，應用Expo 32 ADC 進行免疫熒光數據分析。檢測前以flow-checkTMFluorpheres(10 μm)熒光微球(REF 6605359.Beckman Coulter，Inc.Fullerton，CA 92835.)作為標準樣品調整儀器CV 值在2%以內。

1.5 統計學分析 應用SPSS 11.5 統計軟件，計量資料以± s 表示，采用t 檢驗，P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2組外周血中CD4+及CD8+T 細胞表達水平 研究組外周血CD4+T 細胞表達率與對照組相比顯著降低(P ＜0.01)，而研究組外周血中CD8+T 細胞表達率顯著高于對照組表達率(P ＜0.01)。見圖1。

圖1 正常人及食管癌患者外周血CD +4 及CD +8 T 細胞表達

圖2 正常人及食管癌患者外周血細胞表達

2.3 研究組外周血中CD+4、CD+8及細胞表達與不同臨床病理特征的關系 食管鱗癌患者外周血中CD+4、CD+8及細胞表達與患者的性別、年齡、細胞分化程度及食管癌的上中下段無顯著相關性(P ＞0.05)，與有無淋巴結轉移具有顯著相關性(P ＜0.05)。見表1。

表1 食管鱗癌患者外周血中CD+4 、CD+8及細胞表達與不同臨床病理特征的關系 ± s

表1 食管鱗癌患者外周血中CD+4 、CD+8及細胞表達與不同臨床病理特征的關系 ± s

項目 CD +4 T P 值 CD +8 T P 值 CD +4 CD +25T P值年齡(歲)≤60(n =45) 31.74 ±6.15 34.18 ±5.64 12.37 ±2.94＞60(n =35) 30.36 ±5.85 0.309 33.14 ±7.11 0.469 12.12 ±2.90 0.703性別男(n =55) 31.69 ±6.12 34.08 ±5.86 12.52 ±2.81女(n =25) 29.91 ±5.73 0.215 32.94 ±7.24 0.457 11.70 ±3.09 0.267細胞分化高/中(n =59) 31.37 ±6.03 33.89 ±5.68 12.56 ±2.90低(n =21) 30.46 ±6.09 0.556 33.29 ±7.95 0.711 11.41 ±2.83 0.120淋巴結轉移陽性(n =27) 28.82 ±4.42 35.70 ±5.62 13.37 ±2.75陰性(n =53) 32.31 ±6.41 0.013 32.72 ±6.45 0.037 11.70 ±2.84 0.014部位上/中段(n =59)31.08 ±6.22 34.05 ±5.51 12.34 ±3.04下段(n =21) 31.28 ±5.55 0.890 32.83 ±8.24 0.451 12.05 ±2.5 5 0.700

3 討論

食管癌是我國較常見的惡性腫瘤，河北省是食管癌的高發區，尤其是邯鄲的磁縣，食管癌的發病率及病死率較高，食管癌目前的常規治療方法包括手術、放療及化療，對于食管癌晚期患者治療效果均不佳，因此，食管癌的早期診斷、治療及防治對于提高食管癌患者的生存期及生活質量具有重大意義。機體的免疫功能對腫瘤的發生起到主動的預防和抑制作用，當機體的免疫功能發生紊亂有可能促進了腫瘤的發生及發展［5，6］。

流式細胞術發展于20 世紀70 年代，能夠快速對懸液中的單細胞或微粒進行定量分析和分選，由于其檢測速度快、精度高、數據客觀等優點，在生物醫學中得到了廣泛的應用［7］。流式細胞術檢測人抗凝靜脈血的淋巴細胞，也同樣具有檢測速度快、數據精確等優點，目前廣泛應用于臨床上患者免疫功能的檢測。調節性T 細胞是一類具有免疫抑制作用的T細胞，其不僅能抑制自身免疫性疾病的發生，還可能參與腫瘤免疫的調節，導致腫瘤免疫耐受。本課題利用流式細胞術檢測了食管癌患者外周靜脈血CD4+、CD8+及表達水平，從而評價患者免疫功能［7］，探討免疫功能與食管癌發生及發展的關系，為臨床上食管癌化療過程中免疫制劑的使用提供實驗基礎。

本試驗中檢測到食管鱗癌患者CD4+T 淋巴細胞與正常人相比顯著降低，而CD8+及表達水平顯著增高，提示食管鱗癌患者免疫功能低下，可能免疫功能紊亂在食管癌發生過程中起一定作用。同時分析了食管癌患者不同臨床參數與CD4+、CD8+及T 表達關系，發現，有淋巴結轉移者與無淋巴結轉移者相比，外周血CD4+T 淋巴細胞顯著降低，而CD8+及表達水平顯著增高，而與浸潤深度及細胞分化程度等無關。食管鱗癌患者免疫功能低下可能進一步促進遠處轉移。

綜合以上的研究顯示，機體的免疫功能可能與食管鱗癌發生、發展有一定的關系，調節機體的免疫力有利用臨床上食管鱗癌的治療。

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5 Reginato E，Wolf P，Hamblin MR.Immune response after photodynamic therapy increases anti-cancer and anti-bacterial effects.World J Immunol，2014，4:1-11.

6 Halvorsen EC，Mahmoud SM，Bennewith KL.Emerging roles of regulatory T cells in tumour progression and metastasis.Cancer Metastasis Rev，2014，33:1025-1041.

7 劉亮.流式細胞術在腫瘤免疫學中的應用.藥品評價，2012，9:46-48.